【正文】 液液分配色譜（鍵合相色譜） 離子交換色譜 空間排阻色譜根據(jù)固定相和流動(dòng)相相對(duì)極性有兩種操作 方式： 正相色譜：固定相流動(dòng)相 反相色譜：固定相流動(dòng)相2 高效液相色譜儀器及操作HPLC由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。 往復(fù)式柱塞泵 恒流泵 高壓輸液泵 注射泵 恒壓泵：氣動(dòng)放大泵 液缸內(nèi)不能進(jìn)入氣泡或進(jìn)入后要及時(shí)排出。應(yīng)定期清洗或棄掉。 噪聲低，對(duì)流動(dòng)相基本無相應(yīng)。 光源：由氘燈（195~400nm）和鎢燈（400~850nm）組成。n 工作原理 化合物受到入射光的照射后，吸收輻射能，發(fā)出比吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)的特征輻射，當(dāng)入射光停止照射時(shí)，特征輻射也很快消失，這種輻射光線就是熒光。主要有安培檢測(cè)器：以測(cè)量電解電流的大小為基礎(chǔ)。使用及注意事項(xiàng)：n 操作只涉及兩個(gè)參數(shù)，霧化載氣流壓力和蒸發(fā)器溫度。 進(jìn)樣系統(tǒng)的維護(hù)：n 使用指定的進(jìn)樣器，防止進(jìn)樣器針頭劃傷閥體。 MS的主要特點(diǎn)v 四大譜中，質(zhì)譜法是唯一可以確定分子式的方法；v 靈敏度高；v 根據(jù)各類有機(jī)化合物分子的斷裂規(guī)律，質(zhì)譜中的分子碎片離子峰提供了有關(guān)有關(guān)有機(jī)化合物的豐富信息。它描述儀器所能測(cè)量的最輕和最重離子之間的質(zhì)量范圍。 離子豐度：檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度。 4. 靈敏度一定進(jìn)樣量獲得的待測(cè)信號(hào)強(qiáng)度（signal，S）和噪聲信號(hào)強(qiáng)度（noise，N）之比S/N。質(zhì)譜儀基本配置質(zhì)譜儀的類型一般以質(zhì)量分析器區(qū)分。電子電離（Electron impact，EI）源：EI源是研究最早、技術(shù)最成熟、應(yīng)用最廣泛的離子源。電噴霧電離源（ESI）：ESI由大氣壓腔、真空接口和離子傳輸區(qū)構(gòu)成。 優(yōu)點(diǎn)：掃描速度快，靈敏度高，體積小。 飛行時(shí)間質(zhì)量分析器（TOFMS） 是最簡(jiǎn)單的質(zhì)量分析器，它與離子的飛行速度和質(zhì)量相關(guān)。1. 提供足夠的平均自由程； 2. 提供無碰撞的離子軌道； 3. 減少離子分子反應(yīng)； 4. 減少背景干擾，增加 靈敏度。 v 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的基本構(gòu)造 氣相色譜儀：進(jìn)樣、組分分離系統(tǒng) 接口：傳輸線、匹配器 質(zhì)譜：質(zhì)荷比分離、離子檢測(cè)器 計(jì)算機(jī)系統(tǒng)：操作系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理器v 氣相色譜儀特殊要求 1. 氣相色譜的流動(dòng)相：氦氣（%）；2. 選擇低流失的GCMS專用的色譜柱（250um）；3. 一般不配備氣相色譜儀常用的選擇性檢測(cè)器；4. 使用耐高溫、低流失的進(jìn)樣硅膠墊。v GCMS的特點(diǎn) 1. 氣相色譜作為進(jìn)樣系統(tǒng)，極大地提高了混合物的分離、定性、定量分析效率；2. 質(zhì)譜作為檢測(cè)器，解決了氣相色譜定性的局限性，既是一種通用型檢測(cè)器，又是有選擇性的檢測(cè)器；3. 可得到質(zhì)量、保留時(shí)間、強(qiáng)度三維信息。v 真空系統(tǒng) 什么叫真空？ 在質(zhì)譜真空中，常用Torr作為測(cè)量單位。 優(yōu)點(diǎn)：在不增加質(zhì)量分析器數(shù)量的前提下，就能達(dá)到10級(jí)MSMS的分析。 兩組電極間施加一定的直流電壓和射頻交流電壓， 最終只有共振離子能夠到達(dá)檢測(cè)器。CI源的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)：是獲得分子量信息的重要手段。 使用何種電離方式取決于：1. 樣品的狀態(tài)（液體、固體），極性、揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性；2. 需探尋的樣品信息類型（分子結(jié)構(gòu)或序列分析）電離技術(shù)： “硬”電離技術(shù)：電離能量較高，生成較多碎片離子，如EI源。： 在相同條件下，掃描質(zhì)量范圍越窄，靈敏度 越高。取決于質(zhì)量分析器的類型和結(jié)構(gòu)參數(shù)。 質(zhì)譜圖（Mass spectrums ）：以檢測(cè)器檢測(cè)到的離子信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，離子質(zhì)荷比為橫坐標(biāo)所作的條狀圖。多用于痕量混合物的定量分析。第三節(jié) 色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)1 質(zhì)譜（MS）技術(shù)質(zhì)譜技術(shù)是利用電磁學(xué)原理將化合物電離成具有不同質(zhì)量的離子，然后按其質(zhì)荷比（m/z）的大小分離，測(cè)量各種離子峰的強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)分離測(cè)定的一種方法。n 在分析柱前要加裝保護(hù)柱。 經(jīng)色譜柱分離的組分隨流動(dòng)相進(jìn)入霧化器中，利用高速氣流噴成一薄霧，霧化為微小液滴的流動(dòng)相進(jìn)入加熱的蒸發(fā)器蒸發(fā)，不揮發(fā)的目標(biāo)化合物微?；筮M(jìn)入光路發(fā)生光散射，散射光被光電倍增管捕獲檢測(cè)。電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器（electrochemical detector, ECh）是根據(jù)點(diǎn)化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的。 工作原理：令光線先通過樣品流通池，然后由一系列分光技術(shù)，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。 在選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，通常選擇該農(nóng)藥分子的最大吸收波長(zhǎng)，有時(shí)也綜合考慮流動(dòng)相雜質(zhì)的影響。 常用檢測(cè)器主要有：n 紫外可見光檢測(cè)器n 二極管陣列檢測(cè)器n 熒光檢測(cè)器n 電化學(xué)檢測(cè)器n 質(zhì)譜檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器紫外可見光檢測(cè)器紫可見光檢測(cè)器（ultravioletvisible detector,UVVIS）又稱紫外檢測(cè)器，是液相色譜儀應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，既可測(cè)190~350nm光譜范圍的紫外光吸收變化，又可向350~900nm光譜范圍延伸。是色譜儀的核心部分。n 脫氣裝置：在線脫氣裝置裝有加熱器、溫度調(diào)節(jié)器和磁力攪拌器。 面積歸一化法：樣品中所有組分全部流出色譜柱，并在色譜圖上都出現(xiàn)色譜峰，可以通過各組分的峰面積計(jì)算各組分的含量。n 雙柱、多柱定性：不同物質(zhì)在同一色譜柱上可能具有相同的保留值，用兩根或多根不同極性的色譜柱進(jìn)行分析，考察樣品的純物質(zhì)保留值的變化作為定性依據(jù)。n 結(jié)構(gòu)： 氫火焰：與FID檢測(cè)器類似 光度測(cè)定：包括石英窗、濾光片和光電倍增管n 工作原理： 從色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器的含硫或含磷化合物在富氫火焰中燃燒時(shí)，生成化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，并能發(fā)射出特征波長(zhǎng)的光，這些特征光譜再通過特征濾光片并放大記錄就能檢測(cè)硫和磷。n 最低檢測(cè)濃度（limit of quantification, LOQ)：用添加方法能檢測(cè)出待測(cè)物在樣品中的最低含量（以mg/kg為單位表示）。n 暫時(shí)不用的色譜柱從儀器上卸下后，柱兩端應(yīng)當(dāng)用一塊硅橡膠（可利用廢進(jìn)樣隔墊）堵上。常用的有U形和螺旋形，內(nèi)徑一般在2~4mm，~2m。 固定相聚焦：初始柱溫要低。分析精密度高，重現(xiàn)性好。 純度要求：% 凈化裝置：分子篩、變色硅膠 鋼瓶放置位置：實(shí)驗(yàn)室以外的安全地方n 氣路控制系統(tǒng) 氣路控制系統(tǒng)的好壞直接影響分析重現(xiàn)性。 薄的液膜和大的擴(kuò)散系數(shù)（或在較高柱溫下）有利于傳質(zhì)。塔板理論的缺點(diǎn)：n 快速平衡的假設(shè)是難以實(shí)現(xiàn)的；n 流動(dòng)相的不連續(xù)流動(dòng)是不符合實(shí)際的；n 忽略了因濃度差等因素引起的縱向擴(kuò)散；n 流出曲線方程未能描述色譜參數(shù)如載氣流速、固定相性質(zhì)等對(duì)峰展寬的影響。n 色譜柱越長(zhǎng)，分離度R越高。 分離度R：兩個(gè)相鄰組分的保留值之差與其平均峰寬之比。 tR’= tR t014. 色譜柱效參數(shù)色譜峰：色譜柱流出組分通過檢測(cè)器時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)曲線。第四章 農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)技術(shù)第一節(jié) 氣相色譜檢測(cè)方法及應(yīng)用 氣相色譜基本原理氣相色譜是一種分離技術(shù)，是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來實(shí)現(xiàn)混合物的分離。 萃取時(shí)間：與被萃取物質(zhì)在流體中的溶解度及其傳質(zhì)速率呈正向相關(guān)。v SF是介于氣液之間的一種物質(zhì)，只能在物質(zhì)的溫度和壓力超過臨界點(diǎn)事才能存在。v 原理是選擇合適的溶劑、通過提高溫度(50~200℃)和壓力（~）來加快萃取速度，提高萃取效率。是將抗體與惰性微珠（如，瓊脂糖、纖維素）共價(jià)結(jié)合，然后裝柱，將抗原溶液過免疫親和柱，非目標(biāo)化合物不保留，最后用洗脫緩沖液洗脫抗原，從而得到純化的抗原。固相微萃取的影響因素v 固相涂層的性質(zhì)：非極性固相涂層（聚二甲基硅氧烷）；極性固相涂層（聚丙烯酸酯）v 液膜厚度：液膜越厚，吸附量越大，但平衡時(shí)間越長(zhǎng)。 流速：樣品溶液的流速一般不超過5mL/min。如SAX，SCX等。氮?dú)獯蹈煞╲ 氮?dú)獯蹈煞ㄊ侵苯永玫獨(dú)饬鬏p緩吹拂提取液及提高水浴溫度，加速溶劑的蒸發(fā)速度來濃縮樣品，可以有效防止氧化反應(yīng)但只適合于小體積濃縮。v 上樣：將用溶劑稀釋的樣品溶液加在柱上，使樣品通過柱子。 吸附劑的基本要求：具有較大的比表面；適宜的表面孔徑和吸附活性；粒度分布范圍盡量窄，并具有一定的強(qiáng)度。v 常用的二相溶劑對(duì)系統(tǒng)有：乙酸乙酯水、二氯甲烷水，石油醚水、石油醚丙酮等。在超聲波清洗槽中裝入一定量的水，將裝有樣品和提取溶劑的玻璃瓶放入其中，提取溶劑的液面要與槽中水面齊平。 常用提取方法有振蕩法、搗碎法、超聲波法、索氏提取法、吹掃捕集法。 常用溶劑的極性大?。? 己烷（石油醚）苯乙醚氯仿二氯甲烷丙酮乙酸乙酯乙腈二甲亞砜甲醇水 2）溶解性 指農(nóng)藥在水相和有機(jī)相中的溶解能力。包括從樣品中提取殘留農(nóng)藥，濃縮提取液和去除提取液中干擾性雜質(zhì)的分離凈化等步驟，是將實(shí)驗(yàn)室樣品處理成適合測(cè)定的檢測(cè)溶液的過程。v 當(dāng)檢測(cè)值低于LOQ時(shí)，應(yīng)寫LOQ值v 應(yīng)真實(shí)記載實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，分別計(jì)算各樣品重復(fù)檢測(cè)值和平均值，不能用回收率校正。 v 樣品包裝和貯藏采集的每個(gè)樣品應(yīng)寫好標(biāo)簽，24h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。處理重復(fù)：每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)小區(qū)面積：糧食作為≥30 m2，葉菜類蔬菜≥15 m2，果樹不少于2棵。殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象：可食部分、植株。，做好標(biāo)記。●二地：其它作物。田間樣品：按照規(guī)定的方法在田間采集的樣品。5 農(nóng)藥殘留檢測(cè)的特點(diǎn)與程序v 農(nóng)藥殘留分析的特點(diǎn) 痕量性（ ng、pg、fg）； 復(fù)雜性 多樣性v 農(nóng)藥殘留分析的程序 樣品采集 樣品制備 樣品分析 質(zhì)量控制與數(shù)據(jù)處理農(nóng)藥殘留分析的發(fā)展和任務(wù)v 安全、環(huán)保、高效、經(jīng)濟(jì)；v 樣品處理新技術(shù)——SPE,SFE,ASE,GPCv 檢測(cè)新技術(shù)——GC,HPLC,聯(lián)用技術(shù) v 快速檢測(cè)技術(shù)——多殘留分析，快速篩選v 方法的標(biāo)準(zhǔn)化；v 監(jiān)測(cè)和管理的完善。v 1982年10月，《農(nóng)藥安全使用規(guī)定》。v 加強(qiáng)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)者的教育，合理用藥。農(nóng)藥進(jìn)入水環(huán)境的途徑v 農(nóng)藥直接施入水體。 農(nóng)藥主要是通過生態(tài)系統(tǒng)中的環(huán)境介質(zhì)（大氣、土壤、水）進(jìn)入生態(tài)系統(tǒng)中，進(jìn)而影響整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)。 可提取殘留 結(jié)合殘留：化學(xué)鍵合或物理結(jié)合 不可提取殘留 軛合殘留：酶作用4 農(nóng)藥殘留毒性 因攝入或長(zhǎng)時(shí)間重復(fù)暴露農(nóng)藥殘留而對(duì)人、畜以及有益生物產(chǎn)生的急性中毒或慢性毒害。v 遷移：施于土壤或植物體時(shí)，一部分農(nóng)藥會(huì)通過各種途徑進(jìn)入氣相或通過地表徑流和淋溶的方式沉積。v 施用后，沉積在作物表面或土壤表面的農(nóng)藥通過揮發(fā)和蒸發(fā)作用進(jìn)入大氣。v 農(nóng)藥被植物根部吸收后轉(zhuǎn)移至食物中。2 農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)v 最大殘留限量（MRL，maximun residue limit）是指法定允許在食用農(nóng)產(chǎn)品和動(dòng)物飼料中一種化合物殘留的最大濃度（用mg/kg 來表示)。我國(guó)新農(nóng)藥登記資料要求田間試驗(yàn)階段：（不得銷售）v 產(chǎn)品化學(xué)資料（有效成分，物化參數(shù)，分析方法等）v 毒理學(xué)資料（急性毒性）v 藥效資料（室內(nèi)活性測(cè)定，試驗(yàn)作物、防治對(duì)象、施藥方法）v 其他資料（已有的田間藥效、殘留、環(huán)境生態(tài)試驗(yàn)和登記情況）臨時(shí)登記階段（試銷，有效期1年，可續(xù)展，不得超過4年）v 產(chǎn)品化學(xué)資料（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)）v 毒理學(xué)資料（急性毒性試驗(yàn)報(bào)告、眼睛皮膚刺激性試驗(yàn)報(bào)告、致敏性試驗(yàn)報(bào)告、亞慢性試驗(yàn)報(bào)告、致突變性試驗(yàn)報(bào)告等）v 藥效資料（室內(nèi)活性測(cè)定報(bào)告、2年4地室外藥效報(bào)告）v 殘留資料（可在臨時(shí)登記期間進(jìn)行）v 環(huán)境生態(tài)資料（魚、鳥、蜜蜂、家蠶的毒性試驗(yàn)報(bào)告）v 標(biāo)簽、說明書v 其他資料（在其他國(guó)家或地區(qū)的登記情況）正式登記階段（有效期5年，可續(xù)展）v 產(chǎn)品化學(xué)資料（2年常溫穩(wěn)定性試驗(yàn)報(bào)告）v 毒理學(xué)資料（人群接觸毒性、主要雜質(zhì)毒性、在動(dòng)物體內(nèi)的代謝、每日允許攝入量等）v 藥效資料v 殘留資料（2年2（3）地殘留試驗(yàn)報(bào)告）v 環(huán)境生態(tài)資料（環(huán)境行為特征、非靶標(biāo)生物毒性v 規(guī)范的標(biāo)簽、說明書4 農(nóng)藥安全性評(píng)價(jià)v 健康安全評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)登記產(chǎn)品在推薦施藥條件下對(duì)人的健康風(fēng)險(xiǎn)。v 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)部分 方法確定；樣品檢測(cè)；數(shù)據(jù)處理；記錄。4 田間試驗(yàn)部分田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)是農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的前提和基礎(chǔ)。試驗(yàn)前了解試驗(yàn)地的土壤類型、用藥歷史等。g(ai)/ha或mg/kg施藥次數(shù)：設(shè)兩個(gè)施藥次數(shù)（除草劑、土壤處理劑、種子處理劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等可不增加次數(shù)）施藥間隔：依據(jù)推薦的施藥間隔或藥效試驗(yàn)結(jié)果。土壤（水）試驗(yàn)：可在種植地附近選擇一塊土質(zhì)相同的空白地進(jìn)行。v 樣品縮分按照SOP中各種作物樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程縮分。檢測(cè)后的樣品需保存至少半年時(shí)間，以供復(fù)檢。v 消解動(dòng)態(tài)和半衰期 動(dòng)態(tài)方程： CT=C0 3）提高方法的選擇性。二、樣品制備常規(guī)技術(shù)1 提取技術(shù) 提?。╡xtraction）是指通過溶解、吸著或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來的操作步驟，也稱為萃取。v 適用于土壤、