【正文】 下游引物之間盡量少的存在互補序列，否則上下游引物退火結(jié)合，將影響到PCR的擴增效率。答：利用同源序列法快速克隆基因的基本思路是依據(jù)基因序列的高度保守區(qū)域，設(shè)計特異性的簡并引物，通過PCR擴增基因組DNA或cDNA，獲得所要分離的基因序列，多用于抗病基因的分離、克隆。主要過程為：①提取基因組DNA；②根據(jù)已知基因保守區(qū)域的核酸序列特征，運用軟件設(shè)計引物并合成；③以基因組DNA為模板進行PCR擴增；④回收PCR擴增的目的片段；⑤將目的片段鏈接載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌；⑥測序并進行序列分析。四． 綜合題根據(jù)你所學(xué)，談?wù)勀銓D(zhuǎn)基因植物的看法。答：自1983年美國在世界上首次獲得轉(zhuǎn)基因煙草以來，植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到了迅速發(fā)展，在世界范圍內(nèi)得到了廣泛的應(yīng)用。目前，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)成熟，轉(zhuǎn)基因作物已進入產(chǎn)業(yè)化階段，而且種植面積逐年擴大，呈直線上升趨勢。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、生物和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，進行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物藥物和疫苗等。世界上已通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出許多產(chǎn)量高、品質(zhì)好、抗性強的農(nóng)作物新品種，生物技術(shù)藥品已應(yīng)用到醫(yī)藥、保健食品和日化產(chǎn)品等各個方面，生物制藥產(chǎn)業(yè)已成為最活躍、進展最快的產(chǎn)業(yè)之一。因此，人們將以轉(zhuǎn)基因技術(shù)為核心的生物技術(shù)上的巨大飛躍譽為第二次“綠色革命”。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛：（1）植物品質(zhì)改良、新品種的培育，以滿足人類不斷增長的物質(zhì)生活需要：植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)可高效、快速提高糧食作物、蔬菜、林木樹種和花卉草種的產(chǎn)量、品質(zhì)和抗耐性，為培育高產(chǎn)、高抗、多抗、優(yōu)質(zhì)的新品種提供了科學(xué)的手段。（2）醫(yī)藥研究，為人類健康服務(wù)：轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以把植物作為“生物反應(yīng)器”，進行藥物蛋白、工業(yè)用酶、糖類、脂類等一些有益次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)，具有成本低、周期短、效益高和安全性好的特點。（3）能源開發(fā)，促進世界經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展：隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展，加速了對石油等有限的不可再生礦質(zhì)能源的消耗，世界各國均面臨著能源枯竭的嚴(yán)重問題。（4）減少環(huán)境污染，保護人類賴以生存的自然環(huán)境：轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以生產(chǎn)許多抗性強、適應(yīng)性廣的植物，最大限度地利用土地資源，增加全球植被的覆蓋率，減少水土流失和土地沙漠化，減少因CO2增加引起的溫室效應(yīng)。抗病、抗蟲轉(zhuǎn)基因作物的廣泛種植，可以減少農(nóng)藥的使用量。轉(zhuǎn)基因植物可對土壤中的有毒污染物進行高效吸收或生物降解，通過植物修復(fù)系統(tǒng)使受污染的環(huán)境得到修復(fù)?？傊?，轉(zhuǎn)基因植物的廣泛種植可以顯著降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率；可以有效緩解人類的糧食問題、能源問題；可以大大提高人類的生活質(zhì)量和健康水平；可以有效增加可利用的土地資源，擴大綠地植被面積，減少土地的沙漠化和鹽堿化，減少環(huán)境污染，保護生態(tài)環(huán)境。目前，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其轉(zhuǎn)基因植物已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品工業(yè)、畜牧業(yè)等各個領(lǐng)域，其經(jīng)濟效益、生態(tài)效益和社會效益都是巨大的。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)是一種技術(shù)創(chuàng)新，是現(xiàn)代科技革命的一個重要方面，在農(nóng)業(yè)、生物、醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)保和能源領(lǐng)域具有廣闊的發(fā)展前景。第三篇：《園藝植物生物技術(shù)》實驗教案實驗一 現(xiàn)代生物技術(shù)實驗室與實驗儀器一、實驗?zāi)康膶嶒炇液蛯嶒瀮x器是開展現(xiàn)代生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)平臺，對實驗室布局和儀器配置的掌握程度是學(xué)生知識結(jié)構(gòu)完整性的重要體現(xiàn)。通過現(xiàn)場參觀和老師講解加深同學(xué)們對現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗室的規(guī)劃與布局及常用儀器設(shè)備的主要功能的認(rèn)識，掌握高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等關(guān)鍵儀器的使用方法。二、實驗場所選擇及實驗內(nèi)容園藝學(xué)院植物分子生物技術(shù)實驗室與開展現(xiàn)代生物技術(shù)研究直接相關(guān)的實驗室分工與布局和主要相關(guān)儀器：如與組織培養(yǎng)有關(guān)的超凈工作臺、高壓滅菌鍋、接種至、培養(yǎng)室等；與分子生物學(xué)有關(guān)的高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。三、實驗方法與步驟相關(guān)背景知識回顧：對課堂講述的各種生物技術(shù)如分子標(biāo)記、細(xì)胞和組織培養(yǎng)等操作過程進行回顧，重要指出每個環(huán)節(jié)要用到的必備儀器的作用、性能指標(biāo)、操作注意事項及儀器選購中應(yīng)注意的問題等。每班分為兩小組簡要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實驗室的布局及功能分區(qū)情況；針對每個分區(qū)的重要儀器進行講述，結(jié)束時對所有參觀內(nèi)容進行簡要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問。四、實驗注意事項實驗有很多易損儀器或有毒試劑，參觀時要求同學(xué)們認(rèn)真記錄，不要隨意動手，以保證儀器和人身安全。五、思考題根據(jù)參觀內(nèi)容，描述本次參觀有了解到的主要儀器的名稱、用途及使用中的注意事項。一個現(xiàn)代化生物技術(shù)實驗室應(yīng)具備的基本功能的必備儀器有哪些？實驗二 質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測一、實驗?zāi)康馁|(zhì)粒是攜帶外源基因進入細(xì)菌中擴增或表達(dá)的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質(zhì)粒的分離與提取時最常用、最基本的實驗技術(shù)。質(zhì)粒的提取方法很多，大多包括3個主要步驟：細(xì)菌的培養(yǎng)、細(xì)菌的收集和裂解、質(zhì)粒DNA的分離和純化。本實驗以堿裂解法為例介紹質(zhì)粒的抽提過程，應(yīng)掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用。二、實驗原理 在pH ，細(xì)菌的線性大分子量染色體DNA變性分開，而共價閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。通過離心，可除去大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提進一步純化質(zhì)粒DNA。三、主要儀器及試材含有質(zhì)粒pUC18載體的大腸桿菌菌液及離心機、移液槍、離心管及質(zhì)粒DNA提取有關(guān)試劑。液氮、及DNA提取有關(guān)試劑。四、實驗方法與步驟（一）試劑配制:LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分裝至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高壓滅菌15min，室溫貯存。Xgal（20mg/ml）:20mg Xgal溶于1ml二甲基甲酰胺中，20℃避光保存。IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過濾滅菌后20℃保存。Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去離子滅菌雙蒸水中，定容至5ml，20℃保存。溶液I: 50mM葡萄糖，25mM TrisHCl（pH ），10mM EDTA（pH ）。配制方法：1M TrisHCl（pH ）， EDTA（pH ）10ml，加ddH2O至500ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。溶液II: NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時配制。溶液III:醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 。配制方法：5M KAc300ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。TE:10mM TrisHCl（pH ），1mM EDTA（pH ）。配制方法：1M TrisHCl（pH ）1ml， EDTA（pH ），加ddH2O至100ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。乙醇（無水乙醇、70%乙醇）。15TBE:Trisbase 54g，EDTANa2H2O ，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。1溴化乙錠（EB）：10mg/ml1Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNasefree）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加熱15min，分裝貯存于20℃。16loading buffer（上樣緩沖液）:%溴酚藍(lán)，%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。11%瓊脂糖凝膠:稱取1g瓊脂糖與三角燒瓶中，加100ml 1TBE，微波爐加熱至完全熔化，冷卻至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）（注意：EB為強誘變劑，操作時帶手套），輕輕搖勻，緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩沖液1TBE），即可上樣。（二）實驗步驟取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線37℃過夜培養(yǎng)。用無菌牙簽或槍頭挑取LB固體培養(yǎng)基上生長的單菌落，接種于20ml含有Amp抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床250r/min過夜培養(yǎng)。12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。加入200ul預(yù)冷的溶液I，重新懸浮細(xì)胞，震蕩混勻（注意：應(yīng)徹底混勻沉淀或碎塊）。加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上23min，使細(xì)胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。加入300ul預(yù)冷的溶液III，溫和顛倒混勻，見白色絮狀沉淀，置于冰上35min，使雜質(zhì)充分沉淀（溶液III為中和液，此時質(zhì)粒DNA復(fù)性，染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性，形成不可溶復(fù)合物，同時K+使SDS蛋白復(fù)合物沉淀）。吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的雜質(zhì)）至另一Eppendorf管中，加入2/，混勻，室溫放置5min，4℃離心12000g 15min。倒盡上清，加75%乙醇浸洗沉淀除鹽12次，4℃離心 10000g10min，棄上清，將沉淀在室溫或超凈工作臺上風(fēng)干。將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，20℃保存?zhèn)溆?。取制備的質(zhì)粒DNA 12ul，加適當(dāng)loading buffer混勻上樣，1%。五、實驗注意事項實驗中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質(zhì)，操作時應(yīng)注意防護，盡量減少臺面污染。DAN電泳時只能由負(fù)極到正極，電泳時要注意電極是否正確。質(zhì)粒電泳檢測一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開環(huán)、線型三種構(gòu)型。六、思考題簡述質(zhì)粒DAN提取的步驟。實驗三 PCR技術(shù)一、實驗?zāi)康木酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴增系統(tǒng)，是分子克隆技術(shù)中常用技術(shù)之一。PCR具有反應(yīng)快速、靈敏、操作簡便等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。通過本實驗應(yīng)掌握PCR原理，學(xué)習(xí)PCR操作過程。二、實驗原理PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在環(huán)境下依賴于DNA聚合酶的酶促反應(yīng)。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板結(jié)合的特異性。反應(yīng)分為變性、退火、延伸三步，經(jīng)過一定的循環(huán)，介于兩個引物之間的特異DNA片段得到大量擴增。三、主要儀器及試材含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關(guān)試劑。四、實驗方法與步驟調(diào)整模板濃度至5ng/ul。按下列體系配制反應(yīng)混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。Template DNA2ul（20ng）10buffer MgCl2（25mM） Primer F（10uM） Primer R（10uM） dNTPs（2mM） Taq（5U/ul） Add ddH2O to20ulPCR反應(yīng)循環(huán)條件設(shè)置：95℃3min1cycle 94℃1min55℃1min 72℃90s35cycles 72℃10min1cycle 4℃forever檢測：加2ul溴酚藍(lán)，混勻，短暫離心，取15ul反應(yīng)產(chǎn)物點樣電泳在1%瓊脂糖凝膠上點樣電泳；EB染色，紫外觀察。五、實驗注意事項引物設(shè)計應(yīng)具有特異性，依靠引物設(shè)計軟件進行引物設(shè)計；引物分裝成多管，不宜反復(fù)凍融多次；PCR反應(yīng)的各種成分不能遺漏，操作應(yīng)戴手套，冰上操作；根據(jù)引物的Tm值和擴增片段長度以及PCR儀的特性來設(shè)定PCR循環(huán)條件；注意分析電泳檢測PCR產(chǎn)物時出現(xiàn)拖帶或非特異性擴增帶、無DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。六、思考題簡述PCR技術(shù)的原理和步驟。第四篇：園藝植物生物技術(shù) 試卷（模版）一、將下面詞組相對應(yīng)的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。 medium 二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。，是指由體細(xì)胞形成的、類似于生殖細(xì)胞形成的配子胚發(fā)育過程的胚胎發(fā)生途徑。，是因為其中的EB是一種強致癌物和誘變劑。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。，常用的有藜科、茄科、豆科、十字花科、葫蘆科等植物。，而花粉培養(yǎng)則屬于器官培養(yǎng)的范疇。，造成難以播種成苗或要發(fā)育中期階段就敗育或退化的胚進行中期離體培養(yǎng)。，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態(tài)性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態(tài)性。、類病