【正文】 氨基酸的殘基進行重塑或替換，該技術(shù)僅改造或替換與人抗體有明顯差異的表面氨基酸的殘基。 制備方法 抗體的具體制備方法是將抗原包被在固 定 介質(zhì)上 ,加入待篩 選的噬菌體顆粒與固定的抗原結(jié)合 ,獲取結(jié)合的抗體 ,將未結(jié)合的抗體洗脫 ,從噬菌體庫中篩選出針對特定抗原的特異性抗體的可變區(qū)。當(dāng)抗體分離出來時 ,噬菌體系統(tǒng)同時也提供了設(shè)計抗體親和性及其應(yīng)用的模式。 3． 核糖體展示技術(shù) 核糖體展示技術(shù)是一種完全在體外合成并篩選蛋白質(zhì)的無細胞轉(zhuǎn)化技術(shù)。核糖體展示技術(shù)已經(jīng)成功地用于生產(chǎn)抗黃體酮的抗體片段。②機體對抗原的遞呈及相應(yīng)的 反應(yīng)性。由皮膚和肌肉途徑給予 DNA 均可產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答。通過這兩種免疫方法制備的單克隆抗體均能被 DNA 編碼的蛋白識別。 DNA免疫可用于已知 DNA 編碼而又不能得到目的蛋白或獲得的抗原蛋白為低免疫原性抗原的免疫，也可用于大動物免疫如兔、豬等。③ DNA 免疫是否還誘導(dǎo) 動物產(chǎn)生特異性免疫耐受還有待于深入的探討。 二． 中國單克隆抗體藥物市場應(yīng)用狀況態(tài)勢分析 、腫瘤上的研究和發(fā)展 中國癌癥、腫瘤發(fā)病及死亡率概況 分泌營養(yǎng)和代謝疾病 、 消化系病 、 泌尿生殖系病 、 神經(jīng)系病 、 精神障礙 ， 前十位死因合計占死亡總數(shù)的 ％。中國每 4~5 個死亡者就有 1個死于癌癥。份額增長較快的類別有小分子激酶抑制劑（特別是 2020 年，份額擴大了 倍；單抗類也有將近 100%的增長；雖然這兩類絕對份額還不高，但發(fā)展迅速；鉑類抗癌藥由于有奧沙利鉑的加入， 5年來的份額也是逐漸擴大；而抗代謝類抗癌藥近兩年由于他濱類藥物的 上市和普及，市場份額也有提高；抗生素類抗癌藥和細胞毒類藥物由于無新產(chǎn)品上市，份額逐漸被其他新藥所搶占。而且這些藥物價格昂貴，目前國內(nèi) 的消費水平還不足以使這些藥物大面積鋪開。研究還表明，單抗藥物偶聯(lián)物對腫瘤細胞的殺傷活性比無關(guān)抗體偶聯(lián)物的活 性強；藥物與單抗偶聯(lián)后對腫瘤靶細胞的活性比游離藥物強。這種特異性結(jié)合和內(nèi)化進一步闡明了單抗或單抗偶聯(lián)物對靶細胞選擇性殺傷作用的機制。使用的腫瘤模型包括肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病等。單抗與藥物 的偶聯(lián)物通常仍保留原來單抗的分布特征，在靶腫瘤的濃度較高。 Herceptin 是抗 HER2/neu 癌基因編碼蛋白的單抗，臨床研究對乳腺癌有效，與化療藥物聯(lián)合有更顯著的療效，亦已獲批準(zhǔn)用于治療腫瘤。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在某些腫瘤有較高的表達。 CD30 受體在霍奇金淋巴瘤的腫 瘤細胞高度表達，可以作為免疫毒素攻擊的靶點。血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)在血管生成中有重要作用。對于具有多藥抗性 (MDR)的腫瘤細胞，抗 p170 糖蛋白單抗構(gòu)成的免疫毒素可顯示選擇性殺傷作用。 每條重鏈和輕鏈分為氨基端和羧基端。 三個高變區(qū)共同組成 Ig 的抗原結(jié)合部位，該部位也稱為互補性決定區(qū) （ 2）恒定 區(qū) 重鏈和輕鏈的 C區(qū)分別稱為 CH和 CL，不同類 Ig的重鏈 CH長度不一，同一種屬動物中，同一類別 Ig分子（如 IgG） C 區(qū)氨基酸的組成和排列順序比較恒定。 不同類 Ig 的重鏈 CH 長度不一， IgG、 IgA、 IgD 有 。連接 Ig 單體使其成為多聚體 分泌片： 由黏膜上皮細胞合成和分泌，以非共價形式結(jié)合到二聚體上，并一起被分泌到黏膜表面。 Rituxan) 是第一個獲準(zhǔn)用于治療人類腫瘤的單抗產(chǎn)品 ,于 1997 年 11 月獲 FDA 批準(zhǔn) ,現(xiàn)有資料提示 ,該藥對大多數(shù) B 細胞淋巴瘤都有活性。另有證據(jù)表明 ,CD20 是一個很重要的阻止凋亡發(fā)生的鈣離子通道受體 。每周給藥 1 次共 4 周的方法在低度惡性 B 細胞淋巴瘤 (按工作分類為 A～ D) 有效率為 47 % 。一些患者腫瘤退縮緩慢 ,延遲至數(shù)月后才出現(xiàn)腫瘤縮小。在有效率最高的亞組患者中包括以前行干細胞移植后復(fù)發(fā)的患者 ,有效率為73 %(18P23) 。這些癥狀僅為輕至中度 ,多數(shù)發(fā)生在第 1 次治療時。一些與循環(huán)中 B 細胞無交叉反應(yīng)的抗實體瘤鼠源抗體即使用量以 g 計算快速靜脈給藥也無任何毒副作用。μ L 1 的患者 (即這組患者可能會出現(xiàn)強烈的反應(yīng) ) 及上述有嚴(yán)重內(nèi)科情況的患者可用美羅華治療 ,但建議第 1 次治療開始時輸注速度應(yīng)減慢甚至少于 50mg毒性與初治時相似 ,包括已知的在首次給藥時與循環(huán)中 B 細胞發(fā)生反 應(yīng)引起的相關(guān)毒性。這不但可解釋為什么淋巴瘤患者對初次化療無效 ,而且還提示對美羅華的有效率也相對較低。研究資料提示 ,任何單個病灶的大小并不象腫瘤負荷和 CD20 的表達水平那樣重要。美羅華給藥的準(zhǔn)確時間并不重要 ,化療同時維持血循環(huán)和組織中抗體濃度可能更重要。一組接受 375mg在這些患者中聯(lián)合應(yīng)用 CHOP 和美羅華 ,結(jié)果與低度惡性淋巴瘤患者一樣 ,毒性無增加。一是由于循環(huán)中淋巴細胞計數(shù)過高而導(dǎo)致可能的毒性 ,另外大多數(shù) CLL 細胞 CD20 表達水平過低而可能基本無毒性反應(yīng) ,也無顯著的抗腫瘤效果。治療淋巴細胞計數(shù)高的CLL 患者的美羅華用量可能因經(jīng)濟原因而難于實現(xiàn)。一項 7 例患者的報道中 ,有 4 例客觀腫瘤緩解 ,未發(fā)現(xiàn)更多的毒性反應(yīng)。由于美羅華對復(fù)發(fā)患者有效 ,用該藥進展緩慢型淋巴瘤首次治療效果的評價正在進行中。該藥可能對高度表達 Her22Pneu 受體的其他腫瘤也有活性。通過重組 DNA 技術(shù)在中華倉鼠卵巢細胞中產(chǎn)生。 Herceptin 的藥代動力學(xué)研究表明 , 每一次短時間靜脈注射10 ,50 ,100 ,250 ,500mg 均顯示出劑量依賴性。 在 46 例過度表達 Her22Pneu 的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 ,采用每周 1 次注射給藥。 順鉑為 75mg FDA 批準(zhǔn)的基礎(chǔ)資料包括 222 例以前化療后進展的轉(zhuǎn)移性乳腺癌和 469 例未治療過的轉(zhuǎn)移性乳腺癌 ,所有患者 Her22 表達為 2 + 或 3 + 。如果沒有發(fā)生輸液相關(guān)毒性反應(yīng) ,第 1 次輸注時間為 90min ,以后治療輸注 30min。 Vogel 等報道 ,Herceptin 單藥一線治療 112 例 Her22Pneu 高表達的晚期乳腺癌患者 ,給藥方法有 2 種 ,一種采用 I 期推薦的給藥方法 ,另一種負荷量每周8mg中位緩解期 8 個月 ,中位生存期 13 個月 ,其中Her22Pneu (3 + ) 者有效率達 31 %。 m 2 ) 靜脈注射每 3 周 1 次 ,共 6 周期。因此 ,適于臨床試驗的所有轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 17 % 25 %= 4 %可能有望在化療后疾病進展時對Herceptin 有效。 EGF 受體家族表達于許多循環(huán)細胞 ,如激活的淋巴細胞。因此 ,除非在輸注開始后很快測量 ,否則是測量不到的。這可能與化療藥尤其是 ADM 與單抗之間協(xié)同效應(yīng)有關(guān) ,而且可能與 ADM 輸送到心肌的量增加有關(guān) ,因為 ADM 與單抗之間有疏松連接。 Her22Pneu 在許多腫瘤中均有過度表達 ,包括前列腺癌和卵巢 [ 21～ 23 ] 。該物質(zhì)不進入血循環(huán) ,其功能還不太清楚 ,但被認為與細胞粘附有關(guān)。人抗鼠抗體 (Ab2) 中的一些與 1721 鼠抗體 (Ab1) 的基因型起反應(yīng)。 對 1721A 在 80 年代初期廣泛進行了臨床試驗。 于 1990～ 1992 年間在德國進行的一項多中心隨機性輔助治療結(jié)果發(fā)表以后 ,1721A 的抗癌前景發(fā)生了改變。中位隨訪 5 年 ,在無病生存和總生存方面有統(tǒng)計學(xué)顯著差異。 1721A 在德國于 1994 年被批準(zhǔn)用于治療 Duke’ sC 期結(jié)直腸癌。目前還正在研究 1721A 聯(lián)合化療和放療治療 Duke’ s B 和 C 期直腸癌。 三．行業(yè)發(fā)展及上市公司 1． 治療性抗體發(fā)展歷程和事件 1975 年，單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)宣告誕生； 1981 年，應(yīng)用抗體治療淋巴瘤取得成功； 1986 年，美國 FDA 批準(zhǔn)全球第一個治療性鼠源性單克隆抗體 OKT3 上市，由此拉開了單抗藥物治療疾病的序幕； 1988 年，單克隆 抗體用于腫瘤治療效果不佳； 1993 年，內(nèi)毒素單克隆抗體適用于治療敗血癥性休克失??； 1997 年，賽尼哌（ Zenapax）作為第一個人源化單抗于投放市場； 1998 年，單克隆抗體進入大量審批上市階段； 1999 年，我國最早上市的單抗是武漢生物制品研究所生產(chǎn)的 T淋巴細胞 CD3 抗原單抗； 2020 年，修美樂（ Humira）作為全球第一個全人源化抗體于上市； 2020 年，國內(nèi)單抗藥物領(lǐng)軍企業(yè)中信國健研發(fā)的重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體抗體融合蛋白（益賽普）上市； 截止到 2020 年 5月， FDA 批準(zhǔn)上市了 45 個單抗治療性 藥物。 專 家看好單抗藥物 石明博士 上海申銀萬國證券研究所醫(yī)藥行業(yè)分析師 未來幾年國內(nèi)單抗藥有望實現(xiàn)爆發(fā)式增長，增長率預(yù)計超過 50%， 10 年后，國內(nèi)市場規(guī)模有望達到目前國際水平。單克隆抗體平均９億美元的研發(fā)費，研發(fā)周期長達 810 年，但一旦上市能為廠家?guī)碡S厚回報。所以現(xiàn)在全世界都想進入這個領(lǐng)域，甚至連做半導(dǎo)體的韓國三星集團也已經(jīng)開始做抗體藥物。中國已擁有上海、北京、西安三個研發(fā)中心，但與美國相比還有一定的距離。中投顧問發(fā)布的《 20202020 年中國生物制藥行業(yè)投資分析及前景預(yù)測報告》顯示，長期以來單克隆抗體 技術(shù)都被發(fā)達國家所壟斷，目前歐美發(fā)達國家的單克隆抗體藥物市場銷售額已經(jīng)高達幾百億美元。 ：基因泰克領(lǐng)跑全球，蘭生國健在國內(nèi)一枝獨秀 基因泰克作為羅氏子公司是單抗產(chǎn)品的領(lǐng)軍企業(yè)，擁有最多的 7 個上市產(chǎn)品，包括 阿瓦斯汀 、赫塞汀和美羅華等重磅炸彈產(chǎn)品，其主要單抗產(chǎn)品銷售額在2020 年已經(jīng)突破 200 億美金。新產(chǎn)品健尼哌 (重組抗 CD25 人源化單克隆抗體注射液 )也與近期獲得了國家藥監(jiān)局的批準(zhǔn)，用于器官移植免疫抑制領(lǐng)域。在政策支持、研發(fā)產(chǎn)業(yè)化、資本助力三大因素合力下，我國抗體藥物企業(yè)將乘風(fēng)破浪。中信國健依托豐富產(chǎn)品線，是國內(nèi)抗體藥物領(lǐng)域領(lǐng)軍者；百泰生物引進古巴先進技術(shù)，打造了我國首個人源化單抗 “泰欣生 ”。 無錫單克隆抗體有限責(zé)任公司是由美國傲銳基因科技有限公司與無錫 (馬山 )生物醫(yī)藥研發(fā)服務(wù)外包區(qū)共同籌建的 ,將致力于研發(fā)和生產(chǎn)所有人類蛋白單克隆抗體 ,診斷用抗體、治療性抗體的研發(fā)生產(chǎn)以及服務(wù)外包。實現(xiàn)人類 2 萬多基因單克隆抗體的 全生產(chǎn) ,對診斷防治心血管病和腫瘤等疾 病具有里程碑意義。同時 ,利用 3 年左右的時間 ,完成人類所有單克隆抗體的制備計劃及單克隆抗體的二次開發(fā) ,得到具有診斷抗體和治療抗體 ,用于臨床研究。據(jù)統(tǒng)計，我國抗體藥物開發(fā)的 60%資金投入都在下游純化工藝的建立，藥物制造成本可達到售價的 2025%，因此，純化工藝完善是所有生物制藥企業(yè)不可忽視的一個環(huán) 節(jié)；（三）抗體藥物質(zhì)量分析，質(zhì)量設(shè)計這一理念重要性凸顯?？贵w工程技術(shù)隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展而不斷完善，并且是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的主力軍，尤其在生物技術(shù)制藥領(lǐng)域占有重要地位。進入臨床研究的共有 123 件，其中 23 件已進入 Ⅲ 期臨床或新藥申報階段。由于許多生物技術(shù)公司長期處于臨床研究延遲的實驗室研究階段，面對突然間取得的成功估計不足，造成了生產(chǎn)能力的不足。解決這個難題最有效的辦法是與其他合同加工企業(yè)或制藥公司建立長期的戰(zhàn)略合作伙伴關(guān)系，這種方式對小型的生物技術(shù)公司很有效。 單克隆抗體迄今為止主要用于診斷試劑以及治療藥。 早在 20 世紀(jì)八十年代初，我國科學(xué)家就利用雜交瘤技術(shù)成功開展了單克隆抗體的研制工作，截止目前已經(jīng)獲得了一大批針對各種抗原的鼠源性單克隆抗體。 (4)其它抗原，如細胞因子、酶、血漿原蛋白、免疫球蛋白、補體、激素等。如抗 T 細胞免疫毒素經(jīng) SFDA 批準(zhǔn)后用于異基因骨髓移植時清除供體骨髓中成熟 T 細胞，以預(yù)防移植物抗宿主病(GVHD)； 99mTc 標(biāo)記人小細胞肺癌單抗 2F7 的 F(ab’)2 片段放射免疫診斷試劑盒已經(jīng)過國家 SFDA 批準(zhǔn)進入臨床研究。隨著基因操作技術(shù)的發(fā)展和普及，許多實驗室成功地獲得針對各種抗原，如 VEGF、 CEA、 TNFa 等的人鼠嵌合抗體和各種單鏈抗體。 隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，在我國有些實驗室開始了噬菌體抗體庫的構(gòu)建。一些特異性好，有 應(yīng)用前景的鼠抗體，利用抗原表位定向選擇（ epitope guided selection, EGS）方法，以鼠單抗可變區(qū)為模板，經(jīng)噬菌體展示技術(shù)，通過抗原導(dǎo)向，篩選能夠模擬鼠單抗可變區(qū)，結(jié)合相同抗原決定簇的人抗體，經(jīng)這一方法獲得人源抗體。分別是：鼠源性抗人 T淋巴細胞 CD3單抗 —— 莫羅莫那 CD3 (MuromonabCD3)，是最早從國外引進的單抗，用于抑制排斥反應(yīng)。分別是：武漢生物制品研究所抗腎移植單抗 OKT3（注射用鼠源性抗人 T淋巴細胞 CD3 抗原單克隆抗體），也是最早批準(zhǔn)上市的國內(nèi)自行研制的抗體，具有免疫抑制作用，可逆轉(zhuǎn)對移植器官的排斥反應(yīng)；東莞宏遠逸士生物技術(shù)藥業(yè)有限公司的抗人 IL8 單克隆抗體乳膏，用于牛皮癬的治療；上海美恩生物技術(shù)有限公司開發(fā)的碘［ 131I］人鼠嵌合型腫瘤細胞核單克隆抗體注射液（ 131IchTNT），用于多種實體瘤，該藥物為國家 Ⅰ 類新藥，它的批準(zhǔn)上市標(biāo)志著我國抗體藥物的研究已經(jīng)進入全新發(fā)展階