【正文】 3 種治療性單抗在美國(guó)廣泛應(yīng)用的情況。 北美的一些試驗(yàn)正在比較 5Fu + 左旋咪唑或 5Fu + CF 與 5Fu + 1721A 治療Duke’ s C 期結(jié)腸癌。 1721A 治療組死亡率減少 30 % ,腫瘤復(fù)發(fā)減少 27 %。入組患者均為 Duke’ sC 期行完全切除以盡可能根治的結(jié)腸癌患者。研究顯示 , 單次注射 15 ～ 1 000mg 是安全的 , 但 50 %患者在單次注射后產(chǎn)生人抗鼠抗體。作為 B 細(xì)胞增殖基因型網(wǎng)絡(luò)控制中的一部分 ,Ab2 產(chǎn)生對(duì)抗自身的抗體 , 包括與Ab2 的基因型發(fā)生反應(yīng)的抗體 (Ab3) 。 1721A 可通過(guò)不同機(jī)制產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。過(guò)度表達(dá)Her22Pneu 的患者在理論上都可作為應(yīng)用 Herceptin 的臨床試驗(yàn)的入選者。這樣看來(lái) ,Herceptin 與紫杉類(lèi)聯(lián)用時(shí)比與蒽環(huán)類(lèi)聯(lián)用更安全。毒性在第 1 次輸注單抗后最明顯 ,在以后的治療中只要保持同樣血清單抗水平就不會(huì)發(fā)生毒性。假設(shè)這些細(xì)胞在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)被快速清除 ,而這種清除又與細(xì)胞因子的釋放有關(guān) ,就可以解釋這些癥狀。與單用化療相比 ,化療加 Her2ceptin 治療的患者有效率更高 ,且緩解期更長(zhǎng) ,提示在治療乳腺癌時(shí)最好是與化療聯(lián)合應(yīng)用而不是單用。以前輔助治療時(shí)曾用過(guò)蒽環(huán)類(lèi)藥物者被隨機(jī)分為單用單抗或抗體加紫杉醇 175mg 469 例以前未接受過(guò)化療的患者隨機(jī)分入化療組或不加 Herceptin 組 ,動(dòng)物研究提示 ,在抗體存在的情況下 ,可增加化療藥的細(xì)胞毒作用。 kg 1 ,靜滴 90min ,直至腫瘤進(jìn)展。 222 例化療失敗患者參加的是開(kāi)放性非隨機(jī)試驗(yàn) ,其中 66 %以前接受過(guò)輔助化療 ,68 %因轉(zhuǎn)移至少接受過(guò) 2 種化療方案 ,25 %大劑量化療加自體造血干細(xì)胞解救后復(fù)發(fā)。均接受 Herceptin 負(fù)荷量 4mg m 2 ,d1 ,d29 和 d57 。第 1 周靜脈給予負(fù)荷量 250mg ,然后 ,每周 1 次靜脈注射 100mg ,共 10 周。隨著劑量的提高 ,平均半衰期延長(zhǎng)并且清除減少 ,10 和 500mg 劑量水平的半衰期分別為 1. 7d 和 12d。 Hercep2tin 與受體結(jié)合導(dǎo)致受體內(nèi)在化 ,并抑制 EGF 和 Neu 分化因子與受體結(jié)合。 Her22Pneu 是一個(gè) 185kd 的跨膜受體 ,結(jié)構(gòu)與表皮生長(zhǎng)因子(EGF) 受體高度同源。最近 ,該抗體正在用于與 艾滋病相關(guān)的淋巴瘤或中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的治療 ,而這兩組患者在最初的試驗(yàn)中是被排除在外的。 CHOP 和 CHOP 加美羅華的臨床隨機(jī)對(duì)比試驗(yàn)正在進(jìn)行。更好的策略是尋求將該抗體用于其他方式治療有效后的維持或鞏固治療。最近的報(bào)道證實(shí)了第一種情況 ,即在血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)高的患者中發(fā)生了 3～ 4 度毒性?？陀^有效率高達(dá) 96 % ,其中 63 %完全 緩解和 33 %部分緩解。 m 2 ,每周 1 次共 8 周 ,另一組在第 1 周給予標(biāo)準(zhǔn)劑量后 ,第 2～ 8 周給予 500mg 美羅華對(duì)中度惡性淋巴瘤的療效 法國(guó)一項(xiàng) 54 例患者臨床試驗(yàn) [ 8 ] ,12 例套區(qū) (mantle zone) 淋巴瘤和 30 例大細(xì)胞淋巴瘤 ,總有效率為 31 % ,中位緩解期大于 8 個(gè)月。 抗體劑量與有效率的關(guān)系 在一項(xiàng)低度惡性淋巴瘤試驗(yàn)中 , 患者接受 8 周治療 , 有效率大約 60 % ,但尚不清楚是否效果更持久。此外 ,有較長(zhǎng)病史的濾泡型淋巴瘤患者即使對(duì)化療無(wú)效 ,也可能對(duì)美羅華有效。有時(shí)效果比初治時(shí)更好更持久 ,這可能與患者在復(fù)治時(shí)腫瘤負(fù)荷更小有關(guān)。 h 1 。另一方面 ,快速輸入與循環(huán)中 B 細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的大劑量單抗可導(dǎo)致嚴(yán)重反應(yīng) ,包括嚴(yán)重低氧血癥、重度低血壓及死亡。這些毒性的發(fā)生機(jī)制似乎是由于美羅華與循環(huán)中 CD20 陽(yáng) 性 B 淋巴細(xì)胞 (包括正常和惡性淋巴細(xì)胞 ) 發(fā)生反應(yīng)所致。對(duì)如此高有效率可能的解釋是 :這些患者治療開(kāi)始時(shí)腫瘤負(fù)荷小 ,因?yàn)閷?duì)這些移植后患者觀察密切 ,一旦復(fù)發(fā)即得到治療 ,且事實(shí)上所有患者均為濾泡型淋巴瘤。血中藥物濃度持續(xù)時(shí)間與腫瘤緩解可能性有關(guān)。在一項(xiàng) 166 例化療后進(jìn)展的低度惡性淋巴瘤患者進(jìn)行的試驗(yàn)中 ,美羅華治療濾泡型淋巴瘤有效率 約 60 %?？贵w與 CD20 受體結(jié)合可促進(jìn)凋亡。 美羅華是利用重組 DNA 技術(shù)將鼠源免疫球蛋白 ( Ig) 的可變區(qū)與人免疫球蛋白 G1 恒定區(qū)結(jié)合的鼠 P 人嵌合抗體 ,可在中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中大量產(chǎn)生。對(duì)分泌型 IgA 具有保護(hù)作用 圖表 8 IGM和分泌型 IGA的結(jié)構(gòu)示意圖 圖表 9 人分泌型 IGA和 IGM的局部產(chǎn)生示意圖 免疫球蛋白的功能 （一） V區(qū)的功能： 主要功能是識(shí)別和特異性的結(jié)合抗原 . Ig單體可結(jié)合兩個(gè)抗原表位，為雙價(jià) Ab +Ag—— 發(fā)揮免疫效應(yīng) B細(xì)胞膜表面的 IgM 和 IgD是 B細(xì)胞識(shí)別抗原的受體 （二） C區(qū)的功能： IgM， IgG1~3 + Ag 經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體 、 IgE 的凝聚物可經(jīng)旁路途徑激活補(bǔ)體 Fc受體 （細(xì)胞親嗜性） ：顆粒性抗原 IgG 促吞噬細(xì)胞的吞噬 5. ADCC 作用： 腫瘤細(xì)胞等與 IgG 結(jié)合 ,與 細(xì)胞 Fc 受體結(jié)合 ,增強(qiáng)其對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用 I 型超敏反應(yīng)： IgE 穿過(guò)胎盤(pán)和黏膜 圖表 10 免疫球蛋白的功能示意圖 圖表 11 抗體的調(diào)理吞噬作用示意 圖 圖表 12 I 型超敏反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制示意圖 圖表 13 抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞作用 在近 20 年深入研究和臨床試驗(yàn)之后 ,單抗用于治療癌癥逐漸受到重視 ,并從臨床試用階段轉(zhuǎn)變?yōu)槊绹?guó) FDA 批準(zhǔn)的商品。 IgM、 IgE 分 功能區(qū)的作用： ① VH 和 VL 是結(jié)合抗原的部位； ② CH 和 CL上具有部分同種異型的遺傳志； ③ IgG 的 CH2和 IgM 的 CH3 具有補(bǔ)體 C1q結(jié)合位點(diǎn)，可啟動(dòng)補(bǔ)體活化經(jīng)典途徑； ④ IgG 可通過(guò)胎盤(pán)； ⑤ IgG 的 CH3可結(jié)合細(xì)胞表面的 FcR； IgE 的 CH2 和 CH3可與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的 IgE Fc 受體結(jié)合。 鉸鏈區(qū) 位于 CH1 與 CH2 之間，含有豐富的脯氨酸，因此易伸展彎曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。 Ig 根據(jù)其重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子 結(jié)構(gòu)和抗原特異性的不同，分為五類(lèi)： 類(lèi)別與重鏈對(duì)應(yīng)關(guān)系如下 分類(lèi)： IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE， 重鏈： γ、 α、 μ、 δ、 ε ：κ、λ型 根據(jù)氨基酸排列順序的不同分為可變區(qū)（ V）和恒定區(qū)（ C）。說(shuō)明單抗藥物有可能用于克服腫瘤細(xì)胞抗藥性。據(jù)報(bào)道，抗 VEGF 的中和性單抗具有廣譜的抗腫瘤作用，對(duì)移植于裸鼠的人體癌瘤有顯著療效。近年來(lái)，以血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶點(diǎn)的單抗藥物受到廣泛關(guān)注?？罐D(zhuǎn)鐵蛋白受體單抗構(gòu)成的免疫毒素對(duì)腦瘤細(xì)胞有高度細(xì)胞毒性；高度惡性的腫瘤對(duì)免疫毒素的敏感性更高。表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體 (EGFr)在人鱗癌、乳腺癌和腦膠質(zhì)瘤等均有較高的表達(dá)。確定單抗或單抗偶聯(lián)物在體內(nèi)具有靶向性，為進(jìn)一步闡明其療效提供了依據(jù)。來(lái)源于植物或細(xì)菌的毒素，由于有強(qiáng)烈毒性，很難作為治療劑使用；但毒素 (或單鏈毒素 )與單抗的偶聯(lián)物可在動(dòng)物模型顯示療效。 單抗藥物具有更高的療效 由抗人體腫瘤的單抗與藥物構(gòu)成的偶聯(lián)物對(duì)移植于裸鼠的相應(yīng)人體腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用。這種選擇性殺傷作用是單抗藥物用于腫瘤治療的重要基礎(chǔ)。但正因?yàn)閮r(jià)格高，所以可在短時(shí)間內(nèi)使用藥額大幅提高。總得來(lái)看，國(guó)內(nèi)抗腫瘤藥醫(yī)院用藥格局有向國(guó)外看齊的趨勢(shì)，突出表現(xiàn)在小分子激酶抑制劑、單抗和內(nèi)分泌類(lèi)抗癌藥的份額穩(wěn)步擴(kuò)大。癌癥每年給中國(guó)造成的經(jīng)濟(jì)損 失逾千億元。與上年相比，城市居民惡性腫瘤、腦血管病死亡比例略有上升。 技術(shù)應(yīng)用前景 隨著 DNA 免疫技術(shù)的發(fā)展，能免疫除多糖類(lèi)抗原外所有已知 DNA編碼的蛋白質(zhì)抗原，如病毒蛋白、免疫球蛋白、腫瘤抗原等閉。為特異性強(qiáng)、純度高的單克隆抗體的制備提供了一個(gè)省時(shí)省力的好方法。還有人發(fā)現(xiàn)肌肉注射 DNA 的特異性蛋白質(zhì)表達(dá)效率明顯高于靜脈注射 DNA，經(jīng)皮內(nèi)注射和肌肉注射等量 DNA，發(fā)現(xiàn)肌肉免疫的方法產(chǎn)生特異性抗體和 CTL的效率高，因而肌肉注射方法最佳。 具體方法 一般選用 5一 8周齡的 BALB/C 雌性小鼠，免疫 6周齡以下小鼠可獲得更好的免疫應(yīng)答，免疫 4周齡小鼠特異性蛋白質(zhì)表達(dá)水平最高。在抗原的免疫原性無(wú)法改變的情況下，可提高機(jī)體對(duì)相應(yīng)抗原的反應(yīng)性。 4 DNA 免疫制備抗體技術(shù) DNA 免疫是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型抗體制備法。 技術(shù)原理 該技術(shù)建立不受細(xì)胞轉(zhuǎn)染和表達(dá)等因素影響的完全體外展示系統(tǒng) ， 利用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增含目的基因的 cDNA 文庫(kù)，同時(shí)引入啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)及莖環(huán)結(jié)構(gòu)，在轉(zhuǎn)錄 /翻譯耦聯(lián)系統(tǒng)作用下，形成 “ 蛋白質(zhì) 核糖體 mRNA” 三元復(fù)合物，構(gòu)成核糖體展示的抗體庫(kù)，再用相應(yīng)的抗原對(duì)翻譯混合物進(jìn)行篩選并從中分離 mRNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈反應(yīng)富集目的基因，并將目的基因?qū)氡磉_(dá)載體，從而獲得庫(kù)容量大、特異性強(qiáng)、親和力高的人源基因工程抗體庫(kù)。 技術(shù)缺點(diǎn) 但是該技術(shù)也存在一定的缺陷 ,由于受表達(dá)系統(tǒng)的限制 ,抗體庫(kù)的庫(kù)容不足以支持獲得稀有的抗體 ,難以涵蓋一些動(dòng)物抗體的多樣性 。用表達(dá)有相應(yīng)抗體分子的噬菌體顆粒去感染宿主菌 ,使該噬菌體顆粒得到擴(kuò)增。 在維持抗體活性和減少異源性基礎(chǔ)上選用與人抗體表面殘基相似的氨基酸殘基替換，使抗體與抗原結(jié)合具有更好的親和力和特異性。 SDR 移植抗體僅將 異源抗體 CDR 區(qū)內(nèi)與抗原結(jié)合關(guān)系密切的 SDR，移植到人抗體相應(yīng)位置上，使人源化抗體的免疫原性進(jìn)一步降低。 然而，盡管盡力降低鼠源成分， 這實(shí)現(xiàn)了抗體的高度人源化 ,但仍 可誘發(fā)排異反應(yīng) ,并未完全解決鼠抗體的免疫原性問(wèn)題 ,而且人源化過(guò)程繁復(fù)且費(fèi)用昂貴 ,大量的反復(fù)試驗(yàn)不可避免。到 2020 年，全球單克隆抗體藥銷(xiāo)售額有望達(dá) 980 億美元左右 。此外，前景廣闊的單抗藥物受到藥企的青睞，很多跨國(guó)藥企通過(guò)收購(gòu)技術(shù)平臺(tái)涉足這一領(lǐng)域，羅氏是這個(gè)領(lǐng)域內(nèi)典型的例子，其收購(gòu)的基因泰克公司是單抗藥物行業(yè)的全球領(lǐng)跑者。此外 ,傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)還存在制備周期較長(zhǎng) ,成本較高 ,雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定抗性會(huì)丟失等缺陷。 1975 年 ,Kohler 和 Milstein 創(chuàng)立了 雜交瘤 技術(shù)制 備單克 隆抗體( monoclonal antibody， McAb)， 所謂 McAb 是利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生長(zhǎng)又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體是由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的具有高度特異性和均一性的抗體，故稱(chēng)之為 McAb。 專(zhuān)業(yè) 課程論文 題 目 : 單克隆抗體綜述及其行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)分析 姓 名 : 徐夢(mèng)佳 學(xué) 院 : 食品科技學(xué)院 專(zhuān) 業(yè) : 生物工程 班 級(jí) : 102 班 學(xué) 號(hào) : 18410221 指 導(dǎo)教師 : 王曉晴 2020 年 3 月 20 日 單克隆抗體綜述及其行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)分析 摘要：?jiǎn)慰寺】贵w技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要工具，它 可用于分析抗原的細(xì)微結(jié)構(gòu)及檢驗(yàn)抗原抗體未知的結(jié)構(gòu)關(guān)系 。 近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等，這些技術(shù)有效地解決了單克隆抗體鼠源性等問(wèn)題，還有 DNA免疫制備抗體的研究進(jìn)展，使單克隆抗體憑借自身高度特異性和均一性的特點(diǎn)在治療腫瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面顯出了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和良好的應(yīng)用前景，故單克隆抗體制備技術(shù)的發(fā)展也就顯得尤為重要。 因此 ,在保持對(duì)特異抗原表位的高親和力的基礎(chǔ)上人源化和全人化的改造 ,減少異源抗體的免疫原性成為單抗研究的重點(diǎn)。全球范圍內(nèi)單抗藥產(chǎn)業(yè)的布局是不平衡的，其中歐美研發(fā)實(shí)力最強(qiáng)，產(chǎn)品線(xiàn)豐富，而屬于新生力量的中國(guó)正大力發(fā)展單抗藥物，努力提供單抗藥物產(chǎn)品線(xiàn)。中國(guó)行業(yè)研究網(wǎng)發(fā)布的《 20202020 年中國(guó)單克隆抗體行業(yè)投資分析及深度研究咨詢(xún)報(bào)告》顯示：未來(lái)，全球單克隆抗體藥依舊會(huì)保持較高的增長(zhǎng)率。 技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn) 嵌合抗體不但具有與鼠源單抗相同的特異性、親和力和產(chǎn)量 ,而且可根據(jù)不同的需要接上不同亞 類(lèi)的人恒定區(qū)基因來(lái)改變抗體的功能 ,使用更加靈活。 技術(shù)原理 抗體上， 并不是整個(gè) CDR 都參與抗原的特異性識(shí)別，在 CDR 區(qū)中僅一部分氨基酸殘基與抗原結(jié)合，這些氨基酸殘基決定抗體的特異性，被稱(chēng)之 SDR。表面重塑抗體是對(duì)鼠抗體框架區(qū)表面