【正文】 谷物等樣品中農(nóng)藥的提取。不適合于熱不穩(wěn)定農(nóng)藥的提取。 破除乳化的方法：v 離心(2000rpm，2min）v 過濾（濾紙或無水硫酸鈉）v 在水相中加入一定量的鹽（氯化鈉或其水溶液）v 加入少量不同的有機(jī)溶劑（無水乙醇） v 在振搖時，采用輕緩地向一個方向振搖的方式。氧化鋁(alumina)氧化鋁（酸性、中性、堿性）對色素、脂肪、蠟質(zhì)有較強(qiáng)吸附能力柱層析法操作步驟：先550 ℃加熱4h，用前130 ℃活化12h。 常用的濃縮方法有：v 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法v KD濃縮法v 氮?dú)獯蹈煞?減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法v 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法是利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在較低溫度下使大體積（50~500mL）提取液得到快速濃縮的方法，操作方便，但殘留農(nóng)藥容易損失，且樣品還須轉(zhuǎn)移、定容。固相萃取分離模式v 正相萃?。何絼O性大于洗脫液極性，用于萃取極性物質(zhì)。v 加樣：將已經(jīng)濃縮后的樣品采用適當(dāng)溶劑溶解后加入到吸附小柱上。v SPME不是將待測物全部分離出來，而是通過殘留農(nóng)藥在樣品與固相涂層之間的平衡來達(dá)到分離目的。v 鹽的作用和溶液酸度：可改變被分離物質(zhì)在水中的溶解度，提高靈敏度。v 凝膠類型： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（Sephadex LH20 ) 交聯(lián)聚苯乙烯凝膠（BioBeads SX）。ASE的裝置和流程v 裝置：由溶劑瓶、泵、氣路、加熱爐、萃取池和收集瓶等構(gòu)成。常用的超臨界流體：CONH乙烯等。SFC的優(yōu)點(diǎn)和不足：? 適應(yīng)性廣泛、操作簡單、提取效率高。（儀器越好，噪音越小） 漂移：基線向某個方向穩(wěn)定移動。峰寬（W）：在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)間的距離。n 分配系數(shù)K：是指在一定溫度和壓力下組分在固定液和流動相之間分配達(dá)到平衡時的濃度之比值。n 載氣進(jìn)入色譜柱不是連續(xù)進(jìn)行的，而是脈動式，每次進(jìn)氣為一個塔板體積。 n 渦流擴(kuò)散項 A=2λdp λ為反映柱填充狀態(tài)的系數(shù)，對于給定的色譜柱； dp為填料的顆粒直徑。 氣相色譜儀器及操作儀器的基本配置：n 氣路系統(tǒng)：高壓鋼瓶、減壓閥、凈化管、穩(wěn)壓閥、壓力表、流量計等。n 惰性：不對樣品發(fā)生吸附作用或化學(xué)反應(yīng)。n 大體積進(jìn)樣：采用程序升溫汽化或冷柱上進(jìn)樣口，配合以溶劑放空功能，進(jìn)樣量可達(dá)幾百微升，可大大提高分析靈敏度，在環(huán)境分析中應(yīng)用廣泛，但操作較為復(fù)雜。n 隔墊和襯管 要選擇耐高溫的隔墊，并定期檢查是否漏氣，需要時及時更換。色譜柱操作注意事項：色譜柱安裝：n 先將密封墊套在柱頭，此時應(yīng)將柱頭朝下，避免密封墊碎屑進(jìn)入柱管造成堵塞。n 使用時不能超過柱子的最高使用溫度。n 結(jié)構(gòu)： 離子室（主體） 石英噴嘴 極化極和收集部件n 工作原理： 是一個化學(xué)電離的過程，有機(jī)物在火焰中燃燒生成自由基，然后與氧產(chǎn)生正離子，再同水反應(yīng)生成H3O+離子。n 影響靈敏度的因素： 濾光片類型 氫氣、空氣流速及其比例：氫氣75ml/min，空氣100ml/min 尾吹氣流速： 3060ml/min 檢測器溫度：250℃n 工作原理： 銣珠被加熱后，銣珠的周圍有揮發(fā)的銣原子，處于熱激發(fā)狀態(tài)。 常用的定量方法： 外標(biāo)法：已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品與待測樣品在完全相同的條件下進(jìn)行色譜分析，以兩者的峰高或峰面積的比較計算樣品的 濃度。柱塞密封墊是易損件，泵漏液時必須更換。n 分析柱：通常為優(yōu)質(zhì)不銹鋼制成，內(nèi)徑均勻，拋光，五軸向溝槽。 屬于選擇性檢測器，對無紫外吸收的物質(zhì)五相應(yīng)。 分光系統(tǒng)：包括聚光鏡、狹縫機(jī)構(gòu)和單色器（光柵）。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光，產(chǎn)生的熒光稱為發(fā)射光（一般為可見光）。電導(dǎo)檢測器：以測量液體的電阻變化為根據(jù)。n 霧化載氣流壓力影響霧化器中液滴的形成，信噪比隨壓力升高而升高。n 在農(nóng)藥殘留分析周期內(nèi)，不要進(jìn)行有干擾的常量分析。質(zhì)譜的重要名詞和術(shù)語 離子源（Ion Sourse）：質(zhì)譜儀器中使樣品電離生成離子的部件。 分辨率（Resolution,R）：在給定樣品的條件下，儀器對相鄰兩個質(zhì)量峰的區(qū)分能力。 離子相對豐度：以質(zhì)譜圖中指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)最強(qiáng)峰（基峰）為100%，其他離子峰對其歸一化所得的強(qiáng)度。噪聲一般是指檢測器基線的波動或漂移產(chǎn)生的背景信號，是儀器固有的電噪聲，但在實(shí)際中還要考慮儀器污染、樣品基質(zhì)、色譜柱流失等產(chǎn)生的干擾信號。 以質(zhì)量范圍大小和分辨率高低劃分儀器檔次： 低檔儀器：質(zhì)量范圍1000，低分辨率（500~1000） 中檔儀器：質(zhì)量范圍達(dá)4000，中分辨率（5000） 高檔儀器：質(zhì)量范圍4000，高分辨率（10000） 質(zhì)譜儀通常由進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源、質(zhì)量分析器、離子檢測器和記錄系統(tǒng)及高真空系統(tǒng)等部分組成。 主要由電離室（離子盒）、燈絲、離子聚焦透鏡和一對磁極組成。 原理：ESI是在高靜電梯度下，使樣品溶液發(fā)生靜電噴霧，在干燥氣流中，形成帶電霧滴，隨著溶劑的蒸發(fā)，通過離子蒸發(fā)等機(jī)制，生成氣態(tài)離子，以進(jìn)行質(zhì)譜分析的過程。 缺點(diǎn)：是分辨率較低。 線性同軸的飛行試劑質(zhì)量分析器由一段無場的飛行管構(gòu)成。 5. 延長燈絲壽命；高真空系統(tǒng)一般由機(jī)械泵和油擴(kuò)散泵或分子渦輪泵串聯(lián)組成。v 接口技術(shù) 分流型接口 噴射式分子分離器 直接導(dǎo)入型接口：由一根金屬導(dǎo)管和加熱套以及溫度控制和測溫元件組成。 不利條件：兩者的工作壓強(qiáng)不同。 檢測器有法拉第杯、閃爍計數(shù)器、電子倍增器和光電倍增管等。 也是利用交變的高頻電場使離子源注入的離子產(chǎn)生振蕩，先將離子儲存在“肼”里，然后改變電場按不同質(zhì)荷比將離子推出“肼”外進(jìn)行檢測。 單四極桿質(zhì)量分析器（single quadrupole，Q） 由四根嚴(yán)格平行并與中心軸等間隔的雙曲面柱狀或圓柱形電極構(gòu)成的正、負(fù)兩組電極組成。 原理是利用高能量的電子（100eV）轟擊反應(yīng)氣體（甲烷、異甲烷、氨氣等），使之電離，電離后的反應(yīng)分子再與有機(jī)化合物樣品分子發(fā)生碰撞，進(jìn)行分子離子反應(yīng)而生成樣品分子離子的一種軟電離方法。v 離子源或電離室 離子源的作用是使試樣中的原子、分子轉(zhuǎn)化成離子，是質(zhì)譜儀的核心，直接影響質(zhì)譜儀的靈敏度和分辨能力。： 真空狀態(tài)不好，靈敏度會下降，會導(dǎo)致儀器污染，甚至無法正常運(yùn)轉(zhuǎn)。3. 掃描速度掃描速度是指質(zhì)譜進(jìn)行質(zhì)量掃描的速度，定義為每秒鐘掃描的最大質(zhì)量數(shù)。在色譜質(zhì)譜聯(lián)用時，相當(dāng)于色譜圖。 選擇離子檢測（Selected ion monitoring,SIM）：選擇能夠表征該成分的一個或幾個質(zhì)譜峰進(jìn)行檢測。n 拆卸后的色譜柱兩端用盲頭螺絲擰緊，防止封存的溶劑揮發(fā)。s/cm通用能106109無低光散射高效液相色譜儀的日常維護(hù)對流動相的要求：n 。理論上可以檢測揮發(fā)性低于流動相的所有化合物。 常用于熒光檢測器檢測的農(nóng)藥品種有苯并咪唑類農(nóng)藥、甲基吡惡磷、多菌靈、涕必靈等?？梢宰龀鋈我鈺r間下的吸光度波長曲線。 待測農(nóng)藥對紫外光吸收的特性取決于農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)（存在生色團(tuán)、助色團(tuán)（羥基、胺基等））。功能是將物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)變?yōu)榭商幚淼碾娦盘枴? 直接注射器進(jìn)樣 進(jìn)樣技術(shù) 停留進(jìn)樣 閥進(jìn)樣：裝有定量管、分析柱及柱恒溫箱。 流動相在轉(zhuǎn)入貯液器前必須過濾（）和脫氣（在線脫氣和離線脫氣）。 特點(diǎn)：準(zhǔn)確性較高，對儀器操作條件要求不高，但具體操作較麻煩。 氫氣、空氣流速及其比例： 氫氣3ml/min，空氣60ml/min常用GC檢測器的特點(diǎn)和技術(shù)指標(biāo)檢測器類型最高操作溫度/℃最低檢出限/g/s線性范圍主要用途FIDECDNPDFPD質(zhì)量型通用型濃度型選擇型質(zhì)量型選擇型質(zhì)量型選擇型4504004002501010~10111013~10141012~10131011~1012107 104105硫 105磷 106 適用于各種有機(jī)化合物的分析適合分析含電負(fù)性元素的有機(jī)化合物適合于含氮或磷的化合物適合于含硫或磷的化合物 定性與定量分析定性分析：n 利用保留值的定性分析： 利用已知純物質(zhì)對照定性，在一定操作條件下，任何組分都有一個確定的保留值。廣泛用于有機(jī)磷和有機(jī)硫農(nóng)藥殘留量的測定。n 最小檢出量（limit of detection, LOD)：檢測系統(tǒng)產(chǎn)生3倍噪音信號所需待測物的質(zhì)量（以ng為單位表示。色譜柱的老化：先接通載氣，然后將柱溫從60℃以5~10 ℃的速率程序升溫到色譜柱的最高使用溫度以下30 ℃或者實(shí)際操作溫度以上30 ℃，并在高溫時恒溫30~120min，直到所記錄的基線穩(wěn)定為止。色譜柱的類型與選擇： 填充柱色譜柱 填充型 毛細(xì)管柱 涂壁開管柱（WCOT） 開管型 多孔層開管柱（PLOT）填充柱n 色譜柱的材料和形狀：色譜柱可用玻璃管、不銹鋼管等材料制成。n 進(jìn)樣口對峰展寬的影響： 一般地講，進(jìn)樣量小一些、進(jìn)樣口溫度高一些、載氣流速快一些、汽化室體積小一些、分流比大一些都對窄的初始譜帶寬度有利。n 冷柱上進(jìn)樣口：樣品以液體形態(tài)直接進(jìn)入色譜柱，無分流歧視問題。 氣路系統(tǒng)n 氣源：就是為GC提供載氣或輔助氣體的高壓鋼瓶或氣體發(fā)生器。n 傳質(zhì)阻力項 Cμ=(Cm+Cs) μ 傳質(zhì)阻力項與載氣流速成正比，流速越快越不利于平衡的建立。在氣相色譜中，一般n約103~106，因而這時的流出曲線可趨于正態(tài)分布。理論塔板高度H——為使組分在柱內(nèi)兩相間達(dá)到 一次分配平衡所需要的柱長 理論塔板數(shù)n——組分流過色譜柱時，在兩相間 進(jìn)行平衡分配的總次數(shù)n 理論塔板數(shù)或理論塔板高度可衡量柱效，n越大或H越小，則柱效越高。 α越大，兩組分越容易分離。調(diào)整保留時間tR’：組分的保留時間與死時間之差值，即組分在固定相中滯留的時間。不足：但是必須在高壓下操作，設(shè)備及工藝技術(shù)要求高，投資比較大。 溫度：影響萃取劑的密度和溶質(zhì)的蒸汽壓。 幾種萃取技術(shù)的比較技術(shù)樣品大小/g溶劑體積/mL平均萃取時間索氏提取10~30300~5004~48h超聲提取30100~300~1h微波提取530~1hASE10~3015~4512~20min8 超臨界流體提取法（SFE）v SFE是利用超臨界流體（SF）密度大、粘度低、擴(kuò)散系數(shù)大、兼有氣體的滲透性和液體的分配作用的性質(zhì)，將樣品中的待測物質(zhì)溶解并從基體中分離出來，同時完成萃取和分離操作的技術(shù)。 7 加速溶劑萃取（ASE）v 1995年，推出的一種新的全自動提取技術(shù)。 v 其核心技術(shù)是凈化材料或萃取劑能夠選擇性地吸附樣品溶液中的目標(biāo)化合物或干擾物質(zhì)，以達(dá)到凈化樣品的目的，PSA優(yōu)點(diǎn)： v 快速、簡單、廉價、有效、可靠、安全（Quick, easy, cheap,effective, rugged and safe） 缺點(diǎn)： v PSA價格較貴，不適合大批量農(nóng)藥殘留的檢測 v 濃縮倍數(shù)小，需要靈敏度高的檢測儀器，如UPLCMSMS 5 免疫親和層析（IAC）v IAC是以抗原抗體中的一方作為配基，親和吸附另一方的分離系統(tǒng)。v 解吸：高溫解吸（GC）或溶劑洗脫（HPLC）v 纖維的老化和清洗：。 淋洗劑選擇：與目標(biāo)化合物性質(zhì)及吸附劑有關(guān)。 離子交換萃?。何絼┒际菐в须姾傻碾x子交換樹脂，用于萃取帶有電荷的化合物。但只適用于少量體積的的樣品，且操作較煩瑣。柱層析法操作步驟：v 裝柱（濕法或干法，一般2~10g）：用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ鯓O性）預(yù)淋柱子，讓柱處于濕潤和適于接受溶液的狀態(tài)。 原理是將提取液中的農(nóng)藥和雜質(zhì)一起通過一支裝有吸附劑的層析柱，它們即被吸附在具有表面活性的吸附劑上，然后用溶劑進(jìn)行淋洗，以達(dá)到目標(biāo)物與雜質(zhì)分離的目的。通常使用的是分液漏斗。超聲波法v 目前一般是用超聲波清洗機(jī)來進(jìn)行超聲波提取。v 常用的提取溶劑： 石油醚、正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、甲醇、水等v 提取方法 液固提取法：將固體放入提取劑中，加以振蕩，必要時加熱，再利用離心或過濾的方法使液、固分離，欲提取的農(nóng)藥組分進(jìn)入溶劑。1）極性：共價鍵電子密度不均衡分布結(jié)果產(chǎn)生了鍵偶極。（術(shù)語使用；量、單位及符號；數(shù)值；引用數(shù)據(jù)）第三章 農(nóng)藥殘留分析的前處理技術(shù)一、樣品制備的目的和原理樣品制備（sample preparation）是農(nóng)藥殘留分析方法的重要部分。方法性能指標(biāo)：靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度檢測方法研究v 方法選擇： 查文獻(xiàn)/化合物理化性質(zhì)/分析儀器/方法評價v 最低檢測濃度： MRL /儀器方法/前處理方法v 標(biāo)準(zhǔn)曲線：至少5個濃度v 回收率：至少2個添加濃度，5個重復(fù)v 精密度：相對標(biāo)準(zhǔn)偏