【正文】 生物、醫(yī)學、食品、環(huán)保和能源領域具有廣闊的發(fā)展前景?？共?、抗蟲轉基因作物的廣泛種植，可以減少農藥的使用量。植物轉基因技術的應用十分廣泛：（1）植物品質改良、新品種的培育，以滿足人類不斷增長的物質生活需要：植物轉基因技術可高效、快速提高糧食作物、蔬菜、林木樹種和花卉草種的產量、品質和抗耐性，為培育高產、高抗、多抗、優(yōu)質的新品種提供了科學的手段。目前，轉基因技術已經成熟，轉基因作物已進入產業(yè)化階段，而且種植面積逐年擴大，呈直線上升趨勢。答：利用同源序列法快速克隆基因的基本思路是依據基因序列的高度保守區(qū)域，設計特異性的簡并引物，通過PCR擴增基因組DNA或cDNA，獲得所要分離的基因序列，多用于抗病基因的分離、克隆。⑤堿基的隨機分布：引物中四種堿基的分布最好是隨機的，不存在聚嘌呤和聚嘧啶，尤其在引物的3’端不應超過3個連續(xù)的G或C。②長度：一般來說，寡核苷酸引物長度為1525bp。③ 水浴后取出離心管冷卻至室溫，加入等體積的氯仿：異戊醇(24﹕1)混合液，輕輕上下顛倒混勻，室溫下靜置15min后，于10000 r/min離心3min，取上清液。答：CTAB是一種陽離子去污劑，具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。答：SSR即微衛(wèi)星DNA又叫簡單重復序列，指的是基因組中由1～6個核苷酸組成的基本單位重復多次構成的一段DNA。④逆轉錄酶：依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉錄RNA成為DNA的酶，產物DNA又稱互補DNA。有色物質可以使整個培養(yǎng)菌落產生顏色變化，可用于菌落鑒定和篩選。4．AFLP：擴增片段長度多態(tài)性。第二篇：園藝植物生物技術園藝專業(yè)推廣碩士《園藝植物生物技術》試題一．名詞解釋1．基因組：某一生物包括編碼序列和非編碼序列在內的全部DNA分子。然而,它的發(fā)展總會伴隨著各種利弊問題。第三，轉基因產品的毒性，能引起人的過敏反應。2010年4月16日，俄羅斯科學家公布了新的獨立研究成果，進一步證明倉鼠食用轉基因大豆三代就會絕種！同時轉基因技術的發(fā)展打破了自然發(fā)展的規(guī)律，或多或少破壞了生物界領域的和諧。2007年10月和11月，美國《紐約時報》等媒體報道，經過長期周密跟蹤觀察，發(fā)現有兩種轉基因玉米種植導致傷害蝴蝶生存，對生態(tài)環(huán)境安全的威脅程度已經超出可接受水平。2005年的11月16日，澳大利亞聯邦科學與工業(yè)研究組織（CSIRO）發(fā)表的一篇研究報告顯示，一項持續(xù)4個星期的實驗表明，被喂食了轉基因豌豆的小白鼠的肺部產生了炎癥，小白鼠發(fā)生過敏反應，并對其他過敏源更加敏感，并據此叫停了歷時10年、耗資300萬美元的轉基因項目。轉基因技術給人類帶來福音的同時也帶來了危害。第三，增強抗逆性。第二，改良品質。從利的方面來說轉基因技術對人類有百利而無一害。所以我們可以說現在轉基因技術是對傳統(tǒng)轉基因技術的發(fā)展和補充，我們將兩者緊密結合，可以大大地提高動植物品種改良的效率。但是在過去的幾千年內我們的祖先對農作物遺傳基因的改良就一直不斷的突破著和改良著，那時轉基因的方式主要是對農作物在自然條件下突變產生的優(yōu)良基因和重組體的農作物的選擇和利用，通過人為的和自然的方式來積累優(yōu)良遺傳基因。人們常說的“遺傳工程”、“基因工程”、“遺傳轉化”均為轉基因的同義詞。轉基因技術的理論基礎來源于分子生物學?；蚱蔚膩碓纯梢允翘崛√囟ㄉ矬w基因組中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段。20世紀80年代末轉基因植物在美國問世至今，該項技術正以日新月異的速度迅猛發(fā)展，逐漸走入了人們的生活。因此我們可以說現在的轉基因技術與過去的傳統(tǒng)技術相比，他們的本質都是通過獲得優(yōu)良基因人為的或者自然的進行基因的遺傳改良。轉基因技術的發(fā)展，為人們帶來了新的福音，但新的問題也隨之涌現，對于轉基因技術走進生活這一事件，質疑聲不絕于耳。自1983年世界第一例轉基因植物——煙草問世以來僅20多年的時間里，轉基因植物的研究和應用就已經得到了迅猛的發(fā)展，已有近1000例轉基因植物被批準進入田間試驗，涉及的植物物種有50余個，已有48個轉基因植物品種被批準進行商業(yè)化生產。植入不同的基因片段，可使食品的外觀、味道、口感甚至營養(yǎng)成分完全改變，將使人類的食物進入一個隨心所欲的新時期。通過基因改變，使傳統(tǒng)作物具備了抵御病蟲害的能力，因此可大大減少農藥和殺蟲劑的使用，防止環(huán)境污染；通過改良基因，人類能讓作物具有耐寒、耐熱、耐干旱或耐澇的不同特性，從而適應不同的生長環(huán)境，農作物將徹底告別靠天種植的歷史。如：1999年，美國康奈爾大學的研究者約翰?洛希在英國《自然》雜志上發(fā)表報告，用涂有轉Bt基因玉米花粉的葉片喂養(yǎng)斑蝶，導致44%的幼蟲死亡。2006年，俄羅斯科學院高級神經活動和神經生理研究所科學家伊琳娜?艾爾馬科娃博士研究發(fā)現，食用轉基因大豆食物的老鼠，其幼鼠一半以上在出生后頭三個星期死亡，是食用非轉基因大豆老鼠死亡率的6倍。為此，歐盟已經做出了初步決定、禁止該轉基因玉米的種子銷售使用。轉基因技術對生態(tài)系統(tǒng)和人類健康存在危害：第一，基因飄逸即基因流或基因水平轉移到其他近緣物種。1995 年發(fā)現美國國際先鋒公司轉巴西堅如果基因的大豆能引起人過敏，在轉花生基因的作物中也有過過敏現象。我們必須以一種謹慎的態(tài)度來看待轉基因技術，轉基因技術的應用對人類發(fā)展而言前景是廣闊 的，影響也是深遠的。2．RTPCR：一是反轉錄PCR的縮寫，即通過聚合酶鏈式反應，將RNA鏈逆轉錄成互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。是基于PCR技術擴增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性內切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點序列，作為引物結合位點。二．選擇題 三．簡答題。答：基因工程中常用的工具酶有：①限制性核酸內切酶：是細菌產生的一類能識別和切割雙鏈DNA分子內特定的堿基順序的核酸水解酶。⑤末端脫氧核糖核酸轉移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。微衛(wèi)星的突變率在不同物種、同一物種的不同位點和同一位點的不同等位基因間存在很大差異，但其兩端序列多是保守的單拷貝序列，因而可以根據這兩端的序列設計一對特意引物，通過PCR技術將其間的核心微衛(wèi)星DNA序列擴增出來，利用電泳分析技術就可獲得其長度多態(tài)性。在高離子強度的溶液中，CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，但不能沉淀核酸，通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。④ 將上清液移至新的離心管，顛倒混勻后放置15min，10000 r/min離心5min，棄上清液。③Tm值：引物的Tm值一般控制在5565℃，盡可能保證上下游引物的Tm值一致。⑥引物末端：只有引物的3’端與模板結合，PCR才能進行，所以3’端最好是G或C。主要過程為：①提取基因組DNA；②根據已知基因保守區(qū)域的核酸序列特征，運用軟件設計引物并合成；③以基因組DNA為模板進行PCR擴增；④回收PCR擴增的目的片段；⑤將目的片段鏈接載體并轉化大腸桿菌；⑥測序并進行序列分析。植物轉基因技術主要應用于農業(yè)、生物和醫(yī)學等領域，進行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應器生產生物藥物和疫苗等。（2）醫(yī)藥研究，為人類健康服務：轉基因技術可以把植物作為“生物反應器”，進行藥物蛋白、工業(yè)用酶、糖類、脂類等一些有益次生代謝產物的生產，具有成本低、周期短、效益高和安全性好的特點。轉基因植物可對土壤中的有毒污染物進行高效吸收或生物降解，通過植物修復系統(tǒng)使受污染的環(huán)境得到修復。第三篇：《園藝植物生物技術》實驗教案實驗一 現代生物技術實驗室與實驗儀器一、實驗目的實驗室和實驗儀器是開展現代生物技術研究的基礎平臺，對實驗室布局和儀器配置的掌握程度是學生知識結構完整性的重要體現。每班分為兩小組簡要介紹現代生物技術實驗室的布局及功能分區(qū)情況；針對每個分區(qū)的重要儀器進行講述，結束時對所有參觀內容進行簡要總結，并回答同學們的提問。質粒的分離與提取時最常用、最基本的實驗技術。將pH調至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。四、實驗方法與步驟（一）試劑配制:LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過濾滅菌后20℃保存。高壓滅菌15min，貯存于4℃。配制方法：5M KAc300ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。高壓滅菌15min，貯存于4℃。（二）實驗步驟取含有pUC18質粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線37℃過夜培養(yǎng)。加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上23min，使細胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，20℃保存?zhèn)溆?。質粒電泳檢測一般有三條帶，分別為質粒的超螺旋、開環(huán)、線型三種構型。通過本實驗應掌握PCR原理，學習PCR操作過程。三、主要儀器及試材含有外源cDNA片段的質粒或轉基因蘋果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關試劑。五、實驗注意事項引物設計應具有特異性，依靠引物設計軟件進行引物設計；引物分裝成多管，不宜反復凍融多次；PCR反應的各種成分不能遺漏，操作應戴手套，冰上操作；根據引物的Tm值和擴增片段長度以及PCR儀的特性來設定PCR循環(huán)條件；注意分析電泳檢測PCR產物時出現拖帶或非特異性擴增帶、無DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態(tài)性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態(tài)性。：能在宿主細胞中能自我自制并能穩(wěn)定保存，要有多個酶切位點，每種酶切位點最好只有一個，酶切后不損壞其自制能力及選擇標記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。、＿、＿等。，主要有＿、＿、＿。，根據外源基因失活或沉默的分子機制，可將其分為三類：＿、＿、＿等。，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍、蕃茄、柑橘等植物的原生質體再生植株中觀察到變異，再生植株產生的變異主要有＿、＿、＿、＿。_______標記和_______標記等四種不同水平的標記。，現欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實驗室，請簡述實驗室的布局及主要的儀器設備，滅菌時間。、通過對生物技術的學習，談談生物技術在園藝科學中的應用與展望。 hybridization二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。，常采用酶解的方法脫除細胞壁。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。：大腸桿菌介導的轉化，PEG介導基因轉化、電擊法介導的轉化、基因槍法介導基因轉化及花粉管通道法介導基因轉化等。三、填空題：將下列各題空缺部分的答案填在后面的方框內，兩者用“，”隔開。、＿、＿等四種。，在園藝植物病毒病的防治中常用的策略主要有＿、＿、＿、＿。，又稱為＿、＿、＿、＿等。四、選擇題：從備選答案中選出正確的結果，正確答案是唯一的。六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內。一、將下面詞組相對應的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。：能在宿主細胞中能自我自制并能穩(wěn)定保存，要有多個酶切位點，每種酶切位點最好只有一個，酶切后不損壞其自制能力及選擇標記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。：大腸桿菌介導的轉化，PEG介導基因轉化、電擊法介導的轉化、基因槍法介導基因轉化及花粉管通道法介導基因轉化等。、＿、＿、＿等方法。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。 aquaticus 菌提取的熱穩(wěn)定性酶，、＿、＿等。、＿、＿等四種。Ant D:GFP ：（）A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因：（）Ａ：誘導莖細胞的伸長 Ｂ：對形成層的細胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老：（）A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法五、簡答題：將下列各題的答案填在下面的方框內。？，現欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實驗室，請簡述實驗室的布局及主要的儀器設備六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內。第五篇：《園藝植物生物技術》實驗教案《園藝植物生物技術》實驗教案實驗一 現代生物技術實驗室與實驗儀器一、實驗目的實驗室和實驗儀器是開展現代生物技術研究