【正文】 洗和維護(hù)v 應(yīng)選擇風(fēng)速小于3m/s的晴朗天氣施藥v 施藥健康與安全v 按SOP中不同作物的田間施藥標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行樣品采集和運(yùn)輸、貯藏v 采樣方法選擇合適的采樣方法：隨機(jī)法、對(duì)角線法、五點(diǎn)法有選擇地，按劑量從小到大順序采樣避免在地頭或邊沿采樣（）v 采樣量及采樣部位按照附錄A《作物分類及采樣部位和推薦采樣量》及SOP中不同作物田間樣本采集與實(shí)驗(yàn)室樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程確定采樣部位和采樣量。中等個(gè)體的樣品（如豆莢），可在充分混合的田間樣品中隨機(jī)選取足夠量的樣品。樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后賦予每個(gè)樣品唯一編號(hào)。農(nóng)藥殘留試驗(yàn)背景資料調(diào)查表（SOP FT0501）農(nóng)藥收發(fā)、使用和保存記錄表（SOP FT0505）田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)（SOP ） 試驗(yàn)地點(diǎn)選擇（SOP ） 試驗(yàn)地信息和小區(qū)布置圖（SOP ）試驗(yàn)地耕種與管理歷史（SOP ）供試作物的耕作管理調(diào)查記錄表（SOP ）5 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)部分v 術(shù)語與定義最小檢出量（LOD）：指使檢測(cè)系統(tǒng)產(chǎn)生3倍噪音信號(hào)所需待測(cè)物的質(zhì)量(以ng為單位)。v 結(jié)果一般以兩、三位有效數(shù)字表達(dá)，回收率采用整數(shù)位的百分?jǐn)?shù)表示即可。明確——報(bào)告表述內(nèi)容應(yīng)數(shù)據(jù)充足、內(nèi)容詳盡、結(jié)論明確。v 樣品制備的目的 1）提高靈敏度和降低檢測(cè)限。樣品制備原理 主要是利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)特性差異，使其從對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來。 溶解度的大小很大程度上取決于農(nóng)藥分子所含官能團(tuán)的種類、數(shù)量、溶劑的性質(zhì)和其他外部因素。? 溶劑的選擇是關(guān)鍵。 振蕩提取法v 振蕩浸提法是最常用的一種方法。它是將樣品先進(jìn)行適當(dāng)?shù)那兴椋俜湃虢M織搗碎機(jī)中，加入適當(dāng)?shù)娜軇?，快速搗碎3~5min，過濾后進(jìn)行濃縮凈化。索式提取法v 用適當(dāng)?shù)奶崛∪軇┰谒魇教崛∑髦羞B續(xù)回流提取幾小時(shí)，獲得提取液。v 主要構(gòu)件有吹沸器、捕集管，氣相色譜儀v 操作步驟： 吹沸→捕集→解吸→GC分析2 液液提取法：常用于水樣或其他液體樣品中殘留農(nóng)藥的提取。v 液液分配提取效率的高低取決于化合物與提取溶劑的親和性、二相的體積比和提取次數(shù)三個(gè)因素。主要是利用分析物與基體中干擾物質(zhì)的理化特性的差異，將干擾物質(zhì)的量減少到能正常檢測(cè)目標(biāo)殘留農(nóng)藥的水平。常用四種吸附劑的比較吸附劑名稱主要成分活性強(qiáng)弱活化處理方法弗羅里硅土（Florisil)硫酸鎂與硅酸鈉作用生成的沉淀物適合脂肪含量高的樣品的凈化650℃烘烤3h ，干燥器存放。硅膠硅酸鈉溶液加入鹽酸而制得的溶膠沉淀物對(duì)糖等極性雜質(zhì)有較強(qiáng)吸附能力先110 ℃加熱1h，再加入0%~10%重量的水，混勻后使用。v 洗脫：以洗脫分析物而讓雜質(zhì)保留的溶劑（一般為混合淋洗液）梯度洗脫柱子，回收分析物。KD濃縮法v KD濃縮法是利用KD濃縮器直接濃縮到刻度試管中的方法，適合于中等體積(10~50mL)提取液的濃縮。三、樣品制備新技術(shù)1 固相提取法（SPE）v SPE利用顆粒細(xì)小的多孔固相吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物選擇性地吸附，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo) 化合物的目的。 反相萃?。何絼O性小于洗脫液極性，用于萃取中等極性到非極性化合物。固相萃取流程v 吸附柱的選擇：根據(jù)待分離對(duì)象的特點(diǎn)選擇合適的吸附柱。v 洗脫分析物：選擇合適的淋洗溶劑將保留在小柱中的目標(biāo)農(nóng)藥洗脫出來并收集。固相萃取的優(yōu)缺點(diǎn) 高的回收率和富集系數(shù) 不需要大量溶劑 萃取時(shí)間短（是液液萃取的1/2） 操作簡(jiǎn)單、快速、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 缺點(diǎn)：復(fù)雜樣品有時(shí)會(huì)堵塞填料空隙；復(fù)雜樣品的雜質(zhì)干擾等2 固相微萃?。⊿PME）v SPME是在SPE基礎(chǔ)上發(fā)展起來高效的樣品預(yù)處理技術(shù)。浸入樣品中，待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的涂層，當(dāng)吸附平衡后，與GC或HPLC聯(lián)用進(jìn)行分析測(cè)定。v 攪拌效率：有利于縮短平衡時(shí)間。3 基質(zhì)固相分散萃?。∕SPD）v MSPD是將樣品與吸附填料（與SPE吸附材料一致）一起混合研磨，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱，然后用不同的溶劑淋洗柱子，將各種待測(cè)物洗脫下來。免疫親和層析流程v 裝填親和層析柱v 加樣本v 樣本和抗體反應(yīng)v 洗去未結(jié)合的物質(zhì)v 再洗去疏松結(jié)合的物質(zhì)v 洗脫和抗體緊密結(jié)合的部分 免疫親和柱的優(yōu)缺點(diǎn) v 特異性強(qiáng)、凈化效率高 v 過程簡(jiǎn)單、統(tǒng)一 缺點(diǎn)： v 載體價(jià)格昂貴 v 特異性抗體難得 6 凝膠滲透色譜（GPC）GPC又稱為體積排阻色譜，是按溶質(zhì)分子的大小進(jìn)行分離的一種色譜技術(shù)。常用的洗脫溶劑有：二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、己烷等。v 適用于固體、半固體樣品的提取。（泵液、加溫加壓、萃取5min、收集） 溶劑瓶：4個(gè)； 萃取池：24個(gè)； 收集瓶：26個(gè) v 已被美國(guó)環(huán)保局（EPA）選定為推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法（EPA 3545, 1999）。在臨界點(diǎn)附近，壓力和溫度的微小變化都可以引起流體密度的很大變化，而超臨界流體的溶解度一般隨密度的增加而增加。SFC萃取流程 裝置：CO2儲(chǔ)存器、萃取管、萃取池、限流器、收集裝置、溫度控制裝置。 其他溶劑：加入少量極性溶劑可以改變流體對(duì)溶質(zhì)的溶解能力。? 分離過程有可能在接近室溫下完成，特別適用于熱敏性天然產(chǎn)物。具有如下特點(diǎn)：分析速度快（數(shù)分鐘~幾十分鐘）分離效率高（可分離復(fù)雜的多組分樣品）靈敏度高（1010~1012g）選擇性高（固定液、檢測(cè)器）適用范圍廣n 基本術(shù)語： 1．流出曲線和色譜峰 2．基線、噪音和漂移 3．保留值：色譜定性參數(shù) 4．色譜峰的區(qū)域?qū)挾龋荷V柱效參數(shù) 5. 選擇因子、分離度 n 分離理論： 1. 分配原理 2. 塔板理論 3. 速率理論11．流出曲線和色譜峰流出曲線（色譜圖）：電信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線色譜峰：流出曲線上突起部分12．基線、噪音和漂移基線：當(dāng)沒有待測(cè)組分進(jìn)入檢測(cè)器 時(shí)，反映檢測(cè)器噪音隨時(shí)間 變化的曲線。13．保留值：色譜定性參數(shù) 保留時(shí)間tR：從進(jìn)樣開始到組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí) 所需時(shí)間，即組分通過色譜柱所需要的時(shí)間。峰底：峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線。峰面積（A）：峰與峰底之間的面積。 R=。n 分配比k：又稱容量因子，指在一定溫度和壓力下，組分在兩相分配達(dá)平衡時(shí)，固定相和流動(dòng)相中的組分的質(zhì)量比。n 柱效越高，分離度R越大。n 分配系數(shù)在所有塔板上是常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無關(guān)。 速率理論及影響柱效率的因素 范弟姆特等的速率理論認(rèn)為：色譜峰擴(kuò)展的原因是受渦流擴(kuò)散、分子擴(kuò)散、氣流兩相間傳質(zhì)阻力的影響。n 縱向擴(kuò)散項(xiàng) B/μ=2Dm/ μ Dm為樣品組分在流動(dòng)相中的分子擴(kuò)散系數(shù)。n 最佳載氣流速μopt和最小理論塔板高度Hmin n 分離條件的優(yōu)化 1. 在柱長(zhǎng)一定的條件下，采用接近μopt的載氣流速，小內(nèi)徑的色譜柱，如果是填充柱就采用較小的填料粒度。 GC17A 日本島津 高級(jí)氣流控制(AFC)也可選擇手動(dòng)控制 可同時(shí)配置三個(gè)進(jìn)樣口可同時(shí)配置三個(gè)檢測(cè)器 可全部由工作站控制，也可用積分儀控制；主機(jī)有控制鍵盤。 常見問題：泄露問題 EPC：電子壓力傳感器和電子流量控制器n 流量控制準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好n 可實(shí)現(xiàn)載氣的多模式操作n 使儀器體積更小n 使自動(dòng)化程度更高n 儀器更省氣n 操作更安全進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣口結(jié)構(gòu)與技術(shù)指標(biāo)： 進(jìn)樣系統(tǒng)包括樣品引入裝置（注射器和自動(dòng)進(jìn)樣器）和汽化室。n 分流/不分流進(jìn)樣口：最常用的毛細(xì)管柱進(jìn)樣口。尤其適用于沸點(diǎn)范圍寬、或熱不穩(wěn)定的樣品，也常用于痕量分析（可進(jìn)行柱上濃縮）。n 裂解進(jìn)樣：在嚴(yán)格控制的高溫下將不能汽化或部分不能汽化的樣品裂解可汽化的小分子化合物，進(jìn)而用GC分析，適合于聚合物樣品或地礦樣品等。 溶劑聚焦：初始柱溫要比溶劑溫度至少低10℃。柱系統(tǒng) GC儀器的柱系統(tǒng)包括柱箱、色譜柱以及色譜柱與進(jìn)樣口和檢測(cè)器的連接頭。n 固定液：固定液的不同直接影響到待測(cè)組分的分離效能，固定液的選擇是色譜分析的關(guān)鍵環(huán)節(jié),其基本原則也是“相似相溶”原理。n 柱端伸出密封墊的長(zhǎng)度不同儀器有不同的規(guī)定，應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書確定。并放在相應(yīng)的柱包裝盒中。 積分型 檢測(cè)器 濃度型（TCD，ECD） 微分型 質(zhì)量型（FID，F(xiàn)PD，NPD）檢測(cè)器的性能指標(biāo)：n 噪音：在沒有樣品進(jìn)入檢測(cè)器的情況下，檢測(cè)器或放大器本身以及其他操作條件引起基線在短時(shí)間內(nèi)的起伏。 n 線性范圍：指被測(cè)組分的量與檢測(cè)器響應(yīng)信號(hào)成線性關(guān)系的范圍，通常用保持線性的最大進(jìn)樣量與最小檢出量的比值表示。n 影響靈敏度的因素： 檢測(cè)器的結(jié)構(gòu) 操作條件： 氫氣、載氣、空氣流速及其比例： 氫氣 40ml/min，空氣450ml/min 檢測(cè)器溫度：250~330℃ 尾吹氣流速: 2060ml/min 火焰光度檢測(cè)器（FPD）n 特點(diǎn)： 也稱硫、磷檢測(cè)器。 硫?yàn)V光片的波長(zhǎng)是394nm，呈藍(lán)紫色。含氮和磷化合物進(jìn)入銣珠周圍完全燃燒成游離基，這些游離基團(tuán)從氣化的銣原子獲得電子，向收集極遷移形成電流。n 與其他方法結(jié)合定性：氣相色譜與質(zhì)譜、光譜、核磁共振等儀器配合進(jìn)行未知組分定性。 特點(diǎn)：外標(biāo)法較為簡(jiǎn)便，不需要校正因子，但進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，操作條件也需嚴(yán)格控制。 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單但不準(zhǔn)確。 置于貯液器底部的輸液導(dǎo)管需安裝孔徑10181。n 高壓輸液泵： 多用不銹鋼、聚四氟乙烯材料制造，泵的活塞多采 用石英桿制成。 低壓洗脫：泵前混合 梯度洗脫 高壓洗脫：泵后混合。n 保護(hù)柱：保護(hù)分析柱的作用。m。n 特點(diǎn)： 靈敏度高：最小檢出量可達(dá)1012g。n 工作原理： 朗伯比爾定律：當(dāng)一束平行單色光輻射通過物質(zhì)溶液時(shí)，如果溶劑不吸收光，則溶液的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過溶液的距離成正比。 n 結(jié)構(gòu)： 紫外檢測(cè)器由光源、分光系統(tǒng)、流通池和檢測(cè)系統(tǒng)四大部分組成。 嚴(yán)防檢測(cè)器出口堵塞，導(dǎo)致壓力過高，石英測(cè)量池爆裂。熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器(fluorescence detector,FLD)靈敏度極高，最小檢出量可達(dá)1014g，具有良好的選擇性（具對(duì)稱共軛體系的分子），能夠避免不發(fā)熒光的成分干擾。n 結(jié)構(gòu) 熒光檢測(cè)器包括激發(fā)光源、選擇激發(fā)波長(zhǎng)用的單色器，流通池、選擇發(fā)射波長(zhǎng)用的單色器及光電檢測(cè)器。屬于通用型檢測(cè)器，對(duì)那些沒有紫外吸收或不能發(fā)出熒光但具有電活性的農(nóng)藥，可采用電化學(xué)檢測(cè)法。n 工作原理 當(dāng)一束光線通過一間充滿煙霧的房間就會(huì)發(fā)生光散射現(xiàn)象。n 結(jié)構(gòu) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器由霧化部件、流動(dòng)相蒸發(fā)部件、目標(biāo)化合物檢測(cè)系統(tǒng)三部分組成。n 流動(dòng)相蒸發(fā)趨向完全，信噪比上升。n 注意用超聲波清洗器定期在稀硝酸或甲醇中清洗過濾頭。n 在使用緩沖溶液做流動(dòng)相時(shí)，更換甲醇前，一定要用水將鹽沖洗干凈，否則鹽沉積可能導(dǎo)致色譜柱徹底堵塞報(bào)廢。用于化合物的定性、定量分析。 離子檢測(cè)器（Ion detector）：質(zhì)譜儀器中檢測(cè)離子豐度的部件。 質(zhì)量范圍（Mass range）：是評(píng)定質(zhì)譜儀器性能的參數(shù)之一。是質(zhì)譜儀器對(duì)樣品量感測(cè)能力的評(píng)定指標(biāo)。 質(zhì)荷比：離子質(zhì)量（以相對(duì)原子量單位計(jì)）與它所帶電荷的比值，寫作m/z或m/e。 質(zhì)譜的主要性能指標(biāo)1. 質(zhì)量范圍 取決于質(zhì)量分析器的類型，是儀器檔次的標(biāo)志之一。影響質(zhì)譜的數(shù)據(jù)采集質(zhì)量。： 單四極選擇離子掃描(SIM)靈敏度比全掃描(scan)高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。： 色譜柱流失、擴(kuò)散泵油蒸氣、樣品基質(zhì)、載 氣純度、隔墊流失、襯管污染、樣品殘留、離子源污染等。 直接進(jìn)樣：由進(jìn)樣桿和真空安全鎖定裝置構(gòu)成。 “軟”電離技術(shù)：電離能量較低，生成的碎片離子較少，如CI源、ESI、APCI。 缺點(diǎn)：樣品必須能氣化，不適于難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的樣品；有可能得不到分子量信息。 缺點(diǎn)：樣品必須能氣化；譜圖重復(fù)性不如EI源，沒有標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)；反應(yīng)試劑容易形成較高本底，影響檢測(cè)限；操作比EI源難一些，反應(yīng)試劑的壓力需要摸索。作用是將離子源產(chǎn)生的離子按照質(zhì)荷比m/z進(jìn)行分離檢測(cè)，得到化合物特征質(zhì)量信息。 有全掃描和選擇離子監(jiān)測(cè)兩種不同掃描模式，多配置EI和正、負(fù)CI離子源。 優(yōu)點(diǎn)：比Q的SIM選擇性更好，排除干擾能力更強(qiáng)，信噪比更高。 缺點(diǎn)：靈敏度較低。 優(yōu)點(diǎn)：掃描速度快、質(zhì)量范圍寬、分辨率高。 1 Torr=1mmHg==為什么要真空？ 運(yùn)動(dòng)的氣體分子，在發(fā)生相互作用之前所飛越的平均距離。 油擴(kuò)散泵或分子渦輪泵作為高真空泵，真空度達(dá)105~108Torr以下。4. 凡可用GC進(jìn)行殘留分析的農(nóng)藥品種都可以采用GCMS的方法。要求高真空；只允許有限的氣體進(jìn)入離子傳輸系統(tǒng)；測(cè)定質(zhì)量取決于m/