【正文】 生物、醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)保和能源領(lǐng)域具有廣闊的發(fā)展前景?？共　⒖瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因作物的廣泛種植，可以減少農(nóng)藥的使用量。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛：（1）植物品質(zhì)改良、新品種的培育，以滿(mǎn)足人類(lèi)不斷增長(zhǎng)的物質(zhì)生活需要：植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)可高效、快速提高糧食作物、蔬菜、林木樹(shù)種和花卉草種的產(chǎn)量、品質(zhì)和抗耐性，為培育高產(chǎn)、高抗、多抗、優(yōu)質(zhì)的新品種提供了科學(xué)的手段。目前，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)成熟，轉(zhuǎn)基因作物已進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化階段，而且種植面積逐年擴(kuò)大，呈直線(xiàn)上升趨勢(shì)。答：利用同源序列法快速克隆基因的基本思路是依據(jù)基因序列的高度保守區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性的簡(jiǎn)并引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增基因組DNA或cDNA，獲得所要分離的基因序列，多用于抗病基因的分離、克隆。⑤堿基的隨機(jī)分布：引物中四種堿基的分布最好是隨機(jī)的，不存在聚嘌呤和聚嘧啶，尤其在引物的3’端不應(yīng)超過(guò)3個(gè)連續(xù)的G或C。②長(zhǎng)度：一般來(lái)說(shuō)，寡核苷酸引物長(zhǎng)度為1525bp。③ 水浴后取出離心管冷卻至室溫，加入等體積的氯仿：異戊醇(24﹕1)混合液，輕輕上下顛倒混勻，室溫下靜置15min后，于10000 r/min離心3min，取上清液。答：CTAB是一種陽(yáng)離子去污劑，具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。答：SSR即微衛(wèi)星DNA又叫簡(jiǎn)單重復(fù)序列，指的是基因組中由1～6個(gè)核苷酸組成的基本單位重復(fù)多次構(gòu)成的一段DNA。④逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴(lài)于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱(chēng)互補(bǔ)DNA。有色物質(zhì)可以使整個(gè)培養(yǎng)菌落產(chǎn)生顏色變化，可用于菌落鑒定和篩選。4．AFLP：擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性。第二篇：園藝植物生物技術(shù)園藝專(zhuān)業(yè)推廣碩士《園藝植物生物技術(shù)》試題一．名詞解釋1．基因組：某一生物包括編碼序列和非編碼序列在內(nèi)的全部DNA分子。然而,它的發(fā)展總會(huì)伴隨著各種利弊問(wèn)題。第三，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的毒性，能引起人的過(guò)敏反應(yīng)。2010年4月16日，俄羅斯科學(xué)家公布了新的獨(dú)立研究成果，進(jìn)一步證明倉(cāng)鼠食用轉(zhuǎn)基因大豆三代就會(huì)絕種！同時(shí)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展打破了自然發(fā)展的規(guī)律，或多或少破壞了生物界領(lǐng)域的和諧。2007年10月和11月，美國(guó)《紐約時(shí)報(bào)》等媒體報(bào)道，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期周密跟蹤觀察，發(fā)現(xiàn)有兩種轉(zhuǎn)基因玉米種植導(dǎo)致傷害蝴蝶生存，對(duì)生態(tài)環(huán)境安全的威脅程度已經(jīng)超出可接受水平。2005年的11月16日，澳大利亞聯(lián)邦科學(xué)與工業(yè)研究組織（CSIRO）發(fā)表的一篇研究報(bào)告顯示，一項(xiàng)持續(xù)4個(gè)星期的實(shí)驗(yàn)表明，被喂食了轉(zhuǎn)基因豌豆的小白鼠的肺部產(chǎn)生了炎癥，小白鼠發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，并對(duì)其他過(guò)敏源更加敏感，并據(jù)此叫停了歷時(shí)10年、耗資300萬(wàn)美元的轉(zhuǎn)基因項(xiàng)目。轉(zhuǎn)基因技術(shù)給人類(lèi)帶來(lái)福音的同時(shí)也帶來(lái)了危害。第三，增強(qiáng)抗逆性。第二，改良品質(zhì)。從利的方面來(lái)說(shuō)轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)人類(lèi)有百利而無(wú)一害。所以我們可以說(shuō)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和補(bǔ)充，我們將兩者緊密結(jié)合，可以大大地提高動(dòng)植物品種改良的效率。但是在過(guò)去的幾千年內(nèi)我們的祖先對(duì)農(nóng)作物遺傳基因的改良就一直不斷的突破著和改良著，那時(shí)轉(zhuǎn)基因的方式主要是對(duì)農(nóng)作物在自然條件下突變產(chǎn)生的優(yōu)良基因和重組體的農(nóng)作物的選擇和利用，通過(guò)人為的和自然的方式來(lái)積累優(yōu)良遺傳基因。人們常說(shuō)的“遺傳工程”、“基因工程”、“遺傳轉(zhuǎn)化”均為轉(zhuǎn)基因的同義詞。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的理論基礎(chǔ)來(lái)源于分子生物學(xué)?；蚱蔚膩?lái)源可以是提取特定生物體基因組中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段。20世紀(jì)80年代末轉(zhuǎn)基因植物在美國(guó)問(wèn)世至今，該項(xiàng)技術(shù)正以日新月異的速度迅猛發(fā)展，逐漸走入了人們的生活。因此我們可以說(shuō)現(xiàn)在的轉(zhuǎn)基因技術(shù)與過(guò)去的傳統(tǒng)技術(shù)相比，他們的本質(zhì)都是通過(guò)獲得優(yōu)良基因人為的或者自然的進(jìn)行基因的遺傳改良。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，為人們帶來(lái)了新的福音，但新的問(wèn)題也隨之涌現(xiàn)，對(duì)于轉(zhuǎn)基因技術(shù)走進(jìn)生活這一事件，質(zhì)疑聲不絕于耳。自1983年世界第一例轉(zhuǎn)基因植物——煙草問(wèn)世以來(lái)僅20多年的時(shí)間里，轉(zhuǎn)基因植物的研究和應(yīng)用就已經(jīng)得到了迅猛的發(fā)展，已有近1000例轉(zhuǎn)基因植物被批準(zhǔn)進(jìn)入田間試驗(yàn)，涉及的植物物種有50余個(gè)，已有48個(gè)轉(zhuǎn)基因植物品種被批準(zhǔn)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。植入不同的基因片段，可使食品的外觀、味道、口感甚至營(yíng)養(yǎng)成分完全改變，將使人類(lèi)的食物進(jìn)入一個(gè)隨心所欲的新時(shí)期。通過(guò)基因改變，使傳統(tǒng)作物具備了抵御病蟲(chóng)害的能力，因此可大大減少農(nóng)藥和殺蟲(chóng)劑的使用，防止環(huán)境污染；通過(guò)改良基因，人類(lèi)能讓作物具有耐寒、耐熱、耐干旱或耐澇的不同特性，從而適應(yīng)不同的生長(zhǎng)環(huán)境，農(nóng)作物將徹底告別靠天種植的歷史。如：1999年，美國(guó)康奈爾大學(xué)的研究者約翰?洛希在英國(guó)《自然》雜志上發(fā)表報(bào)告，用涂有轉(zhuǎn)Bt基因玉米花粉的葉片喂養(yǎng)斑蝶，導(dǎo)致44%的幼蟲(chóng)死亡。2006年，俄羅斯科學(xué)院高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)和神經(jīng)生理研究所科學(xué)家伊琳娜?艾爾馬科娃博士研究發(fā)現(xiàn)，食用轉(zhuǎn)基因大豆食物的老鼠，其幼鼠一半以上在出生后頭三個(gè)星期死亡，是食用非轉(zhuǎn)基因大豆老鼠死亡率的6倍。為此，歐盟已經(jīng)做出了初步?jīng)Q定、禁止該轉(zhuǎn)基因玉米的種子銷(xiāo)售使用。轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類(lèi)健康存在危害：第一，基因飄逸即基因流或基因水平轉(zhuǎn)移到其他近緣物種。1995 年發(fā)現(xiàn)美國(guó)國(guó)際先鋒公司轉(zhuǎn)巴西堅(jiān)如果基因的大豆能引起人過(guò)敏，在轉(zhuǎn)花生基因的作物中也有過(guò)過(guò)敏現(xiàn)象。我們必須以一種謹(jǐn)慎的態(tài)度來(lái)看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用對(duì)人類(lèi)發(fā)展而言前景是廣闊 的，影響也是深遠(yuǎn)的。2．RTPCR：一是反轉(zhuǎn)錄PCR的縮寫(xiě)，即通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，將RNA鏈逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。是基于PCR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性?xún)?nèi)切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點(diǎn)序列，作為引物結(jié)合位點(diǎn)。二．選擇題 三．簡(jiǎn)答題。答：基因工程中常用的工具酶有：①限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)菌產(chǎn)生的一類(lèi)能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。⑤末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。微衛(wèi)星的突變率在不同物種、同一物種的不同位點(diǎn)和同一位點(diǎn)的不同等位基因間存在很大差異，但其兩端序列多是保守的單拷貝序列，因而可以根據(jù)這兩端的序列設(shè)計(jì)一對(duì)特意引物，通過(guò)PCR技術(shù)將其間的核心微衛(wèi)星DNA序列擴(kuò)增出來(lái)，利用電泳分析技術(shù)就可獲得其長(zhǎng)度多態(tài)性。在高離子強(qiáng)度的溶液中，CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，但不能沉淀核酸，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類(lèi)等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。④ 將上清液移至新的離心管，顛倒混勻后放置15min，10000 r/min離心5min，棄上清液。③Tm值：引物的Tm值一般控制在5565℃，盡可能保證上下游引物的Tm值一致。⑥引物末端：只有引物的3’端與模板結(jié)合，PCR才能進(jìn)行，所以3’端最好是G或C。主要過(guò)程為：①提取基因組DNA；②根據(jù)已知基因保守區(qū)域的核酸序列特征，運(yùn)用軟件設(shè)計(jì)引物并合成；③以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；④回收PCR擴(kuò)增的目的片段；⑤將目的片段鏈接載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌；⑥測(cè)序并進(jìn)行序列分析。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、生物和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，進(jìn)行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物藥物和疫苗等。（2）醫(yī)藥研究，為人類(lèi)健康服務(wù)：轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以把植物作為“生物反應(yīng)器”，進(jìn)行藥物蛋白、工業(yè)用酶、糖類(lèi)、脂類(lèi)等一些有益次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)，具有成本低、周期短、效益高和安全性好的特點(diǎn)。轉(zhuǎn)基因植物可對(duì)土壤中的有毒污染物進(jìn)行高效吸收或生物降解，通過(guò)植物修復(fù)系統(tǒng)使受污染的環(huán)境得到修復(fù)。第三篇：《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案實(shí)驗(yàn)一 現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與實(shí)驗(yàn)儀器一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)儀器是開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)平臺(tái)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室布局和儀器配置的掌握程度是學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu)完整性的重要體現(xiàn)。每班分為兩小組簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的布局及功能分區(qū)情況；針對(duì)每個(gè)分區(qū)的重要儀器進(jìn)行講述，結(jié)束時(shí)對(duì)所有參觀內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問(wèn)。質(zhì)粒的分離與提取時(shí)最常用、最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（一）試劑配制:LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過(guò)濾滅菌后20℃保存。高壓滅菌15min，貯存于4℃。配制方法：5M KAc300ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。高壓滅菌15min，貯存于4℃。（二）實(shí)驗(yàn)步驟取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線(xiàn)37℃過(guò)夜培養(yǎng)。加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上23min，使細(xì)胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，20℃保存?zhèn)溆?。質(zhì)粒電泳檢測(cè)一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開(kāi)環(huán)、線(xiàn)型三種構(gòu)型。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR原理，學(xué)習(xí)PCR操作過(guò)程。三、主要儀器及試材含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋(píng)果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關(guān)試劑。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)引物設(shè)計(jì)應(yīng)具有特異性，依靠引物設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；引物分裝成多管，不宜反復(fù)凍融多次；PCR反應(yīng)的各種成分不能遺漏，操作應(yīng)戴手套，冰上操作；根據(jù)引物的Tm值和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度以及PCR儀的特性來(lái)設(shè)定PCR循環(huán)條件；注意分析電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物時(shí)出現(xiàn)拖帶或非特異性擴(kuò)增帶、無(wú)DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態(tài)性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態(tài)性。：能在宿主細(xì)胞中能自我自制并能穩(wěn)定保存，要有多個(gè)酶切位點(diǎn)，每種酶切位點(diǎn)最好只有一個(gè)，酶切后不損壞其自制能力及選擇標(biāo)記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。、＿、＿等。，主要有＿、＿、＿。，根據(jù)外源基因失活或沉默的分子機(jī)制，可將其分為三類(lèi)：＿、＿、＿等。，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍(lán)、蕃茄、柑橘等植物的原生質(zhì)體再生植株中觀察到變異，再生植株產(chǎn)生的變異主要有＿、＿、＿、＿。_______標(biāo)記和_______標(biāo)記等四種不同水平的標(biāo)記。，現(xiàn)欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，請(qǐng)簡(jiǎn)述實(shí)驗(yàn)室的布局及主要的儀器設(shè)備，滅菌時(shí)間。、通過(guò)對(duì)生物技術(shù)的學(xué)習(xí)，談?wù)勆锛夹g(shù)在園藝科學(xué)中的應(yīng)用與展望。 hybridization二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯(cuò)誤的填“N”。，常采用酶解的方法脫除細(xì)胞壁。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。：大腸桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，PEG介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化、電擊法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、基因槍法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化及花粉管通道法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化等。三、填空題：將下列各題空缺部分的答案填在后面的方框內(nèi)，兩者用“，”隔開(kāi)。、＿、＿等四種。，在園藝植物病毒病的防治中常用的策略主要有＿、＿、＿、＿。，又稱(chēng)為＿、＿、＿、＿等。四、選擇題：從備選答案中選出正確的結(jié)果，正確答案是唯一的。六、綜述題：將下列各題的答案寫(xiě)在下面的方框內(nèi)。一、將下面詞組相對(duì)應(yīng)的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。：能在宿主細(xì)胞中能自我自制并能穩(wěn)定保存，要有多個(gè)酶切位點(diǎn)，每種酶切位點(diǎn)最好只有一個(gè)，酶切后不損壞其自制能力及選擇標(biāo)記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。：大腸桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，PEG介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化、電擊法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、基因槍法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化及花粉管通道法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化等。、＿、＿、＿等方法。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。 aquaticus 菌提取的熱穩(wěn)定性酶，、＿、＿等。、＿、＿等四種。Ant D:GFP ：（）A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因：（）Ａ：誘導(dǎo)莖細(xì)胞的伸長(zhǎng) Ｂ：對(duì)形成層的細(xì)胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老：（）A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法五、簡(jiǎn)答題：將下列各題的答案填在下面的方框內(nèi)。？，現(xiàn)欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，請(qǐng)簡(jiǎn)述實(shí)驗(yàn)室的布局及主要的儀器設(shè)備六、綜述題：將下列各題的答案寫(xiě)在下面的方框內(nèi)。第五篇：《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案實(shí)驗(yàn)一 現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與實(shí)驗(yàn)儀器一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)儀器是開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究