《基因轉(zhuǎn)染技術(shù)》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 用的轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞篩選方法： （ 1） 標(biāo)記基因篩選法 在載體上引入一個(gè)標(biāo)記基因，或同時(shí)導(dǎo)入標(biāo)記基因，在轉(zhuǎn)染后的適當(dāng)時(shí)間選用合適劑量的選擇培養(yǎng)基，篩選標(biāo)記基因表型，那些已導(dǎo)入外源基因的細(xì)胞將存活下來。靶基因被導(dǎo)入細(xì)胞后，一般在轉(zhuǎn)染后 24小時(shí)，靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。對(duì)于懸浮細(xì)胞，也需在轉(zhuǎn)染前 4小時(shí)換一次新鮮培養(yǎng)液。這一類是利用病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移，以其高轉(zhuǎn)染率和良好的靶向性成為腫瘤基因治療的有效方法。 （二）基因轉(zhuǎn)移的病毒的方法 、 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 逆轉(zhuǎn)錄病毒為 RNA病毒，它們的基因組編碼在一條單鏈 RNA上，病毒進(jìn)入細(xì)胞通過逆轉(zhuǎn)錄作用，病毒 RNA即轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈 DNA分子， DNA進(jìn)入細(xì)胞核并整合在細(xì)胞染色體中，這種整合的病毒稱為原病毒。 這項(xiàng)轉(zhuǎn)染方法是近年來才發(fā)展出來應(yīng)用在魚類轉(zhuǎn)殖的最新技術(shù)，它最大有點(diǎn)就是簡(jiǎn)單方便。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將 DNA復(fù)合體導(dǎo)入。 電穿孔轉(zhuǎn)染效率主要取決于所用的細(xì)胞類型。即 利用脈沖場(chǎng)將DNA導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞。 、 圖 1. 陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染 、 受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 依靠受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞途徑以轉(zhuǎn)移外源基因。 DNA磷酸鈣共沉淀物同細(xì)胞接觸的最適保溫時(shí)間，因細(xì)胞的類型而異。 、 磷酸鈣共沉淀法 將氯化鈣、 DNA和磷酸鹽緩沖液混合，形成磷酸鈣微沉淀 ，附著于細(xì)胞膜并經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。 ?基因轉(zhuǎn)移技術(shù)已廣泛用于基因的結(jié)構(gòu)和功能分析、基因表達(dá)與調(diào)控、基因治療與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等研究。 ?基因轉(zhuǎn)染技術(shù)：將純化的含有靶基因的質(zhì)粒DNA送入細(xì)胞內(nèi)，并在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。 二 、 基因運(yùn)載系統(tǒng) 將某一特定的靶基因傳遞到靶細(xì) 胞，需要應(yīng)用某一基因運(yùn)載系統(tǒng)，目前將這一系統(tǒng)概括為兩大類： 非病毒方法 和 病毒方法 （一）非病毒方法 分類 直接注射法 磷酸鈣共沉淀法 脂質(zhì)體染法 顯微注射法 受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 電穿孔法 微粒子轟擊法 DEAE葡聚糖和 polybrene聚陽離子法 精子載體法 為什么需要應(yīng)用轉(zhuǎn)染試劑或其他方法 ? DNA: 帶負(fù)電荷、親水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? No ionic interaction + + + + + + + + + + Cationic macromolecule + + + + + + Cationic Reagent Membrane: anionic and hydrophobic
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