【正文】 下游引物之間盡量少的存在互補序列，否則上下游引物退火結合，將影響到PCR的擴增效率。答：利用同源序列法快速克隆基因的基本思路是依據(jù)基因序列的高度保守區(qū)域，設計特異性的簡并引物，通過PCR擴增基因組DNA或cDNA，獲得所要分離的基因序列，多用于抗病基因的分離、克隆。主要過程為：①提取基因組DNA；②根據(jù)已知基因保守區(qū)域的核酸序列特征，運用軟件設計引物并合成；③以基因組DNA為模板進行PCR擴增；④回收PCR擴增的目的片段；⑤將目的片段鏈接載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌；⑥測序并進行序列分析。四． 綜合題根據(jù)你所學，談談你對轉(zhuǎn)基因植物的看法。答：自1983年美國在世界上首次獲得轉(zhuǎn)基因煙草以來，植物轉(zhuǎn)基因技術得到了迅速發(fā)展，在世界范圍內(nèi)得到了廣泛的應用。目前，轉(zhuǎn)基因技術已經(jīng)成熟，轉(zhuǎn)基因作物已進入產(chǎn)業(yè)化階段，而且種植面積逐年擴大，呈直線上升趨勢。植物轉(zhuǎn)基因技術主要應用于農(nóng)業(yè)、生物和醫(yī)學等領域，進行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應器生產(chǎn)生物藥物和疫苗等。世界上已通過轉(zhuǎn)基因技術培育出許多產(chǎn)量高、品質(zhì)好、抗性強的農(nóng)作物新品種，生物技術藥品已應用到醫(yī)藥、保健食品和日化產(chǎn)品等各個方面，生物制藥產(chǎn)業(yè)已成為最活躍、進展最快的產(chǎn)業(yè)之一。因此，人們將以轉(zhuǎn)基因技術為核心的生物技術上的巨大飛躍譽為第二次“綠色革命”。植物轉(zhuǎn)基因技術的應用十分廣泛：（1）植物品質(zhì)改良、新品種的培育，以滿足人類不斷增長的物質(zhì)生活需要：植物轉(zhuǎn)基因技術可高效、快速提高糧食作物、蔬菜、林木樹種和花卉草種的產(chǎn)量、品質(zhì)和抗耐性，為培育高產(chǎn)、高抗、多抗、優(yōu)質(zhì)的新品種提供了科學的手段。（2）醫(yī)藥研究，為人類健康服務：轉(zhuǎn)基因技術可以把植物作為“生物反應器”，進行藥物蛋白、工業(yè)用酶、糖類、脂類等一些有益次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)，具有成本低、周期短、效益高和安全性好的特點。（3）能源開發(fā)，促進世界經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展：隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展，加速了對石油等有限的不可再生礦質(zhì)能源的消耗，世界各國均面臨著能源枯竭的嚴重問題。（4）減少環(huán)境污染，保護人類賴以生存的自然環(huán)境：轉(zhuǎn)基因技術可以生產(chǎn)許多抗性強、適應性廣的植物，最大限度地利用土地資源，增加全球植被的覆蓋率，減少水土流失和土地沙漠化，減少因CO2增加引起的溫室效應?？共?、抗蟲轉(zhuǎn)基因作物的廣泛種植，可以減少農(nóng)藥的使用量。轉(zhuǎn)基因植物可對土壤中的有毒污染物進行高效吸收或生物降解，通過植物修復系統(tǒng)使受污染的環(huán)境得到修復?？傊?，轉(zhuǎn)基因植物的廣泛種植可以顯著降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率；可以有效緩解人類的糧食問題、能源問題；可以大大提高人類的生活質(zhì)量和健康水平；可以有效增加可利用的土地資源，擴大綠地植被面積，減少土地的沙漠化和鹽堿化，減少環(huán)境污染，保護生態(tài)環(huán)境。目前，轉(zhuǎn)基因技術及其轉(zhuǎn)基因植物已廣泛應用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品工業(yè)、畜牧業(yè)等各個領域，其經(jīng)濟效益、生態(tài)效益和社會效益都是巨大的。植物轉(zhuǎn)基因技術是一種技術創(chuàng)新，是現(xiàn)代科技革命的一個重要方面，在農(nóng)業(yè)、生物、醫(yī)學、食品、環(huán)保和能源領域具有廣闊的發(fā)展前景。第三篇：《園藝植物生物技術》實驗教案實驗一 現(xiàn)代生物技術實驗室與實驗儀器一、實驗目的實驗室和實驗儀器是開展現(xiàn)代生物技術研究的基礎平臺，對實驗室布局和儀器配置的掌握程度是學生知識結構完整性的重要體現(xiàn)。通過現(xiàn)場參觀和老師講解加深同學們對現(xiàn)代分子生物學實驗室的規(guī)劃與布局及常用儀器設備的主要功能的認識，掌握高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等關鍵儀器的使用方法。二、實驗場所選擇及實驗內(nèi)容園藝學院植物分子生物技術實驗室與開展現(xiàn)代生物技術研究直接相關的實驗室分工與布局和主要相關儀器：如與組織培養(yǎng)有關的超凈工作臺、高壓滅菌鍋、接種至、培養(yǎng)室等；與分子生物學有關的高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。三、實驗方法與步驟相關背景知識回顧：對課堂講述的各種生物技術如分子標記、細胞和組織培養(yǎng)等操作過程進行回顧，重要指出每個環(huán)節(jié)要用到的必備儀器的作用、性能指標、操作注意事項及儀器選購中應注意的問題等。每班分為兩小組簡要介紹現(xiàn)代生物技術實驗室的布局及功能分區(qū)情況；針對每個分區(qū)的重要儀器進行講述，結束時對所有參觀內(nèi)容進行簡要總結，并回答同學們的提問。四、實驗注意事項實驗有很多易損儀器或有毒試劑，參觀時要求同學們認真記錄，不要隨意動手，以保證儀器和人身安全。五、思考題根據(jù)參觀內(nèi)容，描述本次參觀有了解到的主要儀器的名稱、用途及使用中的注意事項。一個現(xiàn)代化生物技術實驗室應具備的基本功能的必備儀器有哪些？實驗二 質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測一、實驗目的質(zhì)粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質(zhì)粒的分離與提取時最常用、最基本的實驗技術。質(zhì)粒的提取方法很多，大多包括3個主要步驟：細菌的培養(yǎng)、細菌的收集和裂解、質(zhì)粒DNA的分離和純化。本實驗以堿裂解法為例介紹質(zhì)粒的抽提過程，應掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用。二、實驗原理 在pH ，細菌的線性大分子量染色體DNA變性分開，而共價閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態(tài)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。通過離心，可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提進一步純化質(zhì)粒DNA。三、主要儀器及試材含有質(zhì)粒pUC18載體的大腸桿菌菌液及離心機、移液槍、離心管及質(zhì)粒DNA提取有關試劑。液氮、及DNA提取有關試劑。四、實驗方法與步驟（一）試劑配制:LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分裝至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高壓滅菌15min，室溫貯存。Xgal（20mg/ml）:20mg Xgal溶于1ml二甲基甲酰胺中，20℃避光保存。IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過濾滅菌后20℃保存。Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去離子滅菌雙蒸水中，定容至5ml，20℃保存。溶液I: 50mM葡萄糖，25mM TrisHCl（pH ），10mM EDTA（pH ）。配制方法：1M TrisHCl（pH ）， EDTA（pH ）10ml，加ddH2O至500ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。溶液II: NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時配制。溶液III:醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 。配制方法：5M KAc300ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。TE:10mM TrisHCl（pH ），1mM EDTA（pH ）。配制方法：1M TrisHCl（pH ）1ml， EDTA（pH ），加ddH2O至100ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。乙醇（無水乙醇、70%乙醇）。15TBE:Trisbase 54g，EDTANa2H2O ，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。1溴化乙錠（EB）：10mg/ml1Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNasefree）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加熱15min，分裝貯存于20℃。16loading buffer（上樣緩沖液）:%溴酚藍，%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。11%瓊脂糖凝膠:稱取1g瓊脂糖與三角燒瓶中，加100ml 1TBE，微波爐加熱至完全熔化，冷卻至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）（注意：EB為強誘變劑，操作時帶手套），輕輕搖勻，緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩沖液1TBE），即可上樣。（二）實驗步驟取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線37℃過夜培養(yǎng)。用無菌牙簽或槍頭挑取LB固體培養(yǎng)基上生長的單菌落，接種于20ml含有Amp抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床250r/min過夜培養(yǎng)。12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。加入200ul預冷的溶液I，重新懸浮細胞，震蕩混勻（注意：應徹底混勻沉淀或碎塊）。加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上23min，使細胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。加入300ul預冷的溶液III，溫和顛倒混勻，見白色絮狀沉淀，置于冰上35min，使雜質(zhì)充分沉淀（溶液III為中和液，此時質(zhì)粒DNA復性，染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性，形成不可溶復合物，同時K+使SDS蛋白復合物沉淀）。吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的雜質(zhì)）至另一Eppendorf管中，加入2/，混勻，室溫放置5min，4℃離心12000g 15min。倒盡上清，加75%乙醇浸洗沉淀除鹽12次，4℃離心 10000g10min，棄上清，將沉淀在室溫或超凈工作臺上風干。將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，20℃保存?zhèn)溆?。取制備的質(zhì)粒DNA 12ul，加適當loading buffer混勻上樣，1%。五、實驗注意事項實驗中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質(zhì)，操作時應注意防護，盡量減少臺面污染。DAN電泳時只能由負極到正極，電泳時要注意電極是否正確。質(zhì)粒電泳檢測一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開環(huán)、線型三種構型。六、思考題簡述質(zhì)粒DAN提取的步驟。實驗三 PCR技術一、實驗目的聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴增系統(tǒng)，是分子克隆技術中常用技術之一。PCR具有反應快速、靈敏、操作簡便等優(yōu)點，已廣泛應用于分子生物學的各個領域。通過本實驗應掌握PCR原理，學習PCR操作過程。二、實驗原理PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在環(huán)境下依賴于DNA聚合酶的酶促反應。PCR技術的特異性取決于引物和模板結合的特異性。反應分為變性、退火、延伸三步，經(jīng)過一定的循環(huán)，介于兩個引物之間的特異DNA片段得到大量擴增。三、主要儀器及試材含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關試劑。四、實驗方法與步驟調(diào)整模板濃度至5ng/ul。按下列體系配制反應混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。Template DNA2ul（20ng）10buffer MgCl2（25mM） Primer F（10uM） Primer R（10uM） dNTPs（2mM） Taq（5U/ul） Add ddH2O to20ulPCR反應循環(huán)條件設置：95℃3min1cycle 94℃1min55℃1min 72℃90s35cycles 72℃10min1cycle 4℃forever檢測：加2ul溴酚藍，混勻，短暫離心，取15ul反應產(chǎn)物點樣電泳在1%瓊脂糖凝膠上點樣電泳；EB染色，紫外觀察。五、實驗注意事項引物設計應具有特異性，依靠引物設計軟件進行引物設計；引物分裝成多管，不宜反復凍融多次；PCR反應的各種成分不能遺漏，操作應戴手套，冰上操作；根據(jù)引物的Tm值和擴增片段長度以及PCR儀的特性來設定PCR循環(huán)條件；注意分析電泳檢測PCR產(chǎn)物時出現(xiàn)拖帶或非特異性擴增帶、無DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。六、思考題簡述PCR技術的原理和步驟。第四篇：園藝植物生物技術 試卷（模版）一、將下面詞組相對應的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。 medium 二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。，是指由體細胞形成的、類似于生殖細胞形成的配子胚發(fā)育過程的胚胎發(fā)生途徑。，是因為其中的EB是一種強致癌物和誘變劑。，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。，常用的有藜科、茄科、豆科、十字花科、葫蘆科等植物。，而花粉培養(yǎng)則屬于器官培養(yǎng)的范疇。，造成難以播種成苗或要發(fā)育中期階段就敗育或退化的胚進行中期離體培養(yǎng)。，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態(tài)性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態(tài)性。、類病