基因工程原理ppt課件-閱讀頁
2024-09-30 18:25本頁面
【正文】 line, whereas bacteria lacking the plasmid would be killed by the tetracycline. Cohen在重組 DNA技術(shù)中杰出貢獻 27 pSC101質(zhì)粒 DNA 28 ◆ 質(zhì)粒 pSC101對大腸桿菌的轉(zhuǎn)化技術(shù)突破 ● Another key characteristic of Cohen39。s EcoRI enzyme seemed to be the ideal solution, so Cohen suggested they join forces. ● They would use his plasmids and Boyer39。 33 他們用 EcoRⅠ 處理過的和沒有處理過的 質(zhì)粒 pSC101和R65DNA分別轉(zhuǎn)化 C600,得到下表的實驗結(jié)果 ∶ 表：環(huán)狀和線狀質(zhì)粒 DNA的轉(zhuǎn)化 質(zhì)粒 DNA 每 μg DNA轉(zhuǎn)化子 四環(huán)素 卡那霉素 氯霉素 pSC101(未切割 ) 3 105 (EcoRⅠ 切割 ) 104 R65(未切割 ) 104 104 R65 (EcoRⅠ 切割 ) ＜ 5 1 102 4 101 34 ◆ 他們從用 EcoRⅠ 處理的 R65的卡那霉素抗性平板上選擇了一個克隆 ， 并檢查了它的抗性 ， 發(fā)現(xiàn)該克隆同時具有磺胺的抗性 ，但沒有氯霉素 、 四環(huán)素的抗性 。 35 ◆ 接著用 EcoRⅠ 分別切割 pSC102 和 R65質(zhì)粒DNA， 進行電泳檢查 ， 發(fā)現(xiàn) pSC102被切成三個片段 ， 相對于質(zhì)粒 R65的 EcoRⅠ 酶切片段 Ⅲ 、Ⅴ 和 Ⅷ 。 這一結(jié)果也提示 ， 如果能夠在體外重組成功 ， 并能將重組體引入細胞內(nèi) ， 同樣具有生物學功能 。 37 質(zhì)粒 DNA 抗生素抗性的轉(zhuǎn)化頻率 四環(huán)素 卡那霉素 四環(huán)素＋卡那霉素 未用酶處理 2 105 1 105 2 102 EcoRⅠ 處理 104 103 7 101 EcoRⅠ + DNA連接酶 104 103 102 表：質(zhì)粒 pSC101 和 pSC102混合 DNA的 大腸桿菌 C600的轉(zhuǎn)化 38 ?pSC101與 RSF1010的共整合 : pSC109的構(gòu)建 ◆ 象 pSC101一樣 ， 質(zhì)粒 RSF1010上也只有一個 EcoRⅠ切點 ， 所以只要用 EcoRⅠ 分別處理質(zhì)粒 RSF1010和pSC101， 然后用 DNA連接酶將兩個線性 DNA連接起來轉(zhuǎn)化大腸桿菌 ， 得到一個具有三種抗性的重組質(zhì)粒 ∶ 四環(huán)素抗性 、 鏈霉素抗性 、 磺胺抗性 。 39 基因操作 的基本過程和特點 ?基因操作的基本過程 涉及的過程可用分 /合成 、切 、 連 、 轉(zhuǎn) 、 選 、 鑒六個字表示 。 ◆ 基因工程技術(shù)的誕生使人們能夠在試管里進行分子水平上的操作 ， 象一項工程那樣 ， 進行按圖施工的操作 ， 構(gòu)建在生物體內(nèi)難以進行的重組體 ， 然后將重組的遺傳物質(zhì)引入相應(yīng)的宿主細胞 ， 讓其在宿主細胞中進行工作 。 43 基因工程的基礎(chǔ)與應(yīng)用
數(shù)學相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1