【正文】 4. 凡可用GC進行殘留分析的農(nóng)藥品種都可以采用GCMS的方法。 1 Torr=1mmHg==為什么要真空？ 運動的氣體分子，在發(fā)生相互作用之前所飛越的平均距離。 缺點：靈敏度較低。 有全掃描和選擇離子監(jiān)測兩種不同掃描模式，多配置EI和正、負CI離子源。 缺點：樣品必須能氣化；譜圖重復(fù)性不如EI源，沒有標準譜庫；反應(yīng)試劑容易形成較高本底，影響檢測限；操作比EI源難一些，反應(yīng)試劑的壓力需要摸索。 “軟”電離技術(shù)：電離能量較低，生成的碎片離子較少，如CI源、ESI、APCI。： 色譜柱流失、擴散泵油蒸氣、樣品基質(zhì)、載 氣純度、隔墊流失、襯管污染、樣品殘留、離子源污染等。影響質(zhì)譜的數(shù)據(jù)采集質(zhì)量。 質(zhì)荷比：離子質(zhì)量（以相對原子量單位計）與它所帶電荷的比值，寫作m/z或m/e。 質(zhì)量范圍（Mass range）：是評定質(zhì)譜儀器性能的參數(shù)之一。用于化合物的定性、定量分析。n 注意用超聲波清洗器定期在稀硝酸或甲醇中清洗過濾頭。n 結(jié)構(gòu) 蒸發(fā)光散射檢測器由霧化部件、流動相蒸發(fā)部件、目標化合物檢測系統(tǒng)三部分組成。屬于通用型檢測器，對那些沒有紫外吸收或不能發(fā)出熒光但具有電活性的農(nóng)藥，可采用電化學(xué)檢測法。熒光檢測器熒光檢測器(fluorescence detector,FLD)靈敏度極高，最小檢出量可達1014g，具有良好的選擇性（具對稱共軛體系的分子），能夠避免不發(fā)熒光的成分干擾。 n 結(jié)構(gòu)： 紫外檢測器由光源、分光系統(tǒng)、流通池和檢測系統(tǒng)四大部分組成。n 特點： 靈敏度高：最小檢出量可達1012g。n 保護柱：保護分析柱的作用。n 高壓輸液泵： 多用不銹鋼、聚四氟乙烯材料制造，泵的活塞多采 用石英桿制成。 特點：簡單但不準確。n 與其他方法結(jié)合定性：氣相色譜與質(zhì)譜、光譜、核磁共振等儀器配合進行未知組分定性。 硫濾光片的波長是394nm，呈藍紫色。 n 線性范圍：指被測組分的量與檢測器響應(yīng)信號成線性關(guān)系的范圍，通常用保持線性的最大進樣量與最小檢出量的比值表示。并放在相應(yīng)的柱包裝盒中。n 固定液：固定液的不同直接影響到待測組分的分離效能，固定液的選擇是色譜分析的關(guān)鍵環(huán)節(jié),其基本原則也是“相似相溶”原理。 溶劑聚焦：初始柱溫要比溶劑溫度至少低10℃。尤其適用于沸點范圍寬、或熱不穩(wěn)定的樣品，也常用于痕量分析（可進行柱上濃縮）。 常見問題：泄露問題 EPC：電子壓力傳感器和電子流量控制器n 流量控制準確，重現(xiàn)性好n 可實現(xiàn)載氣的多模式操作n 使儀器體積更小n 使自動化程度更高n 儀器更省氣n 操作更安全進樣系統(tǒng)進樣口結(jié)構(gòu)與技術(shù)指標： 進樣系統(tǒng)包括樣品引入裝置（注射器和自動進樣器）和汽化室。n 最佳載氣流速μopt和最小理論塔板高度Hmin n 分離條件的優(yōu)化 1. 在柱長一定的條件下，采用接近μopt的載氣流速，小內(nèi)徑的色譜柱，如果是填充柱就采用較小的填料粒度。 速率理論及影響柱效率的因素 范弟姆特等的速率理論認為：色譜峰擴展的原因是受渦流擴散、分子擴散、氣流兩相間傳質(zhì)阻力的影響。n 柱效越高，分離度R越大。 R=。峰底：峰的起點與終點之間連接的直線。具有如下特點：分析速度快（數(shù)分鐘~幾十分鐘）分離效率高（可分離復(fù)雜的多組分樣品）靈敏度高（1010~1012g）選擇性高（固定液、檢測器）適用范圍廣n 基本術(shù)語： 1．流出曲線和色譜峰 2．基線、噪音和漂移 3．保留值：色譜定性參數(shù) 4．色譜峰的區(qū)域?qū)挾龋荷V柱效參數(shù) 5. 選擇因子、分離度 n 分離理論： 1. 分配原理 2. 塔板理論 3. 速率理論11．流出曲線和色譜峰流出曲線（色譜圖）：電信號強度隨時間變化曲線色譜峰：流出曲線上突起部分12．基線、噪音和漂移基線：當沒有待測組分進入檢測器 時，反映檢測器噪音隨時間 變化的曲線。 其他溶劑：加入少量極性溶劑可以改變流體對溶質(zhì)的溶解能力。在臨界點附近，壓力和溫度的微小變化都可以引起流體密度的很大變化，而超臨界流體的溶解度一般隨密度的增加而增加。v 適用于固體、半固體樣品的提取。免疫親和層析流程v 裝填親和層析柱v 加樣本v 樣本和抗體反應(yīng)v 洗去未結(jié)合的物質(zhì)v 再洗去疏松結(jié)合的物質(zhì)v 洗脫和抗體緊密結(jié)合的部分 免疫親和柱的優(yōu)缺點 v 特異性強、凈化效率高 v 過程簡單、統(tǒng)一 缺點： v 載體價格昂貴 v 特異性抗體難得 6 凝膠滲透色譜（GPC）GPC又稱為體積排阻色譜，是按溶質(zhì)分子的大小進行分離的一種色譜技術(shù)。v 攪拌效率：有利于縮短平衡時間。固相萃取的優(yōu)缺點 高的回收率和富集系數(shù) 不需要大量溶劑 萃取時間短（是液液萃取的1/2） 操作簡單、快速、易實現(xiàn)自動化 缺點：復(fù)雜樣品有時會堵塞填料空隙；復(fù)雜樣品的雜質(zhì)干擾等2 固相微萃取（SPME）v SPME是在SPE基礎(chǔ)上發(fā)展起來高效的樣品預(yù)處理技術(shù)。固相萃取流程v 吸附柱的選擇：根據(jù)待分離對象的特點選擇合適的吸附柱。三、樣品制備新技術(shù)1 固相提取法（SPE）v SPE利用顆粒細小的多孔固相吸附劑將液體樣品中的目標化合物選擇性地吸附，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集目標 化合物的目的。v 洗脫：以洗脫分析物而讓雜質(zhì)保留的溶劑（一般為混合淋洗液）梯度洗脫柱子，回收分析物。常用四種吸附劑的比較吸附劑名稱主要成分活性強弱活化處理方法弗羅里硅土（Florisil)硫酸鎂與硅酸鈉作用生成的沉淀物適合脂肪含量高的樣品的凈化650℃烘烤3h ，干燥器存放。v 液液分配提取效率的高低取決于化合物與提取溶劑的親和性、二相的體積比和提取次數(shù)三個因素。索式提取法v 用適當?shù)奶崛∪軇┰谒魇教崛∑髦羞B續(xù)回流提取幾小時，獲得提取液。 振蕩提取法v 振蕩浸提法是最常用的一種方法。 溶解度的大小很大程度上取決于農(nóng)藥分子所含官能團的種類、數(shù)量、溶劑的性質(zhì)和其他外部因素。v 樣品制備的目的 1）提高靈敏度和降低檢測限。v 結(jié)果一般以兩、三位有效數(shù)字表達，回收率采用整數(shù)位的百分數(shù)表示即可。樣品送達實驗室后賦予每個樣品唯一編號?？瞻讓φ招^(qū)保護行：設(shè)置保護行或田?。ň彌_、漂移、串流）田間施藥v 供試農(nóng)藥的接收、貯存、使用和處置v 施藥前做好前期準備工作v 避免對人員、試驗樣品的污染v 施藥器械的清洗和維護v 應(yīng)選擇風速小于3m/s的晴朗天氣施藥v 施藥健康與安全v 按SOP中不同作物的田間施藥標準操作規(guī)程進行樣品采集和運輸、貯藏v 采樣方法選擇合適的采樣方法：隨機法、對角線法、五點法有選擇地，按劑量從小到大順序采樣避免在地頭或邊沿采樣（）v 采樣量及采樣部位按照附錄A《作物分類及采樣部位和推薦采樣量》及SOP中不同作物田間樣本采集與實驗室樣品制備標準操作規(guī)程確定采樣部位和采樣量。施藥劑量：。最終殘留量測定試驗檢測對象：一般為作物的可食部位和種植地土壤。（試驗地點）內(nèi)，選擇有代表性的試驗地。實驗室樣品：田間樣品按照樣品縮分原則縮小后的樣品，用于冷凍貯藏、分析取樣和復(fù)檢。第二章 農(nóng)藥殘留試驗準則1 農(nóng)藥殘留試驗的目的：了解農(nóng)藥在大田農(nóng)作物施用后的殘留消解動態(tài)以及不同施藥水平與農(nóng)藥最終殘留量的關(guān)系；并以此為重要依據(jù)，制定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥最大殘留限量標準、農(nóng)藥安全使用標準及滿足農(nóng)藥登記的要求。v 1997年，國務(wù)院發(fā)布了《中華人民共和國農(nóng)藥管理條例》。v 加大在新型、低毒、高效農(nóng)藥研制和推廣方面的投入。v 土壤中農(nóng)藥隨地面徑流或經(jīng)滲濾液通過土層至地下水v 農(nóng)藥廠和其他農(nóng)藥化學(xué)品生產(chǎn)廠的污水排放。同時，也在此過程中進入生態(tài)系統(tǒng)中的不同有機生命體，進一步對生態(tài)系統(tǒng)平衡產(chǎn)生影響。v 農(nóng)藥對環(huán)境有益生物的毒性 水生生物：魚類、藻類 陸地環(huán)境生物：鳥類、害蟲天敵、蜜蜂、家蠶、非目標植物（藥害）v 農(nóng)藥對人體健康的危害 急性毒性：甲胺磷、水胺硫磷等高毒農(nóng)藥 慢性毒性：致突變性、干擾內(nèi)分泌活動 慢性神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)(遲發(fā)性神經(jīng)毒性)：有機磷農(nóng)藥特有的干擾免疫系統(tǒng)對兒童腦發(fā)育的遠期影響二、農(nóng)藥的環(huán)境行為1 農(nóng)藥的環(huán)境行為：農(nóng)藥進入環(huán)境后，在環(huán)境中有著復(fù)雜的遷移轉(zhuǎn)化過程，包括揮發(fā)、沉積、吸附、分解等表現(xiàn)。v 吸附：主要指農(nóng)藥在環(huán)境中由氣相或液相向固相分配的過程。2 農(nóng)藥進入生態(tài)系統(tǒng)的途徑農(nóng)藥進入大氣環(huán)境的途徑v 農(nóng)藥噴灑于農(nóng)田時，逸散到大氣中（50%）。農(nóng)藥在生物體間的轉(zhuǎn)移（生物富集、食物鏈）3 農(nóng)藥污染食品的主要途徑v 使用農(nóng)藥防治農(nóng)作物病蟲害，直接污染食用作物。v 提高農(nóng)藥殘留檢測能力和速度。v 1999年，農(nóng)業(yè)部發(fā)布實施《農(nóng)藥管理條例實施辦法》 v 2001年，修改了《農(nóng)藥管理條例》。2 準則主要內(nèi)容v 術(shù)語和定義v 田間試驗部分田間試驗設(shè)計和實施；樣品采集和運輸、貯藏；田間試驗的記錄。分析樣品：按照分析方法要求直接用于分析的樣品。，地勢平整的地塊。施藥劑量：設(shè)兩個施藥劑量（）。施藥時間：作物生長期，一般為作物生長至成熟個體一半大小時開始施藥。 v 樣品處置避免樣品表面殘留農(nóng)藥的損失（采集、包裝、制備）避免樣品損壞及變質(zhì)（采集、運輸）避免交叉污染（采集、制備）樣品上粘附的土壤等雜物可用軟刷子或干布處理干凈。樣品需用干凈的、牢固的容器包裝，并盡快保存在 冷凍或冷藏冰箱中。v 土壤樣品以干重計算，植物樣品以鮮重計算。 2）提高測試精度。 農(nóng)藥的水溶性還受溫度、含鹽量、有機質(zhì)、PH值的影響。它是將樣品粉碎后置于具塞三角瓶中，加入一定量的提取溶劑，用振蕩器振蕩1~3次，~1h，過濾出溶劑后，再用溶劑洗滌濾渣一次或數(shù)次，合并提取液后進行濃縮凈化。v 提取效率高，但耗時長8h以上）v 適用于勻漿法等難提取樣品中殘留農(nóng)藥的提取或是作為其他提取方法提取效率的參照標準。v 影響提取效率的因素： 1. 提取溶劑的選擇 2. 水相的鹽濃度 3. 水相的PH值有機相、水相、乳化物和外力是乳化形成的主要因素。使用前再于130 ℃活化12h。3 樣品濃縮技術(shù)樣品濃縮的目的是使檢測溶液中待測物達到分析儀器靈敏度以上的濃度。v 只能分離性質(zhì)差別較大的物質(zhì)。v 活化吸附劑：萃取樣品前用適當?shù)娜軇┝芟垂滔嘀?。它是利用固相提取的方法實現(xiàn)對樣品的分離和凈化，但所用的固相材料和分離機制不同。v 溫度：有利于縮短平衡時間，但會減少吸附量。其原理是根據(jù)多孔凝膠對不同大小分子的排阻效應(yīng)進行分離，樣品中的大分子先被洗脫出來，小分子后被洗脫出來。 特點：所需溶劑少(約15ml/10g)，快速(20min)，提取效率高。SFE就是利用壓力、溫度的變化來實現(xiàn)提取和分離過程的。常用改進劑為NHNO2，加入量不超過10%。（穩(wěn)定—平直直線）噪音：儀器本身所固有的，以噪音 帶表示。峰高：色譜峰最高點到峰底的距離。R值越大，分離越好。塔板理論假設(shè)：n 在柱內(nèi)一小段長度H內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達到平衡，這一小段柱長稱為理論塔板高度H。 H=A+B/μ+Cμ 式中A為渦流擴散項，B/μ為分子擴散項，Cμ為傳質(zhì)阻力項，μ為載氣線速度。 2. 改變柱溫（程序升溫） 3. 改變固定相，即更換色譜柱 4. 利用化學(xué)作用，如通過衍生化反應(yīng)改變待 測物的結(jié)構(gòu)。 幾項技術(shù)指標：n 操作溫度范圍：350~420℃n 載氣壓力和流量設(shè)定范圍：0~100psi，0~200ml/min。n 程序升溫進樣口：將分流/不分流進樣和冷柱上進樣結(jié)合起來，功能多，適用范圍廣，是較為理想的GC進樣口。 熱聚焦：初始柱溫低于待測分析樣品的沸點150 ℃。毛細管色譜柱毛細管的特點：柱效能高、柱滲透率大、柱容量小，分辨能力、靈敏度、分析速度以及色譜柱的相對惰性都優(yōu)于填充柱。n 每次開機前都應(yīng)先開載氣，再開儀器、工作站，再設(shè)定方法；關(guān)機前都應(yīng)將柱箱溫度降到50℃以下，然后再關(guān)電源和載氣。常用檢測器：火焰離子化檢測器（FID）火焰光度檢測器（FPD）電子捕獲檢測器（ECD）氮磷檢測器（NPD）火焰離子化檢測器（FID）n 特點： 能檢測大多數(shù)含碳有機化合物，結(jié)構(gòu)簡單，性能穩(wěn)定，靈敏度較高，線性范圍寬。 磷濾光片的波長是526nm，呈黃綠色。定量分析： 定量分析就是根據(jù)色譜峰的峰高或峰面積來計算樣品中各組分的含量。第二節(jié) 高效液相色譜檢測方法氣相色譜與液相色譜的比較類別氣相色譜液相色譜流動相氣體(He,N2,H2)液體固定相多（數(shù)百種）較少（十幾種）分析對象可揮發(fā)且熱穩(wěn)定，沸點500℃不受樣品揮發(fā)性和穩(wěn)定性的限制檢測技術(shù)多（FID，ECD，NPD，F(xiàn)PD，MS）少（UVVis，熒光，電化學(xué)，MS）制備分離煩瑣簡便1 液相色譜分類n 平面色譜（薄層色譜和紙色譜）n 柱色譜：經(jīng)典柱色譜（低壓） 高效液相色譜（高壓） 液固吸附色譜