【正文】 致、海正藥業(yè)、獨(dú)一味、沃森生物等。目前國際上已經(jīng)應(yīng)用于預(yù)防器官。而我國單克隆抗體藥物市場還處于起步階段，在產(chǎn)品品種和市場銷售額等方面與發(fā)達(dá)國家相比還存在一定的差距。 朱錦 上海獨(dú)一味董事長兼總經(jīng)理 單克隆抗體類藥物被譽(yù)為 “生物導(dǎo)彈 ”，在中國擁有巨大發(fā)展空間，增長幅度超過中藥和化學(xué)藥。值得一提的是，國內(nèi)單抗技術(shù)研發(fā)還不成熟，國外單抗藥物都已經(jīng)是人源的，國內(nèi)還是人源化的，相當(dāng)于美國上個(gè)世紀(jì)90年代初的樣子。 本文總結(jié)了這 3 種治療性單抗在美國廣泛應(yīng)用的情況。 1721A 治療組死亡率減少 30 % ,腫瘤復(fù)發(fā)減少 27 %。研究顯示 , 單次注射 15 ～ 1 000mg 是安全的 , 但 50 %患者在單次注射后產(chǎn)生人抗鼠抗體。 1721A 可通過不同機(jī)制產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。這樣看來 ,Herceptin 與紫杉類聯(lián)用時(shí)比與蒽環(huán)類聯(lián)用更安全。假設(shè)這些細(xì)胞在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)被快速清除 ,而這種清除又與細(xì)胞因子的釋放有關(guān) ,就可以解釋這些癥狀。以前輔助治療時(shí)曾用過蒽環(huán)類藥物者被隨機(jī)分為單用單抗或抗體加紫杉醇 175mg kg 1 ,靜滴 90min ,直至腫瘤進(jìn)展。均接受 Herceptin 負(fù)荷量 4mg第 1 周靜脈給予負(fù)荷量 250mg ,然后 ,每周 1 次靜脈注射 100mg ,共 10 周。 Hercep2tin 與受體結(jié)合導(dǎo)致受體內(nèi)在化 ,并抑制 EGF 和 Neu 分化因子與受體結(jié)合。最近 ,該抗體正在用于與 艾滋病相關(guān)的淋巴瘤或中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的治療 ,而這兩組患者在最初的試驗(yàn)中是被排除在外的。更好的策略是尋求將該抗體用于其他方式治療有效后的維持或鞏固治療?？陀^有效率高達(dá) 96 % ,其中 63 %完全 緩解和 33 %部分緩解。 美羅華對(duì)中度惡性淋巴瘤的療效 法國一項(xiàng) 54 例患者臨床試驗(yàn) [ 8 ] ,12 例套區(qū) (mantle zone) 淋巴瘤和 30 例大細(xì)胞淋巴瘤 ,總有效率為 31 % ,中位緩解期大于 8 個(gè)月。此外 ,有較長病史的濾泡型淋巴瘤患者即使對(duì)化療無效 ,也可能對(duì)美羅華有效。 h 1 。這些毒性的發(fā)生機(jī)制似乎是由于美羅華與循環(huán)中 CD20 陽 性 B 淋巴細(xì)胞 (包括正常和惡性淋巴細(xì)胞 ) 發(fā)生反應(yīng)所致。血中藥物濃度持續(xù)時(shí)間與腫瘤緩解可能性有關(guān)?？贵w與 CD20 受體結(jié)合可促進(jìn)凋亡。對(duì)分泌型 IgA 具有保護(hù)作用 圖表 8 IGM和分泌型 IGA的結(jié)構(gòu)示意圖 圖表 9 人分泌型 IGA和 IGM的局部產(chǎn)生示意圖 免疫球蛋白的功能 （一） V區(qū)的功能： 主要功能是識(shí)別和特異性的結(jié)合抗原 . Ig單體可結(jié)合兩個(gè)抗原表位，為雙價(jià) Ab +Ag—— 發(fā)揮免疫效應(yīng) B細(xì)胞膜表面的 IgM 和 IgD是 B細(xì)胞識(shí)別抗原的受體 （二） C區(qū)的功能： IgM， IgG1~3 + Ag 經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體 、 IgE 的凝聚物可經(jīng)旁路途徑激活補(bǔ)體 Fc受體 （細(xì)胞親嗜性） ：顆粒性抗原 IgG 促吞噬細(xì)胞的吞噬 5. ADCC 作用： 腫瘤細(xì)胞等與 IgG 結(jié)合 ,與 細(xì)胞 Fc 受體結(jié)合 ,增強(qiáng)其對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用 I 型超敏反應(yīng)： IgE 穿過胎盤和黏膜 圖表 10 免疫球蛋白的功能示意圖 圖表 11 抗體的調(diào)理吞噬作用示意 圖 圖表 12 I 型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖 圖表 13 抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞作用 在近 20 年深入研究和臨床試驗(yàn)之后 ,單抗用于治療癌癥逐漸受到重視 ,并從臨床試用階段轉(zhuǎn)變?yōu)槊绹?FDA 批準(zhǔn)的商品。 鉸鏈區(qū) 位于 CH1 與 CH2 之間，含有豐富的脯氨酸，因此易伸展彎曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。說明單抗藥物有可能用于克服腫瘤細(xì)胞抗藥性。近年來，以血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的單抗藥物受到廣泛關(guān)注。表皮細(xì)胞生長因子受體 (EGFr)在人鱗癌、乳腺癌和腦膠質(zhì)瘤等均有較高的表達(dá)。來源于植物或細(xì)菌的毒素，由于有強(qiáng)烈毒性，很難作為治療劑使用；但毒素 (或單鏈毒素 )與單抗的偶聯(lián)物可在動(dòng)物模型顯示療效。這種選擇性殺傷作用是單抗藥物用于腫瘤治療的重要基礎(chǔ)?？偟脕砜?，國內(nèi)抗腫瘤藥醫(yī)院用藥格局有向國外看齊的趨勢，突出表現(xiàn)在小分子激酶抑制劑、單抗和內(nèi)分泌類抗癌藥的份額穩(wěn)步擴(kuò)大。與上年相比，城市居民惡性腫瘤、腦血管病死亡比例略有上升。為特異性強(qiáng)、純度高的單克隆抗體的制備提供了一個(gè)省時(shí)省力的好方法。 具體方法 一般選用 5一 8周齡的 BALB/C 雌性小鼠，免疫 6周齡以下小鼠可獲得更好的免疫應(yīng)答，免疫 4周齡小鼠特異性蛋白質(zhì)表達(dá)水平最高。 4 DNA 免疫制備抗體技術(shù) DNA 免疫是近年發(fā)展起來的一種新型抗體制備法。 技術(shù)缺點(diǎn) 但是該技術(shù)也存在一定的缺陷 ,由于受表達(dá)系統(tǒng)的限制 ,抗體庫的庫容不足以支持獲得稀有的抗體 ,難以涵蓋一些動(dòng)物抗體的多樣性 。 在維持抗體活性和減少異源性基礎(chǔ)上選用與人抗體表面殘基相似的氨基酸殘基替換，使抗體與抗原結(jié)合具有更好的親和力和特異性。 然而，盡管盡力降低鼠源成分， 這實(shí)現(xiàn)了抗體的高度人源化 ,但仍 可誘發(fā)排異反應(yīng) ,并未完全解決鼠抗體的免疫原性問題 ,而且人源化過程繁復(fù)且費(fèi)用昂貴 ,大量的反復(fù)試驗(yàn)不可避免。此外，前景廣闊的單抗藥物受到藥企的青睞，很多跨國藥企通過收購技術(shù)平臺(tái)涉足這一領(lǐng)域，羅氏是這個(gè)領(lǐng)域內(nèi)典型的例子，其收購的基因泰克公司是單抗藥物行業(yè)的全球領(lǐng)跑者。 1975 年 ,Kohler 和 Milstein 創(chuàng)立了 雜交瘤 技術(shù)制 備單克 隆抗體( monoclonal antibody， McAb)， 所謂 McAb 是利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生長又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體是由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的具有高度特異性和均一性的抗體，故稱之為 McAb。 近年來，隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等，這些技術(shù)有效地解決了單克隆抗體鼠源性等問題，還有 DNA免疫制備抗體的研究進(jìn)展，使單克隆抗體憑借自身高度特異性和均一性的特點(diǎn)在治療腫瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面顯出了獨(dú)特的優(yōu)勢和良好的應(yīng)用前景，故單克隆抗體制備技術(shù)的發(fā)展也就顯得尤為重要。全球范圍內(nèi)單抗藥產(chǎn)業(yè)的布局是不平衡的，其中歐美研發(fā)實(shí)力最強(qiáng)，產(chǎn)品線豐富，而屬于新生力量的中國正大力發(fā)展單抗藥物，努力提供單抗藥物產(chǎn)品線。 技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn) 嵌合抗體不但具有與鼠源單抗相同的特異性、親和力和產(chǎn)量 ,而且可根據(jù)不同的需要接上不同亞 類的人恒定區(qū)基因來改變抗體的功能 ,使用更加靈活。表面重塑抗體是對(duì)鼠抗體框架區(qū)表面氨基酸的殘基進(jìn)行重塑或替換，該技術(shù)僅改造或替換與人抗體有明顯差異的表面氨基酸的殘基。當(dāng)抗體分離出來時(shí) ,噬菌體系統(tǒng)同時(shí)也提供了設(shè)計(jì)抗體親和性及其應(yīng)用的模式。核糖體展示技術(shù)已經(jīng)成功地用于生產(chǎn)抗黃體酮的抗體片段。由皮膚和肌肉途徑給予 DNA 均可產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。 DNA免疫可用于已知 DNA 編碼而又不能得到目的蛋白或獲得的抗原蛋白為低免疫原性抗原的免疫，也可用于大動(dòng)物免疫如兔、豬等。 二． 中國單克隆抗體藥物市場應(yīng)用狀況態(tài)勢分析 、腫瘤上的研究和發(fā)展 中國癌癥、腫瘤發(fā)病及死亡率概況 分泌營養(yǎng)和代謝疾病 、 消化系病 、 泌尿生殖系病 、 神經(jīng)系病 、 精神障礙 ， 前十位死因合計(jì)占死亡總數(shù)的 ％。份額增長較快的類別有小分子激酶抑制劑（特別是 2020 年，份額擴(kuò)大了 倍；單抗類也有將近 100%的增長；雖然這兩類絕對(duì)份額還不高，但發(fā)展迅速；鉑類抗癌藥由于有奧沙利鉑的加入， 5年來的份額也是逐漸擴(kuò)大；而抗代謝類抗癌藥近兩年由于他濱類藥物的 上市和普及，市場份額也有提高；抗生素類抗癌藥和細(xì)胞毒類藥物由于無新產(chǎn)品上市，份額逐漸被其他新藥所搶占。研究還表明，單抗藥物偶聯(lián)物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性比無關(guān)抗體偶聯(lián)物的活 性強(qiáng)；藥物與單抗偶聯(lián)后對(duì)腫瘤靶細(xì)胞的活性比游離藥物強(qiáng)。使用的腫瘤模型包括肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病等。 Herceptin 是抗 HER2/neu 癌基因編碼蛋白的單抗，臨床研究對(duì)乳腺癌有效，與化療藥物聯(lián)合有更顯著的療效，亦已獲批準(zhǔn)用于治療腫瘤。 CD30 受體在霍奇金淋巴瘤的腫 瘤細(xì)胞高度表達(dá)，可以作為免疫毒素攻擊的靶點(diǎn)。對(duì)于具有多藥抗性 (MDR)的腫瘤細(xì)胞，抗 p170 糖蛋白單抗構(gòu)成的免疫毒素可顯示選擇性殺傷作用。 三個(gè)高變區(qū)共同組成 Ig 的抗原結(jié)合部位，該部位也稱為互補(bǔ)性決定區(qū) （ 2）恒定 區(qū) 重鏈和輕鏈的 C區(qū)分別稱為 CH和 CL，不同類 Ig的重鏈 CH長度不一，同一種屬動(dòng)物中，同一類別 Ig分子（如 IgG） C 區(qū)氨基酸的組成和排列順序比較恒定。連接 Ig 單體使其成為多聚體 分泌片： 由黏膜上皮細(xì)胞合成和分泌，以非共價(jià)形式結(jié)合到二聚體上，并一起被分泌到黏膜表面。另有證據(jù)表明 ,CD20 是一個(gè)很重要的阻止凋亡發(fā)生的鈣離子通道受體 。一些患者腫瘤退縮緩慢 ,延遲至數(shù)月后才出現(xiàn)腫瘤縮小。這些癥狀僅為輕至中度 ,多數(shù)發(fā)生在第 1 次治療時(shí)。μ L 1 的患者 (即這組患者可能會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)烈的反應(yīng) ) 及上述有嚴(yán)重內(nèi)科情況的患者可用美羅華治療 ,但建議第 1 次治療開始時(shí)輸注速度應(yīng)減慢甚至少于 50mg這不但可解釋為什么淋巴瘤患者對(duì)初次化療無效 ,而且還提示對(duì)美羅華的有效率也相對(duì)較低。美羅華給藥的準(zhǔn)確時(shí)間并不重要 ,化療同時(shí)維持血循環(huán)和組織中抗體濃度可能更重要。在這些患者中聯(lián)合應(yīng)用 CHOP 和美羅華 ,結(jié)果與低度惡性淋巴瘤患者一樣 ,毒性無增加。治療淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)高的CLL 患者的美羅華用量可能因經(jīng)濟(jì)原因而難于實(shí)現(xiàn)。由于美羅華對(duì)復(fù)發(fā)患者有效 ,用該藥進(jìn)展緩慢型淋巴瘤首次治療效果的評(píng)價(jià)正在進(jìn)行中。通過重組 DNA 技術(shù)在中華倉鼠卵巢細(xì)胞中產(chǎn)生。 在 46 例過度表達(dá) Her22Pneu 的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 ,采用每周 1 次注射給藥。 FDA 批準(zhǔn)的基礎(chǔ)資料包括 222 例以前化療后進(jìn)展的轉(zhuǎn)移性乳腺癌和 469 例未治療過的轉(zhuǎn)移性乳腺癌 ,所有患者 Her22 表達(dá)為 2 + 或 3 + 。 Vogel 等報(bào)道 ,Herceptin 單藥一線治療 112 例 Her22Pneu 高表達(dá)的晚期乳腺癌患者 ,給藥方法有 2 種 ,一種采用 I 期推薦的給藥方法 ,另一種負(fù)荷量每周8mg m 2 ) 靜脈注射每 3 周 1 次 ,共 6 周期。 EGF 受體家族表達(dá)于許多循環(huán)細(xì)胞 ,如激活的淋巴細(xì)胞。這可能與化療藥尤其是 ADM 與單抗之間協(xié)同效應(yīng)有關(guān) ,而且可能與 ADM 輸送到心肌的量增加有關(guān) ,因?yàn)?ADM 與單抗之間有疏松連接。該物質(zhì)不進(jìn)入血循環(huán) ,其功能還不太清楚 ,但被認(rèn)為與細(xì)胞粘附有關(guān)。 對(duì) 1721A 在 80 年代初期廣泛進(jìn)行了臨床試驗(yàn)。中位隨訪 5 年 ,在無病生存和總生存方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。目前還正在研究 1721A 聯(lián)合化療和放療治療 Duke’ s B 和 C 期直腸癌。 專 家看好單抗藥物 石明博士 上海申銀萬國證券研究所醫(yī)藥行業(yè)分析師 未來幾年國內(nèi)單抗藥有望實(shí)現(xiàn)爆發(fā)式增長，增長率預(yù)計(jì)超過 50%， 10 年后，國內(nèi)市場規(guī)模有望達(dá)到目前國際水平。所以現(xiàn)在全世界都想進(jìn)入這個(gè)領(lǐng)域，甚至連做半導(dǎo)體的韓國三星集團(tuán)也已經(jīng)開始做抗體藥物。中投顧問發(fā)布的《 20202020 年中國生物制藥行業(yè)投資分析及前景預(yù)測報(bào)告》顯示，長期以來單克隆抗體 技術(shù)都被發(fā)達(dá)國家所壟斷，目前歐美發(fā)達(dá)國家的單克隆抗體藥物市場銷售額已經(jīng)高達(dá)幾百億美元。新產(chǎn)品健尼哌 (重組抗 CD25 人源化單克隆抗體注射液 )也與近期獲得了國家藥監(jiān)局的批準(zhǔn)，用于器官移植免疫抑制領(lǐng)域。中信國健依托豐富產(chǎn)品線，是國內(nèi)抗體藥物領(lǐng)域領(lǐng)軍者；百泰生物引進(jìn)古巴先進(jìn)技術(shù)，打造了我國首個(gè)人源化單抗 “泰欣生 ”。實(shí)現(xiàn)人類 2 萬多基因單克隆抗體的 全生產(chǎn) ,對(duì)診斷防治心血管病和腫瘤等疾 病具有里程碑意義。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國抗體藥物開發(fā)的 60%資金投入都在下游純化工藝的建立，藥物制造成本可達(dá)到售價(jià)的 2025%，因此，純化工藝完善是所有生物制藥企業(yè)不可忽視的一個(gè)環(huán) 節(jié)；（三）抗體藥物質(zhì)量分析，質(zhì)量設(shè)計(jì)這一理念重要性凸顯。進(jìn)入臨床研究的共有 123 件，其中 23 件已進(jìn)入 Ⅲ 期臨床或新藥申報(bào)階段。解決這個(gè)難題最有效的辦法是與其他合同加工企業(yè)或制藥公司建立長期的戰(zhàn)略合作伙伴關(guān)系，這種方式對(duì)小型的生物技術(shù)公司很有效。 早在 20 世紀(jì)八十年代初，我國科學(xué)家就利用雜交瘤技術(shù)成功開展了單克隆抗體的研制工作，截止目前已經(jīng)獲得了一大批針對(duì)各種抗原的鼠源性單克隆抗體。如抗 T 細(xì)胞免疫毒素經(jīng) SFDA 批準(zhǔn)后用于異基因骨髓移植時(shí)清除供體骨髓中成熟 T 細(xì)胞，以預(yù)防移植物抗宿主病(GVHD)； 99mTc 標(biāo)記人小細(xì)胞肺癌單抗 2F7 的 F(ab’)2 片段放射免疫診斷試劑盒已經(jīng)過國家 SFDA 批準(zhǔn)進(jìn)入臨床研究。 隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，在我國有些實(shí)驗(yàn)室開始了噬菌體抗體庫的構(gòu)建。分別是：鼠源性抗人 T淋巴細(xì)胞 CD3單抗 —— 莫羅莫那 CD3 (MuromonabCD3)，是最早從國外引進(jìn)的單抗，用于抑制排斥反