20xx人教版高中生物選修一5-3《血紅蛋白的提取和分離》ppt同步課件-全文預(yù)覽
【正文】 散運(yùn)動。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，影響分離的效果。 蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量較大 ， 被排阻在凝膠顆粒的外面 ， 在顆粒之間迅速通過 。因此 ， 樣品中相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出 ， 相對分子質(zhì)量最小的分子最后流出 ， 故選 B。 A． 防止血紅蛋白被氧化 B． 血紅蛋白是一種兩性物質(zhì) ， 需要酸中和 C． 磷酸緩沖液會加速血紅蛋白的提取過程 D． 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi) ， 維持其結(jié)構(gòu)和功能 解析 利用磷酸緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的 pH環(huán)境 ， 保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能 ， 便于分離觀察 (紅色 )和研究 (活性 )。 2．凝膠色譜操作 3． 純度鑒定 ——SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳 判 斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求 ， 需要進(jìn)行蛋白質(zhì)純度的鑒定 。 ③ 目的：經(jīng)過離心使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開來 ， 便于下一步對血紅蛋白的純化 。 ② 方法 a． 采集血樣 → → → → e.低速離心 → 重復(fù) d、 e步驟三次 。 因其能攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的 ， 降低分離效果 。 磷酸緩沖液 色譜柱 加入和洗脫 4． 操作提示 (1)紅 細(xì)胞的洗滌 、 與 十分重要 。 蒸餾水 甲苯 漲破 離心管 離心 (4)透析 取 1 mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中 ， 將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L的 中 (pH為 )， 透析 12 h(以除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) )。 目的是 ， 以利于后續(xù)步驟的分離純化 。 A． 根據(jù)蛋白質(zhì)分子與凝膠的親和力的大小 B． 根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小 C． 根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的多少 D． 根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的大小 解析 凝膠色譜法所用的凝膠實際上是一些微小多孔的球體 ，在小球內(nèi)部有許多貫穿的通道 ， 相對分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道 ， 路程較長 ， 移動速度較慢；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)只能在凝膠外部移動 ， 路程較短 ， 移動速度較快 。 因各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小 、 形狀不同 ， 遷移速度不同 ， 從而實現(xiàn)各種分子的分離 。 電泳法分離分子則是依據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異 ， 以及分子本身的大小 ， 形狀不同 ， 使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度 ， 從而實現(xiàn)在電場中將各種分子分離 。 帶電粒子 遷移 pH 正電 負(fù)電 與其所帶電荷相反 (3)作用 電泳利用了待分離樣品中各種分子 的差異及分子本身的 、 的不同 ， 使帶電分子產(chǎn)生不同的 ， 從而實現(xiàn)樣品中 。 相對分子質(zhì)量 較小 較長 較慢 較大 凝膠外部 較短 較快 分離 2． 緩沖溶液 (1)作 用 在一定范圍內(nèi) ， 抵制外界的 對溶液 pH的影響 ， 維持pH 。 。 課標(biāo)解讀 道凝膠色譜法、電泳法等分離生物大分子技術(shù)的基本原理。 血紅蛋白提取和分離的基本原理 分配色
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