多重不對稱擴增介紹-文庫吧資料
2025-05-23 01:38本頁面
【正文】 前期 1020循環(huán)相當(dāng)于對稱擴增，單鏈 DNA在此之后才會出現(xiàn)，從而導(dǎo)致 PCR擴增循環(huán)數(shù)增加，靈敏度較對稱性擴增低。 不對稱 PCR優(yōu)缺點 優(yōu)點 ? 可以獲得大量 SSDNA，快速進行下游操作。這對引物分別稱為非限制性引物和限制性引物。 ? 目前也有文章提出使用統(tǒng)計學(xué)方法，利用 qPCR的數(shù)據(jù)建立一個模型，來預(yù)測引物與目標(biāo)序列的擴增效率。 引物擴增效率 ? 這個因素很重要，但也很籠統(tǒng)，它也許包含了上面提到的幾個因素，但更多的 因素還 不清楚 。 引物二聚體 ? 包括引物間的二聚體以及引物自身所形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，還有一類是第三方 DNA介導(dǎo)的二聚體，這些二聚體和非特異引物一樣都會干擾引物與目標(biāo)結(jié)合位點的競爭，影響擴增效率 。 ? 前期引物設(shè)計時減少最佳退火溫度的差異，最佳退火溫度的差異不超過 3~5176。 ? 導(dǎo)致不平衡的原因： 引物特異性； 最佳退火溫度不一致； 引物二聚體； 模板量不同； 引物擴增效率 引物特異性 ? 如果引物與體系中其他非目的基因片段結(jié)合能力更強，那么目的基因結(jié)合引物的能力就會受到競爭，從而導(dǎo)致擴增效率下降。所以
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