綜合性設(shè)計性實驗-3(文件)
【正文】 在 200300V，12小時； ? 電泳結(jié)束后，取下玻璃管； 3. 剝膠 用帶有針頭的注射器吸入蒸餾水，將針頭插入凝膠與玻璃管壁之間，邊旋轉(zhuǎn)邊注水，使針頭慢慢旋轉(zhuǎn)前進(jìn)。 第三部分，目標(biāo)蛋白的 2D電泳 分離分析及其生物質(zhì)譜鑒定 ? 蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，以細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動方式為研究對象。其中雙向電泳 (Two Dimensional Electrophoresis， 2DE) 是蛋白質(zhì)組研究的三大關(guān)鍵核心技術(shù)之一 ( 另兩種是質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)組信息學(xué) ) 。 ? 質(zhì)譜（ Mass Spectrometry）是帶電原子、分子或分子碎片按質(zhì)荷比（或質(zhì)量）的大小順序排列的圖譜。 。 ? 將雙向凝膠電泳的蛋白點(diǎn)挖出來，用質(zhì)譜分析，能得到該蛋白的分子量，質(zhì)荷比等參數(shù)，隨后搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，將該蛋白判斷為哪個蛋白。 ? 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用 SDSPAGE分離，把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開，從而大大提高了分辨率。 ? 2D電泳可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究、蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用、細(xì)胞分化凋亡研究、致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究、療效監(jiān)測、新藥開發(fā)、癌癥研究、蛋白純度檢查、小量蛋白純化、新替代疫苗的研制等許多方面。 4. 測定樣品 pI 方法一：直接用 PH試紙插入所需測定的蛋白區(qū)帶中，此法雖然十分方便，但較為粗略。然后垂直靜置待其聚合。 c. 將長滴管及時清洗 試劑 數(shù)量（ ml） 蒸餾水 Acr Bis 2 40% Ampholine 樣品：人 Hb和 CytC混合物 （ 1mg/ml） 4滴 10％過硫酸銨 TEMED 5 181。 等電聚焦電泳進(jìn)行過程中 等電聚焦電泳結(jié)束后 （＋） （＋） （－） （－） 高 pH 低 pH 實驗操作及注意事項 1. 凝膠配制： ? 取 10 ，選擇底部較齊平的一端用橡皮片封底（用兩條橡皮圈扎緊），從一端量出 7cm作好標(biāo)記，垂直放置。 ? 在沒有電場時 ,載體兩性電解質(zhì)溶液的 pH值大約是該溶液 pH范圍的平均值 (如 pH310的載體兩性電解質(zhì)溶液，其 pH約為 )。 等電聚焦電泳 ? 蛋白質(zhì)是帶有電荷的兩性生物大分子 ， 其正負(fù)電荷的數(shù)量隨所處環(huán)境酸堿度的變化而變化 。 實驗原理 聚丙烯酰胺凝膠 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳方法。 ? 慢性肝炎： γ球蛋白升高
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