【正文】 單抗水平就不會發(fā)生毒性。過度表達Her22Pneu 的患者在理論上都可作為應(yīng)用 Herceptin 的臨床試驗的入選者。作為 B 細胞增殖基因型網(wǎng)絡(luò)控制中的一部分 ,Ab2 產(chǎn)生對抗自身的抗體 , 包括與Ab2 的基因型發(fā)生反應(yīng)的抗體 (Ab3) 。入組患者均為 Duke’ sC 期行完全切除以盡可能根治的結(jié)腸癌患者。 北美的一些試驗正在比較 5Fu + 左旋咪唑或 5Fu + CF 與 5Fu + 1721A 治療Duke’ s C 期結(jié)腸癌。 自 1986 年美國 FDA 首次批準治療性、鼠源性單抗 OKT3 上市以來，每年進入臨床試驗的單抗產(chǎn)品數(shù)量從總體上看呈上升之勢。大規(guī)?？贵w生產(chǎn)成本大約為 200 美元 /克，售價高達 5000 美元 /克，生產(chǎn)成本只占售價 1/25。 全球范圍內(nèi)羅氏、安進、強生、雅培、諾華、禮來等抗體生產(chǎn)公司基本都是世界 500 強公司，它們中很多大型企業(yè)的單抗產(chǎn)品線都是通過收購而獲得的。緊隨其后的是強生、安進公司和葛蘭素史克，它們依托強大的生物技術(shù)平臺，在近幾年推出了新產(chǎn)品，并且在研產(chǎn)品儲備豐富，未來有望持續(xù)的推出新的單抗類產(chǎn)品。 “十二五 ”和 “十三五 ”是我國抗體產(chǎn)業(yè)發(fā)展的黃金期，到了 “十三五 ”期間，目前居全球前十位的抗體藥物基本都能在我國實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。 據(jù)介紹 ,單克隆抗體對診斷、醫(yī)治人類疑難雜癥具有不可替代的作用。 產(chǎn)的單抗產(chǎn)品 公司名稱 商品名 通用名 適應(yīng)癥 武漢生物制品研究所 注射用抗人 T 細胞 CD3 鼠單抗 器官移植排異 東莞宏逸士生物技術(shù)藥業(yè) 抗人白細胞介素 /8 單克隆抗體乳膏 銀屑病 恩博克大連亞維藥業(yè) 抗人白細胞介素 /8 單克隆抗體乳膏 銀屑病 上海中信國健藥業(yè) 益賽普 注射用重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體 /抗體融合蛋白 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等 上海美恩生物技術(shù) 唯美生 碘 131I 腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗體注射液 肝癌治療 百泰生物藥業(yè) 泰欣生 尼妥珠單抗注射液 結(jié)直腸癌 上海賽金生物醫(yī)藥 強克 注射用重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體 /抗體融合蛋白 強直性脊柱炎 上海中信國健藥業(yè) 健尼哌 重組抗 CD25 人源化單克隆抗體注射液 抗 排斥 研究的單抗 品 公司名稱 通用名 適應(yīng)癥 上海張江生物技術(shù) 重組抗 EGFR人鼠嵌合單克隆抗體注射液 結(jié)直腸癌 注射用重組抗 CD25人鼠嵌合單克隆抗體 移植排斥 重組抗 CD52人源化單克隆抗體注射液 慢性 B 細胞白血病 注射用重組人 LFA3抗體融合蛋白 銀屑病 重組人腫瘤壞死因子受體－ Fc融合蛋白 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 注射用重組抗 TNF 人鼠嵌合單克隆抗體 深圳龍瑞藥業(yè) 重組人 CD22單克隆抗體注射液 腫瘤 上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥 重組人腫瘤壞死因子受體－ Fc融合蛋白 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 上海美燁生物 折射用重組人促紅細胞生成素Fc 融合蛋白 腎性貧血 華北制藥集團 重組人源抗狂犬病毒單抗注射液 狂犬病 上海美恩生物 腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗體注射液 腫瘤 惡性淋巴瘤嵌合單抗注射液 惡性淋巴瘤 東莞寶麗健生物工程研究 重組人紅細胞生成素 (Fc)融合蛋白注射液腎性貧血 腎性貧血 北京迪威華宇 凍干注射用重組抗腫瘤融合蛋白 腫瘤 海正藥業(yè) 注射用重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體 抗體 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 武漢生物制品研究所 注射用抗腎綜合征出血熱病毒單克隆抗體 出血熱 中國已經(jīng)上市的抗體只有 20 多個（截止到 2020 年 7 月），絕大多數(shù)在臨床研究或已經(jīng)上市的品種為完全仿制國外上市的產(chǎn)品 ,年銷售約 1 億美元，生產(chǎn)水平低、規(guī)模小，制約了單抗藥物在中國的發(fā)展，中國政府和企業(yè)已經(jīng)逐漸意識到抗體藥物的安全性和有效性以及巨大的市場效益，在抗體新靶標發(fā)現(xiàn)、抗體大規(guī)模表達等產(chǎn)業(yè)化等方面發(fā)展迅速，投入逐漸增加，有望在 5～ 10 年內(nèi)達到國際先進水平。單克隆抗體由于可精確的攻擊靶分子，且具有較少的毒副作用而成為人們期望中的理想藥物。 Datamonitor 指出， 2020 年有近 160個單克隆抗體產(chǎn)品正在進行臨床研究，吸引了制藥行業(yè)和生物行業(yè)的廣泛投資，截至 2020 年已有 22個產(chǎn)品上市，超過 35個產(chǎn)品進入了 Ⅱ 期臨床研究階段。近幾年來，國外在用單抗制作 “ 生物導(dǎo)彈 ” 的技術(shù)方面又有重大進展 (主要是單抗與抗腫瘤劑的整合技術(shù) )。針對上述抗原的鼠單抗大部分被用于實驗研究，如抗原分類、鑒定和功能研究、抗原基因克隆、蛋白分離純化等，有一部分抗體用于檢驗、疾病診斷、預(yù)后判斷等，少部分鼠單抗也被用于人類疾病治療研究。九十年代后又開始了雙特異性抗體和其它小分子抗體的研制，如 SZ51HuscuPA 雙特異性抗體，它兼有抗人活化血小板特性和纖溶酶原激活劑特性的雙重功能，成為導(dǎo)向溶栓劑，與單獨的 uPA進行比較，溶栓效率提高 4倍。國內(nèi)也有實驗室采用計算機輔助設(shè)計下，將鼠抗體表面氨基酸殘基 “ 人源化 ” ，主要將鼠 Fv 段表面暴露的骨架區(qū)殘基中與人 Fv不同者改為人源性，使 Fv 的表面人源化，但仍保留其與抗原結(jié)合的特性?，F(xiàn)在有 7個治療性產(chǎn)品處在臨床研究階段，包括：濟南天康生物制品有限公司的注射用鼠抗人 T 淋巴細 胞 CD3 表面抗原單克隆抗體，用于抗移植排斥；武漢生物制品所與第四軍醫(yī)大學(xué)合作研制的注射用抗腎病綜合癥出血熱病毒單克隆抗體（ I 型），用于出血熱的治療；第四軍醫(yī)大學(xué)細胞工程研究中心研制的國家 Ⅰ 類新藥碘［ 131I］肝癌片段抗體注射液，用于原發(fā)性肝癌的靶向治療，已完成臨床研究，臨床有效率（ CR+PR+MR）為 %，臨床獲益率 (CR+PR+MR+SD)達 %， 21 個月的生存率為 %，適用于各期肝癌的治療，有望 2020 年上市。 3個批準上市的治療性抗體藥物為我國自行開發(fā)的單抗。例如：用鏈替換（ Chain Shuffling）方法，以親本抗體的一條鏈（輕鏈）與另一條鏈（重鏈）的文庫組合，構(gòu)建抗體庫，篩選高親和力的克隆，再固定重鏈，用同樣方法選擇具有高親和力的輕鏈。以后，又利用CDR 區(qū)移植的 方法獲得抗 CD3 改形抗體（或稱重構(gòu)抗體）。 (3)病原微生物：如流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等病毒抗原；痢疾桿菌脂多糖，沙門氏菌 等細菌抗原；惡性瘧原蟲、血吸蟲等寄生蟲抗原；大腸桿菌內(nèi)毒素、破傷風(fēng)類毒素等微生物毒原抗原。據(jù)統(tǒng)計目前世界市場上銷售的 MAbs 產(chǎn)品中大約有 90%為美國公司開發(fā)上市，而其它國家僅占 10%左右，至于第三世界國家所開發(fā)生產(chǎn)的 MAbs 產(chǎn)品在市場上可能不到 1%份額。目前，全球哺乳動物細胞培養(yǎng)能力估計在 40～50 萬 升 之 間 ， 主 要 控 制 在 Genentech ， Boehringer Ingelheim 和Lonza Biologics 三家公司手中，生產(chǎn)能力已趨飽 和。 四．國內(nèi)外抗體藥物及公司概況對比 21 世紀，生物技術(shù)將與信息技術(shù)一起為全球經(jīng)濟發(fā)展提供強大的動力，成為全社會最重要并可能改變未來工業(yè)和經(jīng)濟格局的技術(shù)。 按照規(guī)劃 ,無錫單克隆抗體有限責(zé)任公司將在 2年內(nèi)生產(chǎn)單克隆抗體 2萬個 ,成為全球最大試劑型單克隆抗體研制基地。 另外， 中美合資的單克隆抗體研制項目于 2020 年 5 月在無錫 (馬山 )生物醫(yī)藥研發(fā)服務(wù)外包區(qū)奠基 ,按照規(guī)劃 ,這一項目將在 2 年內(nèi)生產(chǎn)單克隆抗體 2 萬個 ,成為全球最大試劑型單克隆抗體研制基地。 基因泰克的經(jīng)驗表明，高研發(fā)投入、合作研發(fā)策略、不斷豐富的產(chǎn)品線和雄厚的資金實力是企業(yè)成功的要素，因此要選擇具有完備的高水平技術(shù)平臺以及融資機會的企業(yè)，此外，還應(yīng)關(guān)注國內(nèi)相關(guān)政策。中國抗體藥物基數(shù)小，發(fā)展?jié)摿薮蟆Ｄ壳耙延兴膫€涉單抗類藥企上市，還有四個正在臨床試驗中。 ：國外并購布局，國內(nèi)政策支持 單克隆抗體高投入、高利潤 單克隆抗體的特點為：高投入，高價格，高利潤。這些單抗適合的給藥方法和劑量以及確定它們與其他生物和 化學(xué)治療的最佳聯(lián)合方式連續(xù)長時間的臨床試驗以確定。中位隨訪 7 年 ,抗體治療組復(fù)發(fā)率仍減少 23 % ,死亡率減少 32 %。遺憾的是 ,在轉(zhuǎn)移性大腸癌患者中很少觀察到腫瘤緩解。因為它是一個鼠源單抗 ,在輸注給人體后產(chǎn)生人抗鼠抗體的幾率較高。在過度表達 Her22Pneu 的患者中行大劑量化療加干細胞移植后使用 Herceptin 也可能是合理的。當這些細胞進入循環(huán)中 ,因為細胞表面抗原極少 ,它們在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中不被清除。 圖表 14 HER22 表達與轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效和無進展生存時間 的關(guān)系 估計僅 25 %～ 30 %轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者 過度表達 Her22。共 6 例CR ,20 例 PR ,有效率 30 %。 kg 1 。 Herceptin 和順鉑聯(lián)合治療了 37 例轉(zhuǎn)移性乳腺癌 ,抗體首次劑量為 250mg ,然后 100mg 每周 1 次靜脈注射共 9 周 。此外 ,還可以在體外介導(dǎo)抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用 (ADCC)?；A(chǔ)資料是用該藥治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高度表達 Her22Pneu 受體的患者。而且 ,盡管這組患者通常血中惡性 B 淋巴細胞克隆增加 ,但淋巴細胞的數(shù)量遠不 象 CLL 中那么多。 美羅華對慢性淋巴細胞性白血病 ( CLL) 的療效 關(guān)于這方面從理論上涉及 2 個問題。這是一項隨機的Ⅱ期試驗 ,2 組患者均接受 8 周的抗體的治療。在一項 31 例腫瘤直徑大于 10cm 的患者研究中 ,總有效率 48 % ,其中 55 %為濾泡型淋巴瘤 ,占治療組的大部分。 對美羅華有效的患者再次治療時的安全有效性 一組 60 例患者的研究表明 ,初次接受美羅華治療后達到完全緩解或部分緩解者 ,復(fù)治有效率達 41 % ,中位有效期大于 10 個月。這是一種血循環(huán)中 B 淋巴細胞上特異性抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的結(jié)果 ,并不是抗體本身的問題。與骨髓受侵、結(jié)外受侵、巨塊型患者相比 ,腫 瘤負荷小的療效更好。 美羅華的臨床試驗始于 1993 年。 三．單克隆抗體產(chǎn)品介紹 （一） . 美羅華 美羅華 ( rituximab 。其二級結(jié)構(gòu)是反向平行的β片層 輕鏈分 VL 和 CL 重鏈分 VH 和 CH 。兩條重鏈（ H）和兩條輕鏈（ L）。以內(nèi)皮細胞為靶點的單抗藥物，抑制血管新生成，可能達到抑制腫瘤生長的目的；而且靜脈注射的單抗藥物也易于到達靶部位 (內(nèi)皮細胞 )，不需要穿越細胞外間隙到達實體瘤深部的腫瘤細胞?？? eGFr 的人鼠嵌合抗體已進入臨床研究。靜脈內(nèi)注射抗腫瘤單抗，在腫瘤部位的濃度較高，顯示特異性定位。結(jié)合到腫瘤靶細胞表面的數(shù)量多，到非靶細胞的數(shù)量少；進入靶細胞內(nèi)的數(shù)量多，進入非靶細胞內(nèi)的數(shù)量少。但短期來看對目前的主流品種不會造成太大沖擊，因為如前所述，這些產(chǎn)品主要作為二線治療藥物使用，或和其他主流品種組成聯(lián)合用藥方案，并不是替代現(xiàn)有主流品種。近 20 年來，中國癌癥死亡率上升了 %，癌癥死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡構(gòu)成的 24%。② DNA 疫較蛋白質(zhì)免疫引起的免疫應(yīng)答較遲，這可能與 DNA免疫后需經(jīng)過特異性蛋白質(zhì)的表達才能激發(fā)機體的免疫應(yīng)答有關(guān) 。但有人把 DNA 直接注射至小鼠的股四頭肌也能很好地激發(fā)機體的免疫應(yīng)答。 技術(shù)原理 現(xiàn)代免疫學(xué)研究表明，機體對抗原的應(yīng)答取決于兩個要素 :①抗原的免疫原性 。 在淘選過程中會出現(xiàn)高 親和力低拷貝的特異性噬菌體抗體的丟失等。 技術(shù)原理 它是一種基因表達產(chǎn)物和親和選擇相結(jié)合的技術(shù) ， 建立在噬菌體外殼具有表達抗體蛋白片段能力的基礎(chǔ)上，以改構(gòu)的噬菌體為載體，用基因工程技術(shù)克隆人抗體可變區(qū)的全套基因 ,然后將克隆的基因插入噬菌體編碼衣殼蛋白的基因中 ,這樣在噬菌體表面表達特定抗體片段 ,而在噬菌體核心 DNA 中則含有該抗體片段的基因 ， 建立 了 噬菌體抗體文庫 ， 形成獲得一個具有上億個體外方式制得的不同抗體的基因數(shù)據(jù)庫。 1． 2 人源化抗體 制備技術(shù) 人源化改造主要是重構(gòu)抗體和表面重塑抗體?？贵w市場是從 2020 年之后開始蓬勃興起的， 20202020 年間單抗藥物復(fù)合增長率達到 41%。 另一方面，鼠 McAb 還具有免疫原性，產(chǎn)生人抗鼠抗體，既降低單抗的治療效果，又誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)。生產(chǎn)出針對復(fù)雜生物混合物中的特定分子的抗體 ,可用于 分 離、分析及純化該特定分子抗原 。要解決傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)所存在的問題 ,為單克隆抗體的應(yīng)用提供更廣闊的空間，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、 DNA 免疫制備抗體技術(shù)，制備單克隆抗體。 一． 單克隆抗體綜述 1． 1 人 鼠嵌合抗體制備技術(shù) 該技術(shù) 產(chǎn)生于 1980年代中期 ,是應(yīng)用 DNA重組技術(shù)將人 McAb 的恒定區(qū)基因替換鼠 McAb 的恒定區(qū)基因，從而編 碼產(chǎn)