《基因工程原理》ppt課件(文件)
【正文】 rg開創(chuàng)的基因重組技術。 (3) it contained a gene for resistance to the antibiotic tetracycline。s enzyme to rebine the plasmid DNA. ■ First they would try to rebine two plasmids to form a single plasmid. ■ If successful, they would attempt to bring DNA from a foreign species into the plasmid to produce a rebinant DNA molecule. Boyer agreed, and the bargain was struck. Cohen在重組 DNA技術中杰出貢獻 31 Boyer and Cohen 的策略 32 ◆ pSC102,體內構建的重組體 ● 他們首先檢查了 EcoRⅠ 對質粒pSC101和 R65的切割情況 ， 發(fā)現(xiàn)EcoRⅠ 在質粒 pSC101上只有一個切點 ， 在質粒 R65上有 12個切點 ,這樣就可以用 pSC101 作為重組DNA的載體分子 。 ◆ 這些結果說明不同的酶切片段轉化大腸桿菌后能夠在細胞內進行重組連接形成有功能的重組質粒 。 ◆ 這種重組說明兩個復制子能夠重組 ， 并能在細胞內表達 。 ◆ 這實際上是進行無性繁殖 ， 即克隆 ， 所以基因工程通常又稱為基因克隆 。 40 外源基因的克隆與表達 41 基因工程的技術組合 42 ?基因工程的特點 ◆ 基因工程有兩個基本的特點 ∶ 分子水平上的操作和細胞水平上的表達 。 36 ? pSC105， 體外構建的重組體 ◆ 作者為了獲得體外構建的重組體 ， 分別用 EcoRⅠ 切 割 質 粒 pSC101 和pSC102,然后加入 DNA連接酶進行連接后轉化大腸桿菌 ， 在四環(huán)素和卡那霉素雙抗性的平板上檢查重組情況 ， 同時設計一些合理的對照實驗 。 然后從該克隆中分離了一個環(huán)狀質粒 DNA， 命名為pSC102， 分子量大約為 17 106。s plasmid was the ease of inserting it to a host cell. Cohen found that he could insert plasmids to fresh bacteria by suspending the latter in cold calcium chloride, then rapidly heating the bacteria to 42oC. So treated, the bacterial wall and plasma membrane open to permit the plasmids to pass through and into the cytoplasm. Cohen在重組 DNA技術中杰出貢獻 29 ◆ Cohen與 Boyer合作創(chuàng)建重組 DNA分子 ● To some historians, the discipline of DNA technology came into being over pastrami sandwiches at a loca
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