基因工程研究策略和實踐(文件)
【正文】 ：連接率低 要求連接酶及底物濃度高 GAA ＴＴＣ ＣＴＴ ＡＡＧ GAAＴＴＣ 3. 同聚物核苷酸末端法 ? 在 DNA或 RNA分子末端的一段同聚物核苷酸延伸。 ? 感染（ infection）： 病毒或重組病毒 DNA進入細胞的過程。 ３．轉(zhuǎn)化動物細胞常用的方法 ； ； ； ； ； 。 CI為負控制序列（抑制 Ter表達） 當 DNA插入使 CI失活 Ter表達， 由此作為陽性克隆的篩選。 （ hybridization） 兩條不同來源的含有互補核苷酸序列的單鏈核酸分子，通過堿基配對規(guī)律形成一個新的穩(wěn)定的雙鏈核酸分子的過程 ? 菌落原位雜交（ Hybridization in Situ） （以細菌為受體細胞） 使用與目的 DNA互補的探針鑒別陽性轉(zhuǎn)化菌 菌落原位雜交法篩選 復印至硝酸纖維素膜上 用 NaOH菌體裂解 DNA變性 雜交 放射自顯影 32PcDNA 與放射性 cDNA雜交的菌落的斑點 細菌菌落 單鏈 DNA結(jié)合到膜上 5. DNA測序 測序：確定 DNA鏈上確切的堿基順序 方法：對初步篩選的陽性重組子，擴增后抽提質(zhì)粒，酶切回收片斷，進行 DNA測序確認。此外，最終產(chǎn)品還必須嚴格檢驗其中是否混有病人的致病病毒。整合后的細胞可在不含 His的培養(yǎng)基上生長 ? 在酵母細胞中，這種蛋白能像在受乙肝病毒侵染的人體細胞中那樣，組裝成多亞基 的復合物，能誘導產(chǎn)生抗體。 ? 從皮膚 cDNA文庫和患者基因組 DNA 中擴增出 KRT9的野生型和突變型，將其克隆至pEGFPN1質(zhì)粒中，分別轉(zhuǎn)染了 Hela細胞和 Hacat細胞。將重組菌置于 240L發(fā)酵罐中，其表達量相當于約 9 l06劑疫苗。 乙醇氧化酶基因(aox1)啟動子 可幫助該質(zhì)粒整合到特定染色體位點的序列 (3’ aox1) His合成過程中所需的組氨醇脫氫酶基因 (his) 圖 1012 宿主采用組氨醇脫氫酶缺陷型 (HIS4－ )的 ，經(jīng)雙交換整合重組后，染色體上的 aoxl丟失，而整合入aoxl啟動子 — HBsAgaoxl終止子及加 poly(A)信號序列、his4和 339。 六、目的 DNA在受體細胞 中的表達 基因工程表達系統(tǒng) 大腸桿菌系統(tǒng) 枯草桿菌系統(tǒng) 酵母細胞系統(tǒng) 昆蟲細胞系統(tǒng) 哺乳動物細胞系統(tǒng) 原核表達系統(tǒng) 真核表達系統(tǒng) 基因工程操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR產(chǎn)物 限制酶消化 開環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 體外包裝，轉(zhuǎn)染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 重組 DNA技術(shù)操作過程可形象歸納為 小 結(jié) 分 分離目的基因 切 限制酶切目的基因與載體 接 拼接重組體 轉(zhuǎn) 轉(zhuǎn)入受體菌 篩 篩選重組體 基因工程的實踐
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1