《高等植物基因工程》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 5S t GUS 35S P tet 顯色反應(yīng) tetR tet 結(jié)合蛋白 NLS 核定位信號(hào)序列 GR 激素受體蛋白 VP16 轉(zhuǎn)錄激活因子 GUS b葡糖醛酸糖苷酶報(bào)告基因 四環(huán)素 地塞米松 4. 外源基因的類固醇誘導(dǎo)系統(tǒng) PG1090 E9 t hER 雌激素誘導(dǎo)型的外源基因表達(dá)系統(tǒng) lexA VP16 nos t hpt MCS lexA 細(xì)菌 lexA 基因的 DNA 結(jié)合區(qū) VP16 病毒轉(zhuǎn)錄激活因子編碼區(qū) MCS 外源基因多克隆位點(diǎn) hER 人雌激素受體編碼區(qū) hpt 潮霉素抗性基因 雌激素 PNOS lexA O 35S P 3A t XVE轉(zhuǎn)錄激活因子表達(dá)盒 潮霉素標(biāo)記基因表達(dá)盒 外源基因表達(dá)盒 lexA O LexA蛋白結(jié)合位點(diǎn) 4. 外源基因的類固醇誘導(dǎo)系統(tǒng) 蛻皮激素誘導(dǎo)型的外源基因表達(dá)系統(tǒng) 35S P nos t HEcR LBD GR DBD GRact VP16 GUS 35S P nos t GRE 融合轉(zhuǎn)錄因子 顯色反應(yīng) 蛻皮激素 GRact 激素受體轉(zhuǎn)錄激活區(qū) GR DBD 激素受體 DNA結(jié)合區(qū) HEcR LBD 昆蟲激 素受體的配體結(jié)合區(qū) 五、利用植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究基因的表達(dá)調(diào)控 第十七章 高等植物基因工程 利用報(bào)告基因展示高等植物基因表達(dá)與調(diào)控的信息譜 利用病毒載體探查植物基因重排 利用轉(zhuǎn)座元件克隆植物基因 利用 TDNA構(gòu)建植物遺傳突變株 利用報(bào)告基因展示高等植物基因表達(dá)與調(diào)控的信息譜 T P b葡糖醛酸糖苷酶報(bào)告基因 GUS 應(yīng)答調(diào)控元件 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子 鹵代葡萄糖醛苷酸 Xgluc 藍(lán)色化合物 熒光素酶報(bào)告基因 GFP 發(fā)射熒光 昆蟲熒光素 利用病毒載體探查植物基因重排 植物基因組 報(bào)告基因 ori Apr 病毒載體 利用轉(zhuǎn)座元件克隆植物基因 植物基因組 Ac 克隆 以 Ac序列為探針雜交篩選 利用 TDNA構(gòu)建植物遺傳突變株 植物突變株基因組 LB 酶切 連接 克隆 RB NTPII pBR322 卸下克隆的植物基因片段 重組克隆 DNA 植物突變基因的 DNA片段 雜交野生型植物基因組 基因序列分析 經(jīng)歷突變的野生型全長(zhǎng)基因 六、利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)功能蛋白和工業(yè)原料 第十七章 高等植物基因工程 利用植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 利用植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)食品或飼料添加劑 利用植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)工業(yè)原料 六、利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)功能蛋白和工業(yè)原料 第十七章 高等植物基因工程 轉(zhuǎn)基因植物作為生物反應(yīng)器的優(yōu)勢(shì)如下： 植物易于生長(zhǎng) ， 農(nóng)田管理成本相對(duì)低廉 ， 操作技術(shù)要求也不高 絕大多數(shù)植物的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)人和牲畜無毒副作用 ， 安全可靠 植物具有完整的真核表達(dá)修飾系統(tǒng) ， 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)的重組蛋白藥物和疫苗在分子結(jié)構(gòu)和生物活性上 ， 與人體來源的蛋白質(zhì)相似 利用植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 借助于根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化系統(tǒng) ， 將小鼠抗體的輕鏈和重鏈編碼基因分別置于兩種煙草植物體內(nèi)表達(dá) ， 然后兩種重組植物品系進(jìn)行雜交 ， 產(chǎn)生的子代植物能同時(shí)合成小鼠的輕鏈和重鏈兩種多肽 。 標(biāo)準(zhǔn)的高等植物原生質(zhì)體制備和再生程序是：將植物嫩葉 、 幼芽或愈傷組織切成碎片 ， 浸入含有纖維素酶的緩沖液中保溫；懸浮物離心除細(xì)胞碎片；將原生體懸浮液滴在無菌濾紙片上 ， 并置于含有普通植物細(xì)胞 （ 即所謂的 滋養(yǎng)細(xì)胞 ） 的固體再生培養(yǎng)基的表面 ， 使原生質(zhì)體與 滋養(yǎng)細(xì)胞 不直接接觸 ， 但可吸收由 滋養(yǎng)細(xì)胞 分泌擴(kuò)散出來的植物生長(zhǎng)因子及其它化合物；培養(yǎng) 23周后 ， 將濾紙上的植物細(xì)胞蔟轉(zhuǎn)移至含有高濃度分裂素和低濃度生長(zhǎng)素的固體培養(yǎng)基上繼續(xù)培育 24周 ， 濾紙片上便長(zhǎng)出嫩芽；將嫩芽置入含有低濃度生長(zhǎng)素而無分裂素的固體培養(yǎng)基上 ，使其根部發(fā)育；大約 3周后再將之移植在土壤中 ， 長(zhǎng)成整株植物 。 花粉管導(dǎo)入法的特點(diǎn)是直接 、 簡(jiǎn)便 。 （ 3）融合法 將外源 DNA與特殊的疏水性高分子化合物混合 ， 在水中這些疏水性化合物分子形成球狀的 脂質(zhì)體 ， 后者與植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合 ， 篩選融合子 ， 再生植物細(xì)胞壁 。 A、 B兩條鏈必須同處于一個(gè)植物細(xì)胞中 ， 方能形成有感染力的病毒 。 在大約 300種特征清楚的植物病毒中 ， 單鏈 RNA病毒約占 91%， 雙鏈 RNA病毒 、 雙鏈 DNA病毒 、 單鏈 DNA病毒各占 3%。248。 三、 高等植物的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng) 第十七章 高等植物基因工程 Ti 質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序 植物病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染程序 植物細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)化程序 植物原生質(zhì)體的再生程序 Ti 質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序 幾乎所有的雙子葉植物尤其是豆科類植物的根部常常會(huì)形成根瘤 ， 這是由于植物根部被一種革蘭氏陰性土壤桿菌農(nóng)桿根瘤菌 （） 感染所致 ， 其致瘤特性是由該菌細(xì)胞內(nèi)的野生型 質(zhì)粒 Ti（ Tumorinducing） 介導(dǎo)的。 染色體的多倍體性 很多高等植物擁有比人類更大的基因組，并以多倍體的形式存在。 生長(zhǎng)素與分裂素之比高 ， 則根部發(fā)育；生長(zhǎng)素 與分裂素之比低，則莖部發(fā)育。 整株植物的再生性 植物損傷后，會(huì)在傷口長(zhǎng)出一塊軟組織，稱為
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