《動(dòng)物基因工程》ppt課件(文件)
【正文】 ，必須通過(guò)重組哺乳 動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)，但目前商品化了的重組人凝血因子 VIII尚不能滿足幾代 血友病人的大量需求。 信號(hào)肽編碼序列 此外，人 tPA也可由重組大腸桿菌生產(chǎn)，但蛋白的重折疊效率低。重組抗 體采用 DHFRM TX系統(tǒng)表達(dá)。先將帶有 GS編碼基因 的載體轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì) 中不必使用 GS缺陷型的受體細(xì)胞，而且在正常的 MSX濃度下就能篩 選到含有高拷貝外源基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這是 GSMSX系統(tǒng)比 DHFR 胞中，由于只有多拷貝的 GS編碼基因才能抗 MSX， 所以在轉(zhuǎn)染過(guò)程 MTX系統(tǒng)優(yōu)越之處。 氨甲喋呤 （ MTX） 是動(dòng)物細(xì)胞中的關(guān)鍵代謝酶 二氫葉酸還原酶 數(shù)細(xì)胞死亡，但在極少數(shù)幸存下來(lái)的抗性細(xì)胞中， dhfr基因均得以擴(kuò) 增。在 溶血過(guò)程中，紅細(xì)胞膜的通透性大增，在血紅蛋白溢出的 血影細(xì)胞與受體細(xì)胞在適當(dāng)條件下發(fā)生融合，從而將外源 DNA轉(zhuǎn)入受 體細(xì)胞。 上述程序多用于動(dòng)物個(gè)體的轉(zhuǎn)基因過(guò)程，由于必須單細(xì)胞逐一操 顯微注射法 借助于顯微鏡將純化的 DNA溶液迅速注入到受精卵中變大了的雄 作，所以不太適用于基因的克隆和表達(dá)。 將待轉(zhuǎn)化的 DNA溶解與天然或人工合成的磷脂混合，后者在表面 活性劑的存在下形成包埋水相 DNA的 脂質(zhì)體 結(jié)構(gòu)。 如果在外源 DNA中摻入少量的受體細(xì)胞內(nèi)源性 DNA可以提高轉(zhuǎn)化 效率。 人囊狀纖維化基因就是采用這種戰(zhàn)略高效表達(dá)的。以前外源基因插在病毒基因組的非必需區(qū)內(nèi)，構(gòu)建 人牛痘病毒的生物學(xué)特性 出的重組病毒具有感染力，而且一經(jīng)轉(zhuǎn)染，外源基因即可在最鄰近的 病毒啟動(dòng)子的控制下高效表達(dá)。 安裝細(xì)胞色素 P450 dioxin介導(dǎo)的增強(qiáng) 子 DRE， 控制小鼠乳腺癌啟動(dòng)子 MMTP， 由其帶動(dòng)外源基因的表達(dá)。 SV40的基因組 DNA t / T基因編碼病毒的小抗原和大 SV40 DNA ori VP2 T VP3 VP1 t 抗原與病毒的致癌作用密切相關(guān) SV40在裂解宿主細(xì)胞前的晚期 狀態(tài)時(shí)，每個(gè) 宿主細(xì)胞含有 105個(gè)病 毒 DNA拷貝，因此十分適合用于高效 表達(dá)外源蛋白 SV40 DNA質(zhì)粒 DNA雜合載體的構(gòu)建 重組的 SV40 DNA分子必須經(jīng)過(guò) 包裝后才具有感染能力，因此插入的 外源 DNA片段不能太大。目前已鑒定的人腺病毒 腺病毒的生物學(xué)特性 有 6個(gè)亞屬，其中常用來(lái)構(gòu)建載體的主要是 C亞屬的 2型（ Ad2） 和 5型 （ Ad5） 病毒。第七節(jié) 動(dòng)物基因工程 D 高等哺乳動(dòng)物的基因轉(zhuǎn)移 本章內(nèi)容： C 高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng) B 高等哺乳動(dòng)物的受體系統(tǒng) A 高等哺乳動(dòng)物基因工程的基本概念 E 利用哺乳動(dòng)物工程細(xì)胞生產(chǎn)重組蛋白 A 高等哺乳動(dòng)物基因工程的基本概念 高等哺乳動(dòng)物基因工程 高等哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因表達(dá)技 術(shù) 高等哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體 動(dòng)物工程細(xì)胞 哺乳動(dòng)物遺傳性狀改良 藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型 人體基因治療 蛋白多肽物質(zhì)大規(guī)模生產(chǎn) 藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型 B 高等哺乳動(dòng)物的受體系統(tǒng) 高等哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)特性 高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞的條件 高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞的遺傳標(biāo)記 常用的高等哺乳動(dòng)物受體細(xì)胞 高等哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)特性 正常的哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞具有下列四大生物學(xué)特征： 錨地依賴(lài)性： 細(xì)胞必須附在固體上或固定的表面才能生長(zhǎng)分裂 血清依賴(lài)性： 細(xì)胞必須具
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