【正文】 分別是：鼠源性抗人 T淋巴細(xì)胞 CD3單抗 —— 莫羅莫那 CD3 (MuromonabCD3)，是最早從國(guó)外引進(jìn)的單抗，用于抑制排斥反應(yīng)。如抗 T 細(xì)胞免疫毒素經(jīng) SFDA 批準(zhǔn)后用于異基因骨髓移植時(shí)清除供體骨髓中成熟 T 細(xì)胞，以預(yù)防移植物抗宿主病(GVHD)； 99mTc 標(biāo)記人小細(xì)胞肺癌單抗 2F7 的 F(ab’)2 片段放射免疫診斷試劑盒已經(jīng)過(guò)國(guó)家 SFDA 批準(zhǔn)進(jìn)入臨床研究。解決這個(gè)難題最有效的辦法是與其他合同加工企業(yè)或制藥公司建立長(zhǎng)期的戰(zhàn)略合作伙伴關(guān)系，這種方式對(duì)小型的生物技術(shù)公司很有效。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)抗體藥物開(kāi)發(fā)的 60%資金投入都在下游純化工藝的建立，藥物制造成本可達(dá)到售價(jià)的 2025%，因此，純化工藝完善是所有生物制藥企業(yè)不可忽視的一個(gè)環(huán) 節(jié)；（三）抗體藥物質(zhì)量分析，質(zhì)量設(shè)計(jì)這一理念重要性凸顯。中信國(guó)健依托豐富產(chǎn)品線，是國(guó)內(nèi)抗體藥物領(lǐng)域領(lǐng)軍者；百泰生物引進(jìn)古巴先進(jìn)技術(shù)，打造了我國(guó)首個(gè)人源化單抗 “泰欣生 ”。中投顧問(wèn)發(fā)布的《 20202020 年中國(guó)生物制藥行業(yè)投資分析及前景預(yù)測(cè)報(bào)告》顯示，長(zhǎng)期以來(lái)單克隆抗體 技術(shù)都被發(fā)達(dá)國(guó)家所壟斷，目前歐美發(fā)達(dá)國(guó)家的單克隆抗體藥物市場(chǎng)銷售額已經(jīng)高達(dá)幾百億美元。 專 家看好單抗藥物 石明博士 上海申銀萬(wàn)國(guó)證券研究所醫(yī)藥行業(yè)分析師 未來(lái)幾年國(guó)內(nèi)單抗藥有望實(shí)現(xiàn)爆發(fā)式增長(zhǎng)，增長(zhǎng)率預(yù)計(jì)超過(guò) 50%， 10 年后，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)規(guī)模有望達(dá)到目前國(guó)際水平。中位隨訪 5 年 ,在無(wú)病生存和總生存方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。該物質(zhì)不進(jìn)入血循環(huán) ,其功能還不太清楚 ,但被認(rèn)為與細(xì)胞粘附有關(guān)。 EGF 受體家族表達(dá)于許多循環(huán)細(xì)胞 ,如激活的淋巴細(xì)胞。 Vogel 等報(bào)道 ,Herceptin 單藥一線治療 112 例 Her22Pneu 高表達(dá)的晚期乳腺癌患者 ,給藥方法有 2 種 ,一種采用 I 期推薦的給藥方法 ,另一種負(fù)荷量每周8mg 在 46 例過(guò)度表達(dá) Her22Pneu 的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 ,采用每周 1 次注射給藥。由于美羅華對(duì)復(fù)發(fā)患者有效 ,用該藥進(jìn)展緩慢型淋巴瘤首次治療效果的評(píng)價(jià)正在進(jìn)行中。在這些患者中聯(lián)合應(yīng)用 CHOP 和美羅華 ,結(jié)果與低度惡性淋巴瘤患者一樣 ,毒性無(wú)增加。這不但可解釋為什么淋巴瘤患者對(duì)初次化療無(wú)效 ,而且還提示對(duì)美羅華的有效率也相對(duì)較低。這些癥狀僅為輕至中度 ,多數(shù)發(fā)生在第 1 次治療時(shí)。另有證據(jù)表明 ,CD20 是一個(gè)很重要的阻止凋亡發(fā)生的鈣離子通道受體 。 三個(gè)高變區(qū)共同組成 Ig 的抗原結(jié)合部位，該部位也稱為互補(bǔ)性決定區(qū) （ 2）恒定 區(qū) 重鏈和輕鏈的 C區(qū)分別稱為 CH和 CL，不同類 Ig的重鏈 CH長(zhǎng)度不一，同一種屬動(dòng)物中，同一類別 Ig分子（如 IgG） C 區(qū)氨基酸的組成和排列順序比較恒定。 CD30 受體在霍奇金淋巴瘤的腫 瘤細(xì)胞高度表達(dá)，可以作為免疫毒素攻擊的靶點(diǎn)。使用的腫瘤模型包括肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病等。份額增長(zhǎng)較快的類別有小分子激酶抑制劑（特別是 2020 年，份額擴(kuò)大了 倍；單抗類也有將近 100%的增長(zhǎng)；雖然這兩類絕對(duì)份額還不高，但發(fā)展迅速；鉑類抗癌藥由于有奧沙利鉑的加入， 5年來(lái)的份額也是逐漸擴(kuò)大；而抗代謝類抗癌藥近兩年由于他濱類藥物的 上市和普及，市場(chǎng)份額也有提高；抗生素類抗癌藥和細(xì)胞毒類藥物由于無(wú)新產(chǎn)品上市，份額逐漸被其他新藥所搶占。 DNA免疫可用于已知 DNA 編碼而又不能得到目的蛋白或獲得的抗原蛋白為低免疫原性抗原的免疫，也可用于大動(dòng)物免疫如兔、豬等。核糖體展示技術(shù)已經(jīng)成功地用于生產(chǎn)抗黃體酮的抗體片段。表面重塑抗體是對(duì)鼠抗體框架區(qū)表面氨基酸的殘基進(jìn)行重塑或替換，該技術(shù)僅改造或替換與人抗體有明顯差異的表面氨基酸的殘基。全球范圍內(nèi)單抗藥產(chǎn)業(yè)的布局是不平衡的，其中歐美研發(fā)實(shí)力最強(qiáng)，產(chǎn)品線豐富，而屬于新生力量的中國(guó)正大力發(fā)展單抗藥物，努力提供單抗藥物產(chǎn)品線。 1975 年 ,Kohler 和 Milstein 創(chuàng)立了 雜交瘤 技術(shù)制 備單克 隆抗體( monoclonal antibody， McAb)， 所謂 McAb 是利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生長(zhǎng)又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體是由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的具有高度特異性和均一性的抗體，故稱之為 McAb。 然而，盡管盡力降低鼠源成分， 這實(shí)現(xiàn)了抗體的高度人源化 ,但仍 可誘發(fā)排異反應(yīng) ,并未完全解決鼠抗體的免疫原性問(wèn)題 ,而且人源化過(guò)程繁復(fù)且費(fèi)用昂貴 ,大量的反復(fù)試驗(yàn)不可避免。 技術(shù)缺點(diǎn) 但是該技術(shù)也存在一定的缺陷 ,由于受表達(dá)系統(tǒng)的限制 ,抗體庫(kù)的庫(kù)容不足以支持獲得稀有的抗體 ,難以涵蓋一些動(dòng)物抗體的多樣性 。 具體方法 一般選用 5一 8周齡的 BALB/C 雌性小鼠，免疫 6周齡以下小鼠可獲得更好的免疫應(yīng)答，免疫 4周齡小鼠特異性蛋白質(zhì)表達(dá)水平最高。與上年相比，城市居民惡性腫瘤、腦血管病死亡比例略有上升。這種選擇性殺傷作用是單抗藥物用于腫瘤治療的重要基礎(chǔ)。表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體 (EGFr)在人鱗癌、乳腺癌和腦膠質(zhì)瘤等均有較高的表達(dá)。說(shuō)明單抗藥物有可能用于克服腫瘤細(xì)胞抗藥性。對(duì)分泌型 IgA 具有保護(hù)作用 圖表 8 IGM和分泌型 IGA的結(jié)構(gòu)示意圖 圖表 9 人分泌型 IGA和 IGM的局部產(chǎn)生示意圖 免疫球蛋白的功能 （一） V區(qū)的功能： 主要功能是識(shí)別和特異性的結(jié)合抗原 . Ig單體可結(jié)合兩個(gè)抗原表位，為雙價(jià) Ab +Ag—— 發(fā)揮免疫效應(yīng) B細(xì)胞膜表面的 IgM 和 IgD是 B細(xì)胞識(shí)別抗原的受體 （二） C區(qū)的功能： IgM， IgG1~3 + Ag 經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體 、 IgE 的凝聚物可經(jīng)旁路途徑激活補(bǔ)體 Fc受體 （細(xì)胞親嗜性） ：顆粒性抗原 IgG 促吞噬細(xì)胞的吞噬 5. ADCC 作用： 腫瘤細(xì)胞等與 IgG 結(jié)合 ,與 細(xì)胞 Fc 受體結(jié)合 ,增強(qiáng)其對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用 I 型超敏反應(yīng)： IgE 穿過(guò)胎盤(pán)和黏膜 圖表 10 免疫球蛋白的功能示意圖 圖表 11 抗體的調(diào)理吞噬作用示意 圖 圖表 12 I 型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖 圖表 13 抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞作用 在近 20 年深入研究和臨床試驗(yàn)之后 ,單抗用于治療癌癥逐漸受到重視 ,并從臨床試用階段轉(zhuǎn)變?yōu)槊绹?guó) FDA 批準(zhǔn)的商品。血中藥物濃度持續(xù)時(shí)間與腫瘤緩解可能性有關(guān)。 h 1 。 美羅華對(duì)中度惡性淋巴瘤的療效 法國(guó)一項(xiàng) 54 例患者臨床試驗(yàn) [ 8 ] ,12 例套區(qū) (mantle zone) 淋巴瘤和 30 例大細(xì)胞淋巴瘤 ,總有效率為 31 % ,中位緩解期大于 8 個(gè)月。更好的策略是尋求將該抗體用于其他方式治療有效后的維持或鞏固治療。 Hercep2tin 與受體結(jié)合導(dǎo)致受體內(nèi)在化 ,并抑制 EGF 和 Neu 分化因子與受體結(jié)合。均接受 Herceptin 負(fù)荷量 4mg以前輔助治療時(shí)曾用過(guò)蒽環(huán)類藥物者被隨機(jī)分為單用單抗或抗體加紫杉醇 175mg這樣看來(lái) ,Herceptin 與紫杉類聯(lián)用時(shí)比與蒽環(huán)類聯(lián)用更安全。研究顯示 , 單次注射 15 ～ 1 000mg 是安全的 , 但 50 %患者在單次注射后產(chǎn)生人抗鼠抗體。 本文總結(jié)了這 3 種治療性單抗在美國(guó)廣泛應(yīng)用的情況。 朱錦 上海獨(dú)一味董事長(zhǎng)兼總經(jīng)理 單克隆抗體類藥物被譽(yù)為 “生物導(dǎo)彈 ”，在中國(guó)擁有巨大發(fā)展空間，增長(zhǎng)幅度超過(guò)中藥和化學(xué)藥。目前國(guó)際上已經(jīng)應(yīng)用于預(yù)防器官。 美國(guó)傲銳基因科技有限公司是美國(guó)著名的以基因?yàn)橹行牡目蒲性噭┕?,是世界上少數(shù)能夠快速和準(zhǔn)確分離人體全長(zhǎng)核糖核酸的機(jī)構(gòu)之一。而這些藥物所用的抗體均以人源化抗體為主，約占 39%，其次是完全人源的抗體和鼠源性抗體。這些抗原主要有： (1)細(xì)胞表面抗原，如血型抗原、白細(xì)胞分化抗原、組織相容性抗原、膜受體等。用抗體庫(kù)技術(shù)直接制備人源抗體，例如利用被病原微生物感染的病人外周血細(xì)胞制備噬菌體抗體庫(kù)，用特定抗原進(jìn)行篩選，獲得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗體。 HR3 是繼用于治療結(jié)腸癌淋巴轉(zhuǎn)移患者的 PANOREX和用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的 HERCTPTIN之后，又一個(gè)面世的單克隆抗體實(shí)體瘤治療藥物，比美國(guó)的同類藥物 Erbi。完成了 Diabody 和 Minibody 等小分抗 體的研究，如 CD20/CD3 Diabody?？梢詳嘌?，隨著嶄新的單克隆抗體 “ 生物導(dǎo)彈 ” 抗癌 新制劑在今后幾年內(nèi)的不斷上市，必將為眾多癌癥患者帶來(lái)福音。 Pharmaproject 的一份統(tǒng)計(jì)資料 顯示，截止 2020 年為止，全球共有 11 個(gè)抗體藥物被批準(zhǔn)上市；截至 2020 年已達(dá) 22個(gè)，其中以人源化和嵌合抗體為主。而現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的人類 2 萬(wàn)多基因中 ,目前僅 20%左右能生產(chǎn)單克隆抗體。這四家子公司均涉及單抗類藥物產(chǎn)業(yè)，其中產(chǎn)業(yè)化最為成功的是中信國(guó)健，其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和銀屑病的產(chǎn)品益賽普為我國(guó)第一款人源化的治療性單抗產(chǎn)品。 表 2：?jiǎn)慰故杖肱c產(chǎn)量 周新華 嘉和生物首席執(zhí)行官 由于新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，原來(lái)令大多數(shù)廠家望而卻步的治療性單克隆抗體仿制藥行業(yè)，現(xiàn)在似乎變得唾手可得。歐洲的試驗(yàn)比較單用1721A 抗體 ,5Fu + CF ,5Fu + CF + 1721A 的療效。在接受 1721A 治療的患者中觀察到這種現(xiàn)象 ,而且正在被應(yīng)用于制作包含 Ab2 的人源疫苗。資料表明 ,心臟毒性在使用紫杉醇時(shí)并不增加 ,但ADM ,CTX 加 Herceptin 可增加心臟毒性。 m 2 ) 和環(huán)磷酰胺 ( 600mg毒性與二藥單用大致相同。 Herceptin 是一種與 P185Her22Pneu 受體發(fā)生反應(yīng)的鼠 P 人免疫球蛋白 IgG1 嵌合抗體。劑量爬坡試驗(yàn)證明 ,淋巴結(jié) 中淋巴細(xì)胞增多的情況有一定程度減少 ,但該效果持續(xù)時(shí)間有限。與單用 CHOP 和單用美羅華相比 ,毒性沒(méi)有增加。淋巴細(xì) 胞計(jì)數(shù)超過(guò) 5 000 個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示 :血中美羅華水平通常在治療后持續(xù)升高 3～ 6 個(gè)月。 圖表 5 免疫球蛋白的木瓜蛋白酶水解示意圖 胃蛋白酶裂解 IgG 得到一個(gè)具有雙價(jià)活性的 F（ ab’ ） 2 段和若干個(gè)小分子多肽碎片（ pFc’ ） 圖表 6 免疫球蛋白的胃蛋白酶裂解 圖表 7 免疫球蛋白的胃蛋白酶裂解 （四） J鏈和分泌片 J鏈： J鏈?zhǔn)且粭l多肽鏈，富含半胱氨酸，由漿細(xì)胞合成。對(duì)于長(zhǎng)期使用氨甲蝶呤而出現(xiàn)抗藥性的成骨肉瘤細(xì)胞，單抗氨甲蝶呤偶聯(lián)物仍顯示較強(qiáng)的殺傷作用。 Rituxan 是以 B 細(xì)胞的 CD20 分子為靶點(diǎn)的人鼠嵌合抗體，對(duì)非霍奇金 B細(xì)胞淋巴瘤有療效，是第一個(gè)獲美國(guó) FDA 批準(zhǔn)用于治療惡性腫瘤的單抗。 單抗藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用 研究結(jié)果表明，單抗與藥物偶聯(lián)物或與毒素偶聯(lián)物對(duì)腫瘤靶細(xì)胞顯示選擇性殺傷作用，對(duì)表達(dá)有關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞作用強(qiáng)，對(duì)抗原性無(wú)關(guān)細(xì)胞的作用弱或無(wú)作用。同時(shí) DNA 免疫激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)而持久的體液免疫，這為高產(chǎn)量特異性多克隆抗體和純度高、特異性強(qiáng)的單克隆抗體的獲得提供了必要條件，在 許多疾病如病毒性疾病和腫瘤等診斷和免疫治療中具有良好的應(yīng)用前景。雖然 DNA 免疫后在體內(nèi)如何被細(xì)胞攝取及其表達(dá)的抗原又如何被遞呈尚未完全清楚，但許多文獻(xiàn)均證實(shí)了肌細(xì)胞對(duì) DNA的攝取及抗原蛋白的表達(dá)起到很重要的作用。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn) 噬菌體展示技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是一旦噬菌體庫(kù)建立后 ,就可以根據(jù)需要直接從文庫(kù)中篩選得到針對(duì)目標(biāo)抗原的特異性抗體 ,大大縮短了單克隆抗體的制備周期并且 得到的抗體可用于制備完全人源化抗體。 1980 年代中后期 ,科學(xué)家對(duì)嵌合抗體進(jìn)一步改進(jìn)后 ,抗體基因只有互補(bǔ)性決定區(qū) (CDR)是鼠源成分 ,其余均為人基因序列 , 技術(shù)原理 即 將鼠源性單抗在保留其抗原結(jié)合活性的基礎(chǔ)上，盡可能去除鼠源化部分或代之以人源化片段，從而盡可能減少單抗的異源性 ，然后 根據(jù)所用的載體質(zhì)粒標(biāo)記基因產(chǎn)物 ,選用適當(dāng)?shù)目股鼗蛟噭┻M(jìn)行篩選 ,再用與傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗體的細(xì)胞株。其試劑可用于臨床 診斷和治療 ,或用于以單抗為彈頭的 “ 生物導(dǎo)彈 ” 藥物等。 全球生物制藥產(chǎn)業(yè)正處于快速上升期，其中單克隆抗體藥物最為活躍，相比2020 年的 480 億美元， 2020 年全球單抗藥物的市場(chǎng)總量已經(jīng)達(dá)到 628 億美元，增速為 %。 2．噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 噬菌 體抗體庫(kù)技術(shù)是迄今發(fā)展最成熟、應(yīng)用最廣泛的抗體庫(kù)技術(shù)。 DNA 免疫克服了傳統(tǒng)蛋白質(zhì)免疫方法的缺陷，能更為有效地激發(fā)機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，為某些疾病如病毒性疾病和腫瘤等的診斷和免疫治療開(kāi)拓了新的途徑。 技術(shù)存在缺點(diǎn) 大部分 DNA被核酸酶降解，解決 DNA在動(dòng)物體內(nèi)的穩(wěn)定性是 DNA免疫的關(guān)鍵 。國(guó)外制藥巨頭也看好國(guó)內(nèi)抗腫瘤藥市場(chǎng)潛力，引入新產(chǎn)品的速度明顯加快，一些產(chǎn)品在國(guó)外剛上市一年，在國(guó)內(nèi)已有進(jìn)口產(chǎn)品。研究表明，單抗藥物在動(dòng)物體內(nèi)呈特異性分布。實(shí)體瘤的生長(zhǎng)與血管密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞增殖如果缺乏相應(yīng)的血管