基因轉(zhuǎn)染技術(shù)ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-27 07:53本頁(yè)面
【正文】 具體的基因轉(zhuǎn)染條件應(yīng)參考所使用的試劑和方法進(jìn)行優(yōu)化。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?48小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。故必須首先將轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞和未轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞加以區(qū)分。 、 （ 2） 基因缺陷型受體細(xì)胞的選擇性 以基因缺陷型細(xì)胞作為靶細(xì)胞，將正?；?qū)牖蛉毕菪桶屑?xì)胞后，使用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。 、 外源基因是否真的轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞必須用分子雜交方法進(jìn)行證實(shí)。其中主要問題是探針的選擇。其中包括對(duì)目的基因和標(biāo)記基因的鑒定。 四、外源基因的表達(dá)和檢測(cè) 、 1 、用于建造疾病的動(dòng)物模型和藥物篩選模型 2 、用于基因治療 3 、用于異種器官移植 4 、用于改良動(dòng)植物品種和生產(chǎn)性能 5 、用于生產(chǎn)藥用蛋白和保健蛋白 6 、用于生產(chǎn)人抗體 五、主要應(yīng)用 5. 各種 轉(zhuǎn)染方法 比較 轉(zhuǎn)染方法 原理 應(yīng)用 特點(diǎn) 電穿孔法 細(xì)胞暴露在短暫的高場(chǎng)強(qiáng)電脈沖中，將誘導(dǎo)沿細(xì)胞膜的電壓差異，這種電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜暫時(shí)穿孔。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞 適用細(xì)胞廣，細(xì)胞致死率高，操作復(fù)雜 病毒介導(dǎo)法 通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；但攜帶基因不能太大；需考慮安全因素 磷酸鈣法 磷酸鈣 DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 適用細(xì)胞廣；轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清和抗生素；相對(duì)具有一定毒性 陽離子聚合物 陽離子聚合物與核酸等形成穩(wěn)定的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 為最新一代的轉(zhuǎn)染試劑，具有操作簡(jiǎn)單；穩(wěn)定性好；轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低的特點(diǎn)；通過調(diào)節(jié)聚合物 /DNA比例優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞 適用細(xì)胞廣，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大， 需 根據(jù)不同細(xì)胞類型 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件 顯微注射法或基因槍法 使用一根細(xì)針頭將 DNA， RNA或蛋白直接轉(zhuǎn)入細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核；基因槍使用高壓 microprojectile將大分子導(dǎo)入細(xì)胞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 不適用于原代細(xì)胞； 操作較簡(jiǎn)便但 重復(fù)性差 細(xì)胞毒性較大；效率較低 DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染法 抑制核酸酶 內(nèi)吞作用 瞬時(shí)表達(dá) 操作相對(duì)簡(jiǎn)單；但需高濃度DNA ； DEAE葡聚糖濃度 ；溫育時(shí)間 陽離子脂質(zhì)體法 帶正電的脂質(zhì)體和核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。 LOG
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