【正文】 群司珠單抗 % 阿柔比星 % 欖香烯 % 長春新堿 % 表柔比星 % 去甲斑蟊素 % 依西美坦 % 靛玉紅 % 氟尿苷 NA 優(yōu)福定 % 氟尿嘧啶 % 復(fù)方五氟尿嘧啶多相脂質(zhì)體 % 氟達(dá)拉濱 % 美法侖 % 重組人血管內(nèi)皮抑制素 NA 甘氨雙唑鈉 % 替莫唑胺 NA 替尼泊甙 % 硝卡芥 % 亞砷酸 % 烏苯美司 % 他莫昔芬 % 白消安 % 托泊替康 % 重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子 % 苯丁酸氮芥 % 硼替佐米 NA 六甲密胺 % 伊達(dá)比星 % 甲基斑蝥胺 % 西妥昔單抗 NA 平陽霉素 % 腫節(jié)風(fēng) % 華蟾素 % 托瑞米芬 % 卡莫氟 % 阿糖胞苷 % 絲裂 霉素 % 氟他胺 % 依托泊甙 % 替加氟 % 達(dá)卡巴嗪 % 亮丙瑞林 % 博來霉素 % 鴉膽子油 % 異環(huán)磷酰胺 % 長春地辛 % 卡鉑 % 維甲酸 % 米托蒽醌 % 絡(luò)鉑 % 順鉑 % 復(fù)方氟尿嘧啶 % 去氧氟尿苷 % 去基斑蝥胺 NA 斑蝥酸鈉 /維生素 B6 % 環(huán)磷酰胺 % 羥基喜樹堿 % 重組人 P53 腺病毒 NA 氟尿嘧啶脫氧核苷 % 尼莫司汀 % 多柔比星脂質(zhì)體 % 柔紅霉素 % 薏花仁油 % 福 莫司汀 % 長春瑞賓 % 巰嘌呤 % 吡柔比星 % 抗腫瘤單抗藥物研究已取得多方面進(jìn)展，研究結(jié)果為應(yīng)用于腫瘤治療的可行性提供了重要依據(jù)。國外制藥巨頭也看好國內(nèi)抗腫瘤藥市場潛力，引入新產(chǎn)品的速度明顯加快，一些產(chǎn)品在國外剛上市一年，在國內(nèi)已有進(jìn)口產(chǎn)品。但是，在癌癥患者逐年上升的情況下，卻有一半患者得不到規(guī)范治療。 目前中國每年新發(fā)病例為 220 萬，因癌癥死亡人數(shù)為 160 萬，現(xiàn)有病例 310萬。 DNA 免疫不僅在無法獲得純化蛋白質(zhì)的情況下開拓了研制特異性抗體的新途徑，而且逾越了抗原的低免疫原性的障礙，有效地激發(fā)宿主的特異性免疫應(yīng)答。 技術(shù)存在缺點(diǎn) 大部分 DNA被核酸酶降解，解決 DNA在動物體內(nèi)的穩(wěn)定性是 DNA免疫的關(guān)鍵 。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn) DNA 免疫較常規(guī)免疫產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答強(qiáng)而持久，因此用 DNA免疫制備單克隆抗體和多克隆抗體可以省時省力。 Webster 等認(rèn)為在 DNA免疫中最有效的方法和途徑是用基因槍在肌肉或皮內(nèi)免疫 DNA 包被的金顆粒。目前 DNA 免疫的焦點(diǎn)是抗原的遞呈機(jī)制及佐劑對 DNA 免疫的影響。 DNA 免疫克服了傳統(tǒng)蛋白質(zhì)免疫方法的缺陷，能更為有效地激發(fā)機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，為某些疾病如病毒性疾病和腫瘤等的診斷和免疫治療開拓了新的途徑。核糖體展示系統(tǒng)的抗體篩選過程與噬菌體展示系統(tǒng)的過程相類似。 而且對噬菌體或表達(dá)宿主的生長或功能產(chǎn)生抑制作用的抗體也難以獲得 ， 非免疫抗體庫獲得的抗體親和力不高 。將抗體可變區(qū)與恒定區(qū)組合得到具有完整能的全人單克隆抗體。 2．噬菌體抗體庫技術(shù) 噬菌 體抗體庫技術(shù)是迄今發(fā)展最成熟、應(yīng)用最廣泛的抗體庫技術(shù)。 缺點(diǎn)及改進(jìn)方法 SDR 移植抗體往往存在親和力和特異性降低的缺點(diǎn)。因此又發(fā)展出了產(chǎn)生全人單克隆抗體的技術(shù)。 一． 單克隆抗體綜述 1． 1 人 鼠嵌合抗體制備技術(shù) 該技術(shù) 產(chǎn)生于 1980年代中期 ,是應(yīng)用 DNA重組技術(shù)將人 McAb 的恒定區(qū)基因替換鼠 McAb 的恒定區(qū)基因，從而編 碼產(chǎn)生的 McAb。 全球生物制藥產(chǎn)業(yè)正處于快速上升期，其中單克隆抗體藥物最為活躍，相比2020 年的 480 億美元， 2020 年全球單抗藥物的市場總量已經(jīng)達(dá)到 628 億美元，增速為 %。要解決傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)所存在的問題 ,為單克隆抗體的應(yīng)用提供更廣闊的空間，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、 DNA 免疫制備抗體技術(shù)，制備單克隆抗體。單克隆抗體技術(shù)自問世以來 ,在臨床治療方面進(jìn)展緩慢 ,，主要原因是目前單克隆抗體大多是鼠源性的 ,而鼠源單抗應(yīng)用于人體治療時存在諸多問題 :一方面，鼠源單抗與自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面 Fc 段受體親和力弱，產(chǎn)生的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用較弱，對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力較弱，人血循環(huán)中的半衰期短，它發(fā)揮細(xì)胞毒作用作 用的時間較短 。生產(chǎn)出針對復(fù)雜生物混合物中的特定分子的抗體 ,可用于 分 離、分析及純化該特定分子抗原 。其試劑可用于臨床 診斷和治療 ,或用于以單抗為彈頭的 “ 生物導(dǎo)彈 ” 藥物等。 另一方面，鼠 McAb 還具有免疫原性，產(chǎn)生人抗鼠抗體，既降低單抗的治療效果，又誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)。 《自然》雜志預(yù)測， 2020 年全球銷售額前 10名的藥物中有 6個為抗體藥物并占據(jù)銷售額最大的前 3位?？贵w市場是從 2020 年之后開始蓬勃興起的， 20202020 年間單抗藥物復(fù)合增長率達(dá)到 41%。 1980 年代中后期 ,科學(xué)家對嵌合抗體進(jìn)一步改進(jìn)后 ,抗體基因只有互補(bǔ)性決定區(qū) (CDR)是鼠源成分 ,其余均為人基因序列 , 技術(shù)原理 即 將鼠源性單抗在保留其抗原結(jié)合活性的基礎(chǔ)上，盡可能去除鼠源化部分或代之以人源化片段，從而盡可能減少單抗的異源性 ，然后 根據(jù)所用的載體質(zhì)粒標(biāo)記基因產(chǎn)物 ,選用適當(dāng)?shù)目股鼗蛟噭┻M(jìn)行篩選 ,再用與傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗體的細(xì)胞株。 1． 2 人源化抗體 制備技術(shù) 人源化改造主要是重構(gòu)抗體和表面重塑抗體。目前重構(gòu)抗體是對鼠源性單抗人源化改造最常用、最基本的方法。 技術(shù)原理 它是一種基因表達(dá)產(chǎn)物和親和選擇相結(jié)合的技術(shù) ， 建立在噬菌體外殼具有表達(dá)抗體蛋白片段能力的基礎(chǔ)上，以改構(gòu)的噬菌體為載體，用基因工程技術(shù)克隆人抗體可變區(qū)的全套基因 ,然后將克隆的基因插入噬菌體編碼衣殼蛋白的基因中 ,這樣在噬菌體表面表達(dá)特定抗體片段 ,而在噬菌體核心 DNA 中則含有該抗體片段的基因 ， 建立 了 噬菌體抗體文庫 ， 形成獲得一個具有上億個體外方式制得的不同抗體的基因數(shù)據(jù)庫。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn) 噬菌體展示技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是一旦噬菌體庫建立后 ,就可以根據(jù)需要直接從文庫中篩選得到針對目標(biāo)抗原的特異性抗體 ,大大縮短了單克隆抗體的制備周期并且 得到的抗體可用于制備完全人源化抗體。 在淘選過程中會出現(xiàn)高 親和力低拷貝的特異性噬菌體抗體的丟失等。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn) 核糖體展示技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)是一方面能產(chǎn)生更大的抗體庫 ,庫容可達(dá)到1015 ,另一方面可以方便地與一些特殊的 PCR 技術(shù) ,如性別 PCR、錯配 PCR 等結(jié)合 ,獲得更多的抗體遺傳多樣性 ,而且所表達(dá)的抗體具有正確的空間折疊構(gòu)象。 技術(shù)原理 現(xiàn)代免疫學(xué)研究表明，機(jī)體對抗原的應(yīng)答取決于兩個要素 :①抗原的免疫原性 。雖然 DNA 免疫后在體內(nèi)如何被細(xì)胞攝取及其表達(dá)的抗原又如何被遞呈尚未完全清楚，但許多文獻(xiàn)均證實(shí)了肌細(xì)胞對 DNA的攝取及抗原蛋白的表達(dá)起到很重要的作用。但有人把 DNA 直接注射至小鼠的股四頭肌也能很好地激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答。 DNA 肌肉注 射后，被肌細(xì)胞攝取的 DNA半衰期延長，蛋白質(zhì)持續(xù)表達(dá)，并且加強(qiáng)了 B細(xì)胞和 T細(xì)胞的記憶持久性。② DNA 疫較蛋白質(zhì)免疫引起的免疫應(yīng)答較遲，這可能與 DNA免疫后需經(jīng)過特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)才能激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答有關(guān) 。同時 DNA 免疫激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)而持久的體液免疫，這為高產(chǎn)量特異性多克隆抗體和純度高、特異性強(qiáng)的單克隆抗體的獲得提供了必要條件，在 許多疾病如病毒性疾病和腫瘤等診斷和免疫治療中具有良好的應(yīng)用前景。近 20 年來，中國癌癥死亡率上升了 %，癌癥死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡構(gòu)成的 24%。 以醫(yī)院購藥金額計(jì)算，植物來源性抗腫瘤藥（包括紫杉醇類、替康類、泊甙類、長春堿類）仍然是份額最大的一類抗腫瘤藥，其次是抗代謝類（包括他濱類及其他核甘酸類似物類抗腫瘤藥）位居第二。但短期來看對目前的主流品種不會造成太大沖擊，因?yàn)槿缜八?，這些產(chǎn)品主要作為二線治療藥物使用，或和其他主流品種組成聯(lián)合用藥方案，并不是替代現(xiàn)有主流品種。 單抗藥物對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用 研究結(jié)果表明，單抗與藥物偶聯(lián)物或與毒素偶聯(lián)物對腫瘤靶細(xì)胞顯示選擇性殺傷作用，對表達(dá)有關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞作用強(qiáng)，對抗原性無關(guān)細(xì)胞的作用弱或無作用。結(jié)合到腫瘤靶細(xì)胞表面的數(shù)量多，到非靶細(xì)胞的數(shù)量少；進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)的數(shù)量多，進(jìn)入非靶細(xì)胞內(nèi)的數(shù)量少。曾與單抗進(jìn)行偶聯(lián)并在裸鼠進(jìn)行療效觀察的抗癌藥物有阿霉素、柔紅霉素、平陽霉素、博安霉素、絲裂霉素、新制癌菌素、氨甲蝶呤、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、順鉑以及長春堿類衍生物等。靜脈內(nèi)注射抗腫瘤單抗，在腫瘤部位的濃度較高，顯示特異性定位。 Rituxan 是以 B 細(xì)胞的 CD20 分子為靶點(diǎn)的人鼠嵌合抗體，對非霍奇金 B細(xì)胞淋巴瘤有療效，是第一個獲美國 FDA 批準(zhǔn)用于治療惡性腫瘤的單抗?？? eGFr 的人鼠嵌合抗體已進(jìn)入臨床研究?？?HER2 蛋白單抗與抗 EGFr 單抗聯(lián)合使用對卵巢癌細(xì)胞的作用增強(qiáng)，顯示相加的抗增殖作用。以內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的單抗藥物，抑制血管新生成，可能達(dá)到抑制腫瘤生長的目的；而且靜脈注射的單抗藥物也易于到達(dá)靶部位 (內(nèi)皮細(xì)胞 )，不需要穿越細(xì)胞外間隙到達(dá)實(shí)體瘤深部的腫瘤細(xì)胞。對于長期使用氨甲蝶呤而出現(xiàn)抗藥性的成骨肉瘤細(xì)胞，單抗氨甲蝶呤偶聯(lián)物仍顯示較強(qiáng)的殺傷作用。兩條重鏈（ H）和兩條輕鏈（ L）。 高變區(qū)： VH和 VL各有 3個區(qū)域的氨基酸組成和排列順序特別易變化，這些區(qū)域稱為高變區(qū)。其二級結(jié)構(gòu)是反向平行的β片層 輕鏈分 VL 和 CL 重鏈分 VH 和 CH 。 圖表 5 免疫球蛋白的木瓜蛋白酶水解示意圖 胃蛋白酶裂解 IgG 得到一個具有雙價活性的 F（ ab’ ） 2 段和若干個小分子多肽碎片（ pFc’ ） 圖表 6 免疫球蛋白的胃蛋白酶裂解 圖表 7 免疫球蛋白的胃蛋白酶裂解 （四） J鏈和分泌片 J鏈： J鏈?zhǔn)且粭l多肽鏈，富含半胱氨酸，由漿細(xì)胞合成。 三．單克隆抗體產(chǎn)品介紹 （一） . 美羅華 美羅華 ( rituximab ?？贵w與 CD20 陽性細(xì)胞結(jié)合 ,在補(bǔ)體和效應(yīng)細(xì)胞存在情況下發(fā)生溶細(xì)胞反應(yīng)。 美羅華的臨床試驗(yàn)始于 1993 年。藥代動力學(xué)研究顯示 :血中美羅華水平通常在治療后持續(xù)升高 3～ 6 個月。與骨髓受侵、結(jié)外受侵、巨塊型患者相比 ,腫 瘤負(fù)荷小的療效更好。美羅華的主要不良反應(yīng)包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、皮疹、惡心、喉部痙攣、呼吸困難和低血壓。這是一種血循環(huán)中 B 淋巴細(xì)胞上特異性抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的結(jié)果 ,并不是抗體本身的問題。淋巴細(xì) 胞計(jì)數(shù)超過 5 000 個 對美羅華有效的患者再次治療時的安全有效性 一組 60 例患者的研究表明 ,初次接受美羅華治療后達(dá)到完全緩解或部分緩解者 ,復(fù)治有效率達(dá) 41 % ,中位有效期大于 10 個月。對美羅華耐藥很可能與缺乏依賴 CD20 受體抗凋亡效應(yīng)有關(guān) ,此效應(yīng)由 CD20 受體提供給細(xì)胞。在一項(xiàng) 31 例腫瘤直徑大于 10cm 的患者研究中 ,總有效率 48 % ,其中 55 %為濾泡型淋巴瘤 ,占治療組的大部分。與單用 CHOP 和單用美羅華相比 ,毒性沒有增加。這是一項(xiàng)隨機(jī)的Ⅱ期試驗(yàn) ,2 組患者均接受 8 周的抗體的治療。 美羅華對中度惡性淋巴瘤化療的效果 一項(xiàng) 31 例中度惡性淋巴瘤患者的試驗(yàn) ,其中 19 %為大細(xì)胞濾泡型淋巴瘤 (工作分類 D) ,68 %為大細(xì)胞彌漫性淋巴瘤 (工作分類 G) ,所有患者均為初治。 美羅華對慢性淋巴細(xì)胞性白血病 ( CLL) 的療效 關(guān)于這方面從理論上涉及 2 個問題。劑量爬坡試驗(yàn)證明 ,淋巴結(jié) 中淋巴細(xì)胞增多的情況有一定程度減少 ,但該效果持續(xù)時間有限。而且 ,盡管這組患者通常血中惡性 B 淋巴細(xì)胞克隆增加 ,但淋巴細(xì)胞的數(shù)量遠(yuǎn)不 象 CLL 中那么多。因?yàn)?CD20 在 CLL 的淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞上表達(dá)微弱 ,對化療有效的 CLL 和骨髓瘤患者用美羅華行探索性鞏固治療的試驗(yàn)正在進(jìn)行?；A(chǔ)資料是用該藥治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高度表達(dá) Her22Pneu 受體的患者。 Herceptin 是一種與 P185Her22Pneu 受體發(fā)生反應(yīng)的鼠 P 人免疫球蛋白 IgG1 嵌合抗體。此外 ,還可以在體外介導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 (ADCC)。 mL 1 ,中位清除半衰期為 6. 2d。 Herceptin 和順鉑聯(lián)合治療了 37 例轉(zhuǎn)移性乳腺癌 ,抗體首次劑量為 250mg ,然后 100mg 每周 1 次靜脈注射共 9 周 。毒性與二藥單用大致相同。 kg 1 。在 Her22 (3 + )的患者療效為 18 % ,Her22 (2 + ) 患者有 效率為 6 %( P = 0. 06) 。共 6 例CR ,20 例 PR ,有效率 30 %。 m 2 ) 和環(huán)磷酰胺 ( 600mg 圖表 14 HER22 表達(dá)與轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效和無進(jìn)展生存時間 的關(guān)系 估計(jì)僅 25 %～ 30 %轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者 過度表達(dá) Her22。 圖表 15 HERCEPTIN 單用或與化