【正文】 液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。④逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴(lài)于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱(chēng)互補(bǔ)DNA。有色物質(zhì)可以使整個(gè)培養(yǎng)菌落產(chǎn)生顏色變化，可用于菌落鑒定和篩選。第二篇：園藝植物生物技術(shù)園藝專(zhuān)業(yè)推廣碩士《園藝植物生物技術(shù)》試題一．名詞解釋1．基因組：某一生物包括編碼序列和非編碼序列在內(nèi)的全部DNA分子。第三，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的毒性，能引起人的過(guò)敏反應(yīng)。2007年10月和11月，美國(guó)《紐約時(shí)報(bào)》等媒體報(bào)道，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期周密跟蹤觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)有兩種轉(zhuǎn)基因玉米種植導(dǎo)致傷害蝴蝶生存，對(duì)生態(tài)環(huán)境安全的威脅程度已經(jīng)超出可接受水平。轉(zhuǎn)基因技術(shù)給人類(lèi)帶來(lái)福音的同時(shí)也帶來(lái)了危害。第二，改良品質(zhì)。所以我們可以說(shuō)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和補(bǔ)充，我們將兩者緊密結(jié)合，可以大大地提高動(dòng)植物品種改良的效率。人們常說(shuō)的“遺傳工程”、“基因工程”、“遺傳轉(zhuǎn)化”均為轉(zhuǎn)基因的同義詞?；蚱蔚膩?lái)源可以是提取特定生物體基因組中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段。因此我們可以說(shuō)現(xiàn)在的轉(zhuǎn)基因技術(shù)與過(guò)去的傳統(tǒng)技術(shù)相比，他們的本質(zhì)都是通過(guò)獲得優(yōu)良基因人為的或者自然的進(jìn)行基因的遺傳改良。自1983年世界第一例轉(zhuǎn)基因植物——煙草問(wèn)世以來(lái)僅20多年的時(shí)間里，轉(zhuǎn)基因植物的研究和應(yīng)用就已經(jīng)得到了迅猛的發(fā)展，已有近1000例轉(zhuǎn)基因植物被批準(zhǔn)進(jìn)入田間試驗(yàn)，涉及的植物物種有50余個(gè)，已有48個(gè)轉(zhuǎn)基因植物品種被批準(zhǔn)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。通過(guò)基因改變，使傳統(tǒng)作物具備了抵御病蟲(chóng)害的能力，因此可大大減少農(nóng)藥和殺蟲(chóng)劑的使用，防止環(huán)境污染；通過(guò)改良基因，人類(lèi)能讓作物具有耐寒、耐熱、耐干旱或耐澇的不同特性，從而適應(yīng)不同的生長(zhǎng)環(huán)境，農(nóng)作物將徹底告別靠天種植的歷史。2006年，俄羅斯科學(xué)院高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)和神經(jīng)生理研究所科學(xué)家伊琳娜?艾爾馬科娃博士研究發(fā)現(xiàn)，食用轉(zhuǎn)基因大豆食物的老鼠，其幼鼠一半以上在出生后頭三個(gè)星期死亡，是食用非轉(zhuǎn)基因大豆老鼠死亡率的6倍。轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類(lèi)健康存在危害：第一，基因飄逸即基因流或基因水平轉(zhuǎn)移到其他近緣物種。我們必須以一種謹(jǐn)慎的態(tài)度來(lái)看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用對(duì)人類(lèi)發(fā)展而言前景是廣闊 的，影響也是深遠(yuǎn)的。是基于PCR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性?xún)?nèi)切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點(diǎn)序列，作為引物結(jié)合位點(diǎn)。答：基因工程中常用的工具酶有：①限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)菌產(chǎn)生的一類(lèi)能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。微衛(wèi)星的突變率在不同物種、同一物種的不同位點(diǎn)和同一位點(diǎn)的不同等位基因間存在很大差異，但其兩端序列多是保守的單拷貝序列，因而可以根據(jù)這兩端的序列設(shè)計(jì)一對(duì)特意引物，通過(guò)PCR技術(shù)將其間的核心微衛(wèi)星DNA序列擴(kuò)增出來(lái)，利用電泳分析技術(shù)就可獲得其長(zhǎng)度多態(tài)性。④ 將上清液移至新的離心管，顛倒混勻后放置15min，10000 r/min離心5min，棄上清液。⑥引物末端：只有引物的3’端與模板結(jié)合，PCR才能進(jìn)行，所以3’端最好是G或C。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、生物和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，進(jìn)行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物藥物和疫苗等。轉(zhuǎn)基因植物可對(duì)土壤中的有毒污染物進(jìn)行高效吸收或生物降解，通過(guò)植物修復(fù)系統(tǒng)使受污染的環(huán)境得到修復(fù)。每班分為兩小組簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的布局及功能分區(qū)情況；針對(duì)每個(gè)分區(qū)的重要儀器進(jìn)行講述，結(jié)束時(shí)對(duì)所有參觀(guān)內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問(wèn)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過(guò)濾滅菌后20℃保存。配制方法：5M KAc300ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。高壓滅菌15min，貯存于4℃。加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上23min，使細(xì)胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。質(zhì)粒電泳檢測(cè)一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開(kāi)環(huán)、線(xiàn)型三種構(gòu)型。三、主要儀器及試材含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋(píng)果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關(guān)試劑。，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態(tài)性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態(tài)性。、＿、＿等。，根據(jù)外源基因失活或沉默的分子機(jī)制，可將其分為三類(lèi)：＿、＿、＿等。_______標(biāo)記和_______標(biāo)記等四種不同水平的標(biāo)記。、通過(guò)對(duì)生物技術(shù)的學(xué)習(xí)，談?wù)勆锛夹g(shù)在園藝科學(xué)中的應(yīng)用與展望。，常采用酶解的方法脫除細(xì)胞壁。：大腸桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，PEG介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化、電擊法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、基因槍法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化及花粉管通道法介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化等。、＿、＿等四種。，又稱(chēng)為＿、＿、＿、＿等。一、將下面詞組相對(duì)應(yīng)的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。、＿、＿等四種。？，現(xiàn)欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，請(qǐng)簡(jiǎn)述實(shí)驗(yàn)室的布局及主要的儀器設(shè)備六、綜述題：將下列各題的答案寫(xiě)在下面的方框內(nèi)。每班分為兩小組簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的布局及功能分區(qū)情況；針對(duì)每個(gè)分區(qū)的重要儀器進(jìn)行講述，結(jié)束時(shí)對(duì)所有參觀(guān)內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問(wèn)。KNO395 g NH4NO3 g KH2PO g MgSO4?7H2O g CaCl2?2H2O g 注意事項(xiàng)：（1）配置母液前要仔細(xì)清洗存儲(chǔ)容器（2）應(yīng)按照順序分別徹底溶解后混合，每加完一種藥品，搖動(dòng)存儲(chǔ)瓶使其混合均勻；（3）溶解時(shí)最好加熱，以便充分溶解，避免沉淀的產(chǎn)生；（4）夏季要用新制的蒸餾水，并加熱，這樣可以避免因?yàn)樗袔Ь窟^(guò)大而產(chǎn)生沉淀，同時(shí)可以減緩綠藻的生成；（5）沉淀的產(chǎn)生一是由于溶解不充分就混合造成的渾濁型沉淀，所以配置時(shí)一定不要急；二是由于長(zhǎng)菌而產(chǎn)生絮狀沉淀，所以要用新制的蒸餾水并加熱。其它溶液配制：BA，NAA，IBA，GA3等激素類(lèi)試劑可先用少量1N NaOH徹底溶解，再加水定容。外植體消毒及接種操作要規(guī)范，注意超凈臺(tái)的衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)了解常用DNA提取方法的原理和技術(shù)，掌握改良CTAB法提取植物DNA以及DNA檢測(cè)技術(shù)，為將來(lái)從事園藝植物生物技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。苯酚：氯仿：異戊醇（25∶24∶1）：重蒸酚65℃水浴溶解，在燒杯中加入80ml溫?zé)岬恼麴s水，加入少許8羥基喹啉，溶解后加入100ml重蒸酚，再加入100ml氯仿：異戊醇（24：1），加入20克Tris Base， h左右至停止攪拌后很快分層，然后裝入棕色瓶中，4℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩８哔|(zhì)量的DNA要求：A260/A230； （3）向一定量的DNA中加入限制性?xún)?nèi)切酶EcoR I至45 U/181。質(zhì)粒的分離與提取時(shí)最常用、最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（一）試劑配制:LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。（二）實(shí)驗(yàn)步驟取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線(xiàn)37℃過(guò)夜培養(yǎng)。將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，20℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)五 PCR技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康木酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴(kuò)增系統(tǒng)，是分子克隆技術(shù)中常用技術(shù)之一。按下列體系配制反應(yīng)混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR產(chǎn)物TA克隆的原理，學(xué)習(xí)PCR產(chǎn)物純化及回收，以及PCR產(chǎn)物與TA克隆載體的連接。白色菌落為含有外源插入片段的轉(zhuǎn)化子，藍(lán)色是載體自連的轉(zhuǎn)化子。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料。質(zhì)粒DNA的分離 參考有關(guān)文獻(xiàn)。TA克隆技術(shù)比其它PCR克隆方法有更高的重組效率。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)引物設(shè)計(jì)應(yīng)具有特異性，依靠引物設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；引物分裝成多管，不宜反復(fù)凍融多次；PCR反應(yīng)的各種成分不能遺漏，操作應(yīng)戴手套，冰上操作；根據(jù)引物的Tm值和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度以及PCR儀的特性來(lái)設(shè)定PCR循環(huán)條件；注意分析電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物時(shí)出現(xiàn)拖帶或非特異性擴(kuò)增帶、無(wú)DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR原理，學(xué)習(xí)PCR操作過(guò)程。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質(zhì)，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，盡量減少臺(tái)面污染。，12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。15TBE:Trisbase 54g，EDTANa配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時(shí)配制。高壓滅菌15min，室溫貯存。本實(shí)驗(yàn)以堿裂解法為例介紹質(zhì)粒的抽提過(guò)程，應(yīng)掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的液氮、氯仿、苯酚、EB等都是危險(xiǎn)或有毒物質(zhì)，操作時(shí)要戴手套，并在專(zhuān)門(mén)區(qū)域操作。：向風(fēng)干后的DNA中加入500 ul 1TE，37℃水浴1530分鐘至DNA完全溶解，加5 ul 5 mg/ml Rnase，37℃水浴6小時(shí)，然后加入700 181。在機(jī)械研磨、高溫和去污劑的共同作用下，植物細(xì)胞破裂，DNA從細(xì)胞核釋放到提取緩沖液中。七、思考題影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些？主要參考文獻(xiàn)，曾君祉，周志勇，陳毓荃，黃華樑。有些試劑在乙醇或鹽酸中也可溶解，但比較而言，用堿溶解比較穩(wěn)定，不易產(chǎn)生沉淀。配制過(guò)程中產(chǎn)生沉淀的原因有：； 值過(guò)高，可加幾滴鹽酸校正。五、思考題根據(jù)參觀(guān)內(nèi)容，描述本次參觀(guān)有了解到的主要儀器的名稱(chēng)、用途及使用中的注意事項(xiàng)。、如果現(xiàn)已證明園藝植物的某一重要農(nóng)藝性狀是單基因控制的質(zhì)量性狀，且發(fā)現(xiàn)了一個(gè)與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。四、選擇題：從備選答案中選出正確的結(jié)果，正確答案是唯一的。，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍(lán)、蕃茄、柑橘等植物的原生質(zhì)體再生植株中觀(guān)察到變異，再生植株產(chǎn)生的變異主要有＿、＿、＿、＿。、基因槍介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化、原生質(zhì)體介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化、花粉管通道法、無(wú)選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。，而花粉培養(yǎng)則屬于器官培養(yǎng)的范疇。，常采用酶解的方法脫除細(xì)胞壁。？。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。，影響原生質(zhì)體的主要因素有＿、＿、＿、＿。、GUS、Ant、Luc、AFLP等。現(xiàn)有一傳統(tǒng)品種，此品種的其它性狀均十分優(yōu)良，唯獨(dú)該性狀表現(xiàn)不佳，試論述如何應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)的方法對(duì)該性狀進(jìn)行改良？、談?wù)勼w細(xì)胞雜種在育種中的應(yīng)用?！疉TCG TACG GGTT3’，則能與其互補(bǔ)配對(duì)的另一條鏈可能是：（）A：5’ATCG TACG GGTT3’ B：5’AACC CGTA CGAT3’ C：3’TAGC ATGC CCAA5’ D：3’UAGC AUGC CCAA5’:（）A：血清學(xué)檢測(cè) B：PCR檢測(cè) C：同工酶檢測(cè) D：指示植物鑒定：()A：酒精消毒 B：HgCl2消毒 C：NaClO消毒 D：NaCl消毒：（）A：對(duì)稱(chēng)融合 B：非對(duì)稱(chēng)融合 C：配子—體細(xì)胞融合 D：：（）A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因：（）A：兩側(cè)的引物 B：DNA模板 C：TaqDNA聚合酶 D：Mg+ ：（）Ａ：誘導(dǎo)莖細(xì)胞的伸長(zhǎng) Ｂ：對(duì)形成層的細(xì)胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老，下列可能是遺傳物質(zhì)的有：()A：DNA B：RNA C：Protein D：多糖：()A：熱處理脫除病毒 B：莖尖培養(yǎng)脫除病毒 C：微芽嫁接脫除病毒 D：高壓滅菌脫除病毒：（）Ａ：植物的類(lèi)型 Ｂ：基因型 Ｃ：外植體類(lèi)型 Ｄ：生理狀態(tài) most important contribution of Watson and Crick is:()A：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)模型 B：RNA結(jié)構(gòu)模型 C：DNA是遺傳物質(zhì) D：DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)：（）A：形態(tài)學(xué) B：細(xì)胞學(xué) C：電子顯微鏡觀(guān)察法 D：遺傳標(biāo)記：（）A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法:()A：有性雜交 B：體細(xì)胞雜交 C：組織培養(yǎng) D：基因克隆：（）A：繪制品種的指紋圖譜B：種質(zhì)資源的遺傳多樣性及分類(lèi)研究 C：物種的起源與演化 D：種質(zhì)資源的評(píng)價(jià)、鑒定