【正文】 分別是：武漢生物制品研究所抗腎移植單抗 OKT3（注射用鼠源性抗人 T淋巴細(xì)胞 CD3 抗原單克隆抗體），也是最早批準(zhǔn)上市的國內(nèi)自行研制的抗體，具有免疫抑制作用，可逆轉(zhuǎn)對移植器官的排斥反應(yīng)；東莞宏遠(yuǎn)逸士生物技術(shù)藥業(yè)有限公司的抗人 IL8 單克隆抗體乳膏，用于牛皮癬的治療；上海美恩生物技術(shù)有限公司開發(fā)的碘［ 131I］人鼠嵌合型腫瘤細(xì)胞核單克隆抗體注射液（ 131IchTNT），用于多種實體瘤，該藥物為國家 Ⅰ 類新藥，它的批準(zhǔn)上市標(biāo)志著我國抗體藥物的研究已經(jīng)進入全新發(fā)展階段。一些特異性好，有 應(yīng)用前景的鼠抗體，利用抗原表位定向選擇（ epitope guided selection, EGS）方法，以鼠單抗可變區(qū)為模板，經(jīng)噬菌體展示技術(shù)，通過抗原導(dǎo)向，篩選能夠模擬鼠單抗可變區(qū)，結(jié)合相同抗原決定簇的人抗體，經(jīng)這一方法獲得人源抗體。隨著基因操作技術(shù)的發(fā)展和普及，許多實驗室成功地獲得針對各種抗原，如 VEGF、 CEA、 TNFa 等的人鼠嵌合抗體和各種單鏈抗體。 (4)其它抗原，如細(xì)胞因子、酶、血漿原蛋白、免疫球蛋白、補體、激素等。 單克隆抗體迄今為止主要用于診斷試劑以及治療藥。由于許多生物技術(shù)公司長期處于臨床研究延遲的實驗室研究階段，面對突然間取得的成功估計不足，造成了生產(chǎn)能力的不足?？贵w工程技術(shù)隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展而不斷完善，并且是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的主力軍，尤其在生物技術(shù)制藥領(lǐng)域占有重要地位。同時 ,利用 3 年左右的時間 ,完成人類所有單克隆抗體的制備計劃及單克隆抗體的二次開發(fā) ,得到具有診斷抗體和治療抗體 ,用于臨床研究。 無錫單克隆抗體有限責(zé)任公司是由美國傲銳基因科技有限公司與無錫 (馬山 )生物醫(yī)藥研發(fā)服務(wù)外包區(qū)共同籌建的 ,將致力于研發(fā)和生產(chǎn)所有人類蛋白單克隆抗體 ,診斷用抗體、治療性抗體的研發(fā)生產(chǎn)以及服務(wù)外包。在政策支持、研發(fā)產(chǎn)業(yè)化、資本助力三大因素合力下，我國抗體藥物企業(yè)將乘風(fēng)破浪。 ：基因泰克領(lǐng)跑全球，蘭生國健在國內(nèi)一枝獨秀 基因泰克作為羅氏子公司是單抗產(chǎn)品的領(lǐng)軍企業(yè)，擁有最多的 7 個上市產(chǎn)品，包括 阿瓦斯汀 、赫塞汀和美羅華等重磅炸彈產(chǎn)品，其主要單抗產(chǎn)品銷售額在2020 年已經(jīng)突破 200 億美金。中國已擁有上海、北京、西安三個研發(fā)中心，但與美國相比還有一定的距離。單克隆抗體平均９億美元的研發(fā)費，研發(fā)周期長達 810 年，但一旦上市能為廠家?guī)碡S厚回報。 三．行業(yè)發(fā)展及上市公司 1． 治療性抗體發(fā)展歷程和事件 1975 年，單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)宣告誕生； 1981 年，應(yīng)用抗體治療淋巴瘤取得成功； 1986 年，美國 FDA 批準(zhǔn)全球第一個治療性鼠源性單克隆抗體 OKT3 上市，由此拉開了單抗藥物治療疾病的序幕； 1988 年，單克隆 抗體用于腫瘤治療效果不佳； 1993 年，內(nèi)毒素單克隆抗體適用于治療敗血癥性休克失敗； 1997 年，賽尼哌（ Zenapax）作為第一個人源化單抗于投放市場； 1998 年，單克隆抗體進入大量審批上市階段； 1999 年，我國最早上市的單抗是武漢生物制品研究所生產(chǎn)的 T淋巴細(xì)胞 CD3 抗原單抗； 2020 年，修美樂（ Humira）作為全球第一個全人源化抗體于上市； 2020 年，國內(nèi)單抗藥物領(lǐng)軍企業(yè)中信國健研發(fā)的重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體抗體融合蛋白（益賽普）上市； 截止到 2020 年 5月， FDA 批準(zhǔn)上市了 45 個單抗治療性 藥物。 1721A 在德國于 1994 年被批準(zhǔn)用于治療 Duke’ sC 期結(jié)直腸癌。 于 1990～ 1992 年間在德國進行的一項多中心隨機性輔助治療結(jié)果發(fā)表以后 ,1721A 的抗癌前景發(fā)生了改變。人抗鼠抗體 (Ab2) 中的一些與 1721 鼠抗體 (Ab1) 的基因型起反應(yīng)。 Her22Pneu 在許多腫瘤中均有過度表達 ,包括前列腺癌和卵巢 [ 21～ 23 ] 。因此 ,除非在輸注開始后很快測量 ,否則是測量不到的。因此 ,適于臨床試驗的所有轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 17 % 25 %= 4 %可能有望在化療后疾病進展時對Herceptin 有效。中位緩解期 8 個月 ,中位生存期 13 個月 ,其中Her22Pneu (3 + ) 者有效率達 31 %。如果沒有發(fā)生輸液相關(guān)毒性反應(yīng) ,第 1 次輸注時間為 90min ,以后治療輸注 30min。 順鉑為 75mg Herceptin 的藥代動力學(xué)研究表明 , 每一次短時間靜脈注射10 ,50 ,100 ,250 ,500mg 均顯示出劑量依賴性。該藥可能對高度表達 Her22Pneu 受體的其他腫瘤也有活性。一項 7 例患者的報道中 ,有 4 例客觀腫瘤緩解 ,未發(fā)現(xiàn)更多的毒性反應(yīng)。一是由于循環(huán)中淋巴細(xì)胞計數(shù)過高而導(dǎo)致可能的毒性 ,另外大多數(shù) CLL 細(xì)胞 CD20 表達水平過低而可能基本無毒性反應(yīng) ,也無顯著的抗腫瘤效果。一組接受 375mg研究資料提示 ,任何單個病灶的大小并不象腫瘤負(fù)荷和 CD20 的表達水平那樣重要。毒性與初治時相似 ,包括已知的在首次給藥時與循環(huán)中 B 細(xì)胞發(fā)生反 應(yīng)引起的相關(guān)毒性。一些與循環(huán)中 B 細(xì)胞無交叉反應(yīng)的抗實體瘤鼠源抗體即使用量以 g 計算快速靜脈給藥也無任何毒副作用。在有效率最高的亞組患者中包括以前行干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)的患者 ,有效率為73 %(18P23) 。每周給藥 1 次共 4 周的方法在低度惡性 B 細(xì)胞淋巴瘤 (按工作分類為 A～ D) 有效率為 47 % 。 Rituxan) 是第一個獲準(zhǔn)用于治療人類腫瘤的單抗產(chǎn)品 ,于 1997 年 11 月獲 FDA 批準(zhǔn) ,現(xiàn)有資料提示 ,該藥對大多數(shù) B 細(xì)胞淋巴瘤都有活性。 不同類 Ig 的重鏈 CH 長度不一， IgG、 IgA、 IgD 有 。 每條重鏈和輕鏈分為氨基端和羧基端。血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)在血管生成中有重要作用。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在某些腫瘤有較高的表達。單抗與藥物 的偶聯(lián)物通常仍保留原來單抗的分布特征，在靶腫瘤的濃度較高。這種特異性結(jié)合和內(nèi)化進一步闡明了單抗或單抗偶聯(lián)物對靶細(xì)胞選擇性殺傷作用的機制。而且這些藥物價格昂貴，目前國內(nèi) 的消費水平還不足以使這些藥物大面積鋪開。中國每 4~5 個死亡者就有 1個死于癌癥。③ DNA 免疫是否還誘導(dǎo) 動物產(chǎn)生特異性免疫耐受還有待于深入的探討。通過這兩種免疫方法制備的單克隆抗體均能被 DNA 編碼的蛋白識別。②機體對抗原的遞呈及相應(yīng)的 反應(yīng)性。 3． 核糖體展示技術(shù) 核糖體展示技術(shù)是一種完全在體外合成并篩選蛋白質(zhì)的無細(xì)胞轉(zhuǎn)化技術(shù)。 制備方法 抗體的具體制備方法是將抗原包被在固 定 介質(zhì)上 ,加入待篩 選的噬菌體顆粒與固定的抗原結(jié)合 ,獲取結(jié)合的抗體 ,將未結(jié)合的抗體洗脫 ,從噬菌體庫中篩選出針對特定抗原的特異性抗體的可變區(qū)。 技術(shù)原理 抗體上， 并不是整個 CDR 都參與抗原的特異性識別，在 CDR 區(qū)中僅一部分氨基酸殘基與抗原結(jié)合，這些氨基酸殘基決定抗體的特異性，被稱之 SDR。中國行業(yè)研究網(wǎng)發(fā)布的《 20202020 年中國單克隆抗體行業(yè)投資分析及深度研究咨詢報告》顯示：未來，全球單克隆抗體藥依舊會保持較高的增長率。 因此 ,在保持對特異抗原表位的高親和力的基礎(chǔ)上人源化和全人化的改造 ,減少異源抗體的免疫原性成為單抗研究的重點。 專業(yè) 課程論文 題 目 : 單克隆抗體綜述及其行業(yè)發(fā)展動態(tài)分析 姓 名 : 徐夢佳 學(xué) 院 : 食品科技學(xué)院 專 業(yè) : 生物工程 班 級 : 102 班 學(xué) 號 : 18410221 指 導(dǎo)教師 : 王曉晴 2020 年 3 月 20 日 單克隆抗體綜述及其行業(yè)發(fā)展動態(tài)分析 摘要：單克隆抗體技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要工具，它 可用于分析抗原的細(xì)微結(jié)構(gòu)及檢驗抗原抗體未知的結(jié)構(gòu)關(guān)系 。此外 ,傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)還存在制備周期較長 ,成本較高 ,雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定抗性會丟失等缺陷。到 2020 年，全球單克隆抗體藥銷售額有望達 980 億美元左右 。 SDR 移植抗體僅將 異源抗體 CDR 區(qū)內(nèi)與抗原結(jié)合關(guān)系密切的 SDR，移植到人抗體相應(yīng)位置上，使人源化抗體的免疫原性進一步降低。用表達有相應(yīng)抗體分子的噬菌體顆粒去感染宿主菌 ,使該噬菌體顆粒得到擴增。 技術(shù)原理 該技術(shù)建立不受細(xì)胞轉(zhuǎn)染和表達等因素影響的完全體外展示系統(tǒng) ， 利用聚合酶鏈反應(yīng)擴增含目的基因的 cDNA 文庫，同時引入啟動子、核糖體結(jié)合位點及莖環(huán)結(jié)構(gòu)，在轉(zhuǎn)錄 /翻譯耦聯(lián)系統(tǒng)作用下，形成 “ 蛋白質(zhì) 核糖體 mRNA” 三元復(fù)合物，構(gòu)成核糖體展示的抗體庫，再用相應(yīng)的抗原對翻譯混合物進行篩選并從中分離 mRNA，通過反轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈反應(yīng)富集目的基因，并將目的基因?qū)氡磉_載體，從而獲得庫容量大、特異性強、親和力高的人源基因工程抗體庫。在抗原的免疫原性無法改變的情況下，可提高機體對相應(yīng)抗原的反應(yīng)性。還有人發(fā)現(xiàn)肌肉注射 DNA 的特異性蛋白質(zhì)表達效率明顯高于靜脈注射 DNA，經(jīng)皮內(nèi)注射和肌肉注射等量 DNA，發(fā)現(xiàn)肌肉免疫的方法產(chǎn)生特異性抗體和 CTL的效率高，因而肌肉注射方法最佳。 技術(shù)應(yīng)用前景 隨著 DNA 免疫技術(shù)的發(fā)展，能免疫除多糖類抗原外所有已知 DNA編碼的蛋白質(zhì)抗原，如病毒蛋白、免疫球蛋白、腫瘤抗原等閉。癌癥每年給中國造成的經(jīng)濟損 失逾千億元。但正因為價格高，所以可在短時間內(nèi)使用藥額大幅提高。 單抗藥物具有更高的療效 由抗人體腫瘤的單抗與藥物構(gòu)成的偶聯(lián)物對移植于裸鼠的相應(yīng)人體腫瘤生長有抑制作用。確定單抗或單抗偶聯(lián)物在體內(nèi)具有靶向性，為進一步闡明其療效提供了依據(jù)。抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單抗構(gòu)成的免疫毒素對腦瘤細(xì)胞有高度細(xì)胞毒性；高度惡性的腫瘤對免疫毒素的敏感性更高。據(jù)報道，抗 VEGF 的中和性單抗具有廣譜的抗腫瘤作用，對移植于裸鼠的人體癌瘤有顯著療效。 Ig 根據(jù)其重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子 結(jié)構(gòu)和抗原特異性的不同，分為五類： 類別與重鏈對應(yīng)關(guān)系如下 分類： IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE， 重鏈： γ、 α、 μ、 δ、 ε ：κ、λ型 根據(jù)氨基酸排列順序的不同分為可變區(qū)（ V）和恒定區(qū)（ C）。 IgM、 IgE 分 功能區(qū)的作用： ① VH 和 VL 是結(jié)合抗原的部位； ② CH 和 CL上具有部分同種異型的遺傳志； ③ IgG 的 CH2和 IgM 的 CH3 具有補體 C1q結(jié)合位點，可啟動補體活化經(jīng)典途徑； ④ IgG 可通過胎盤； ⑤ IgG 的 CH3可結(jié)合細(xì)胞表面的 FcR； IgE 的 CH2 和 CH3可與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的 IgE Fc 受體結(jié)合。 美羅華是利用重組 DNA 技術(shù)將鼠源免疫球蛋白 ( Ig) 的可變區(qū)與人免疫球蛋白 G1 恒定區(qū)結(jié)合的鼠 P 人嵌合抗體 ,可在中華倉鼠卵巢細(xì)胞中大量產(chǎn)生。在一項 166 例化療后進展的低度惡性淋巴瘤患者進行的試驗中 ,美羅華治療濾泡型淋巴瘤有效率 約 60 %。對如此高有效率可能的解釋是 :這些患者治療開始時腫瘤負(fù)荷小 ,因為對這些移植后患者觀察密切 ,一旦復(fù)發(fā)即得到治療 ,且事實上所有患者均為濾泡型淋巴瘤。另一方面 ,快速輸入與循環(huán)中 B 細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的大劑量單抗可導(dǎo)致嚴(yán)重反應(yīng) ,包括嚴(yán)重低氧血癥、重度低血壓及死亡。有時效果比初治時更好更持久 ,這可能與患者在復(fù)治時腫瘤負(fù)荷更小有關(guān)。 抗體劑量與有效率的關(guān)系 在一項低度惡性淋巴瘤試驗中 , 患者接受 8 周治療 , 有效率大約 60 % ,但尚不清楚是否效果更持久。 m 2 ,每周 1 次共 8 周 ,另一組在第 1 周給予標(biāo)準(zhǔn)劑量后 ,第 2～ 8 周給予 500mg最近的報道證實了第一種情況 ,即在血淋巴細(xì)胞計數(shù)高的患者中發(fā)生了 3～ 4 度毒性。 CHOP 和 CHOP 加美羅華的臨床隨機對比試驗正在進行。 Her22Pneu 是一個 185kd 的跨膜受體 ,結(jié)構(gòu)與表皮生長因子(EGF) 受體高度同源。隨著劑量的提高 ,平均半衰期延長并且清除減少 ,10 和 500mg 劑量水平的半衰期分別為 1. 7d 和 12d。 m 2 ,d1 ,d29 和 d57 。 222 例化療失敗患者參加的是開放性非隨機試驗 ,其中 66 %以前接受過輔助化療 ,68 %因轉(zhuǎn)移至少接受過 2 種化療方案 ,25 %大劑量化療加自體造血干細(xì)胞解救后復(fù)發(fā)。 469 例以前未接受過化療的患者隨機分入化療組或不加 Herceptin 組 ,動物研究提示 ,在抗體存在的情況下 ,可增加化療藥的細(xì)胞毒作用。與單用化療相比 ,化療加 Her2ceptin 治療的患者有效率更高 ,且緩解期更長 ,提示在治療乳腺癌時最好是與化療聯(lián)合應(yīng)用而不是單用。毒性在第 1 次輸注單抗后最明顯 ,在以后的治療中只要保持同樣血清