【正文】 ＿、＿。，篩選的方法主要有：＿、＿、＿等。，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍、蕃茄、柑橘等植物的原生質(zhì)體再生植株中觀察到變異，再生植株產(chǎn)生的變異主要有＿、＿、＿、＿。：在離體的條件下，對植物（細胞）進行遺傳改良或使其增殖的各種技術(shù)的總稱，包括＿＿和＿＿兩個大的層面。 aquaticus 菌提取的熱穩(wěn)定性酶，、＿、＿等。______標記。_______標記和_______標記等四種不同水平的標記。、＿、＿等四種。，就最終對胚搶救成活及成苗率影響大小而言，所利用的組織優(yōu)劣順序是：＿、＿、＿、＿。四、選擇題：從備選答案中選出正確的結(jié)果，正確答案是唯一的。：（）A：繪制品種的指紋圖譜B：種質(zhì)資源的遺傳多樣性及分類研究 C：物種的起源與演化 D：種質(zhì)資源的評價、鑒定與創(chuàng)新，下列可能是遺傳物質(zhì)的有：()A：DNA B：RNA C：Protein D：多糖：()A：熱處理脫除病毒 B：莖尖培養(yǎng)脫除病毒 C：微芽嫁接脫除病毒 D：高壓滅菌脫除病毒’ATCG TACG GGTT3’，則能與其互補配對的另一條鏈可能是：（）A：5’ATCG TACG GGTT3’ B：5’AACC CGTA CGAT3’ C：3’TAGC ATGC CCAA5’ D：3’UAGC AUGC CCAA5’：（）Ａ：植物的類型 Ｂ：基因型 Ｃ：外植體類型 Ｄ：生理狀態(tài)：（）A：實驗材料的選擇 B：目標DNA片段的制備與克隆 C：目的基因的純化D：載體的構(gòu)建：（）A：黃龍病 B：裂皮病 C：線蟲病 D：速衰?。海ǎ粒嚎焖俜敝?Ｂ：提高育種效率，改良品種 Ｃ：脫毒 Ｄ：種質(zhì)保存:()A：有性雜交 B：體細胞雜交 C：組織培養(yǎng) D：基因克隆，主要表現(xiàn)在：（）Ａ：搶救發(fā)育不良或早期退化胚 Ｂ：克服遠緣雜交不親和 Ｃ：用于柑橘合子胚搶救 Ｄ：三倍體育種：（）Ａ：原生質(zhì)體來源 Ｂ：基因型 Ｃ：培養(yǎng)基 Ｄ：滲透壓調(diào)節(jié)劑，長方形是探針結(jié)合部位，試問3三種DNA樣品用該酶/探針組合進行RFLP分析能得到的雜交信號條帶數(shù)分別是：A： 1 B：2 C：1 D：2 ：（）A：免疫注射 B：細胞融合 C：篩選 D：克隆化’ATCGTACGGGTT3’，下列虛線部分為500—1000 pb長的DNA區(qū)域，請分析其中能進行2的指數(shù)倍擴增的有：()A: 5’ATCGTACGGGTT— — —3’ B: 5’ — — —ATCGTACGGGTT 3’ C: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TACCATGCCCAA 3’ D: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TTGGGCATGCAT 3’：（）A：克服生殖障礙，創(chuàng)造新種質(zhì) B：轉(zhuǎn)移有利性狀，改善作物品質(zhì) C：作為育種中間材料，進一步用作物改良 D：轉(zhuǎn)移部分染色體，獲得非對稱雜種 most important contribution of Watson and Crick is:()A：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)模型 B：RNA結(jié)構(gòu)模型 C：DNA是遺傳物質(zhì) D：DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)：（）A：cat B:GUS C。Ant D:GFP ：（）A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因：（）Ａ：誘導莖細胞的伸長 Ｂ：對形成層的細胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老：（）A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法五、簡答題：將下列各題的答案填在下面的方框內(nèi)。？、缺點。，滅菌時間。？，現(xiàn)欲建一園藝植物組織培養(yǎng)實驗室，請簡述實驗室的布局及主要的儀器設備六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內(nèi)。、談談體細胞雜種在育種中的應用。、如果現(xiàn)已證明園藝植物的某一重要農(nóng)藝性狀是單基因控制的質(zhì)量性狀，且發(fā)現(xiàn)了一個與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標記。現(xiàn)有一傳統(tǒng)品種，此品種的其它性狀均十分優(yōu)良，唯獨該性狀表現(xiàn)不佳，試論述如何應用現(xiàn)代生物技術(shù)的方法對該性狀進行改良？、通過對生物技術(shù)的學習，談談生物技術(shù)在園藝科學中的應用與展望。第五篇：《園藝植物生物技術(shù)》實驗教案《園藝植物生物技術(shù)》實驗教案實驗一 現(xiàn)代生物技術(shù)實驗室與實驗儀器一、實驗目的實驗室和實驗儀器是開展現(xiàn)代生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)平臺，對實驗室布局和儀器配置的掌握程度是學生知識結(jié)構(gòu)完整性的重要體現(xiàn)。通過現(xiàn)場參觀和老師講解加深同學們對現(xiàn)代分子生物學實驗室的規(guī)劃與布局及常用儀器設備的主要功能的認識，掌握高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等關(guān)鍵儀器的使用方法。二、實驗場所選擇及實驗內(nèi)容園藝學院植物分子生物技術(shù)實驗室與開展現(xiàn)代生物技術(shù)研究直接相關(guān)的實驗室分工與布局和主要相關(guān)儀器：如與組織培養(yǎng)有關(guān)的超凈工作臺、高壓滅菌鍋、接種至、培養(yǎng)室等；與分子生物學有關(guān)的高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。三、實驗方法與步驟相關(guān)背景知識回顧：對課堂講述的各種生物技術(shù)如分子標記、細胞和組織培養(yǎng)等操作過程進行回顧，重要指出每個環(huán)節(jié)要用到的必備儀器的作用、性能指標、操作注意事項及儀器選購中應注意的問題等。每班分為兩小組簡要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實驗室的布局及功能分區(qū)情況；針對每個分區(qū)的重要儀器進行講述，結(jié)束時對所有參觀內(nèi)容進行簡要總結(jié)，并回答同學們的提問。四、實驗注意事項實驗有很多易損儀器或有毒試劑，參觀時要求同學們認真記錄，不要隨意動手，以保證儀器和人身安全。五、思考題根據(jù)參觀內(nèi)容，描述本次參觀有了解到的主要儀器的名稱、用途及使用中的注意事項。一個現(xiàn)代化生物技術(shù)實驗室應具備的基本功能的必備儀器有哪些？實驗二 植物組織培養(yǎng)一、實驗目的植物組織培養(yǎng)是現(xiàn)代生物技術(shù)研究的重要技術(shù)手段，在原生質(zhì)體融合、病毒脫除、離體快繁及遺傳轉(zhuǎn)化等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。胡蘿卜以其培養(yǎng)體系成熟、再生容易而被視為組織培養(yǎng)的理想外植體材料，本實驗通過胡蘿卜的組織培養(yǎng)使同學們掌握基本培養(yǎng)基的配制、滅菌及培養(yǎng)的基本技能。二、實驗原理基于1902年德國科學家哈勃蘭特（Haberlandt）提出植物細胞的全能性理論，即指已分化的細胞仍然具有分化發(fā)育成新個體的潛能。在適宜的培養(yǎng)條件下，植物的細胞、組織或器官都具備再生成完整植物的能力。三、主要儀器及試材儀器：pH計、微波爐、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、培養(yǎng)室、三角瓶、封口膜、無菌濾紙、手術(shù)刀片、鑷子、酒精燈、記號筆等試材：新鮮胡蘿卜，培養(yǎng)基配制所需相關(guān)試劑四、實驗方法與步驟（一）培養(yǎng)基母液的配制（小規(guī)模實驗應按比例減少，避免造成很大的浪費）：大量元素(10倍液)：稱取下列藥品分別溶解定容到1升后，加到5升存儲瓶中。KNO395 g NH4NO3 g KH2PO g MgSO4?7H2O g CaCl2?2H2O g 注意事項：（1）配置母液前要仔細清洗存儲容器（2）應按照順序分別徹底溶解后混合，每加完一種藥品，搖動存儲瓶使其混合均勻；（3）溶解時最好加熱，以便充分溶解，避免沉淀的產(chǎn)生；（4）夏季要用新制的蒸餾水，并加熱，這樣可以避免因為水中帶菌量過大而產(chǎn)生沉淀，同時可以減緩綠藻的生成；（5）沉淀的產(chǎn)生一是由于溶解不充分就混合造成的渾濁型沉淀，所以配置時一定不要急；二是由于長菌而產(chǎn)生絮狀沉淀，所以要用新制的蒸餾水并加熱。微量元素母液的配制(100倍液)：取少量(200300ml)溫水依次加入下列藥品，每加一種藥品后攪拌溶解，最后定容到1L：KI g g ZnSO4*7H2O g NaMoO4*2H2O g CuSO4*5H2O g CoCl2*6H2O gMnSO4*4H2O g(MnSO4*H2O g)注意：配好后在室溫下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易產(chǎn)生結(jié)晶沉淀。配制過程中產(chǎn)生沉淀的原因有：； 值過高，可加幾滴鹽酸校正。甘氨酸和肌醇的配制(100倍液)：甘氨酸： g溶解定容到1L；肌醇：10 g溶解定容到1L鐵鹽的配制（100倍液）：稱取EDTA g，F(xiàn)eSO47H2O g，分別溶解后混合定容到1L，放入棕色細口瓶中，室溫放置10 h以上（防止結(jié)晶沉淀），然后放入4℃冰箱。維生素B的配制（100倍液）：VB組分 VB1(鹽酸硫氨素)VB6(鹽酸吡哆素)VB5(煙酸)改良MT 1g 1g MS 10 mg 50 mg 50 mg 分別稱取順序溶解在溫熱的蒸餾水中，定容到1L。注: 需要溶解完一個再加另一個；VB5不易溶解，需要攪拌，必要時可以加熱。Vc的配制（100倍液）：稱取Vc 溶解在蒸餾水中，定容到1L即可。其它溶液配制：BA，NAA，IBA，GA3等激素類試劑可先用少量1N NaOH徹底溶解，再加水定容。配好后室溫放置一段時間，再放入冰箱中冷藏保存。有些試劑在乙醇或鹽酸中也可溶解，但比較而言，用堿溶解比較穩(wěn)定，不易產(chǎn)生沉淀。注意：母液最好不要配制太多，如果配制的量較大，短時間內(nèi)用不完，最好分裝一部分到小的細口瓶中，在制作培養(yǎng)基時使用。這樣不容易產(chǎn)生沉淀。（二）培養(yǎng)基配制母液配好后，按以下體種（或質(zhì)量）量取，最后用蒸餾水定溶到1L,，用塑料燒杯放入微波爐中充分溶解后分裝滅菌。大量元素(10倍液)ml 微量元素(100倍)ml 甘氨酸和肌醇(100倍)ml 鐵鹽（100倍）ml 維生素B（100倍）ml Vc（100倍）ml 蔗糖g 瓊脂 g（三）接種與培養(yǎng)在超凈臺上接種后，用記號筆做好標簽，放置到光照培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)。五、實驗注意事項實驗中涉及到酒精及砷汞等危險品，注意人身安全的環(huán)境安全，廢液不要隨意亂倒。外植體消毒及接種操作要規(guī)范，注意超凈臺的衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的實驗習慣。六、實驗結(jié)果處理一星期后，統(tǒng)計污染率，并對未污染材料的生長狀況進行觀察，并分析產(chǎn)生污染的可能原因。七、思考題影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些？主要參考文獻，曾君祉，周志勇，陳毓荃，黃華樑。胡蘿卜組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立。植物學通報,2005，22:3742。實驗手冊，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料）。實驗三 植物DNA的提取、純化及檢測一、實驗目的DNA 提取是開展分子生物學的重要前提之一，高質(zhì)量的DNA直接關(guān)系到分子標記、基因克隆、圖譜構(gòu)建及功能基因組研究等工作的成敗。通過本實驗應了解常用DNA提取方法的原理和技術(shù)，掌握改良CTAB法提取植物DNA以及DNA檢測技術(shù)，為將來從事園藝植物生物技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。二、實驗原理植物的遺傳物質(zhì)是DNA，植物細胞內(nèi)含有豐富的遺傳物質(zhì)。在機械研磨、高溫和去污劑的共同作用下，植物細胞破裂，DNA從細胞核釋放到提取緩沖液中。經(jīng)蛋白質(zhì)強變性劑處理結(jié)合離心，除去蛋白質(zhì)和色素等雜質(zhì)，再用乙醇沉淀便可獲得高純度的DNA。DNA電泳是依據(jù)DNA帶負電荷，而不同濃度的瓊脂糖凝膠孔徑大小不同，在外加電場的作用下DNA由負極向正極移動，分子量小的移動快而分子量大的移動慢，最終達到不同分子量大小的DNA分離的目的。三、主要儀器及試材水浴鍋、離心機、移液槍、研缽、離心管、核酸電泳系統(tǒng)等；新鮮健康植物葉片，液氮、及DNA提取有關(guān)試劑。四、實驗方法與步驟 : CTAB提取液：(1)100 mM TrisHCl(PH )， M NaCl，50 mM EDTA(PH )(2)1% PVP，2% CTAB(3)取少許(1)加到(2)中，攪拌成糊狀,后加(1)至足量，65℃水浴充分溶解備用。使用前要在65℃溫浴一會兒，然后加入14%巰基乙醇，混均勻。苯酚：氯仿：異戊醇（25∶24∶1）：重蒸酚65℃水浴溶解，在燒杯中加入80ml溫熱的蒸餾水，加入少許8羥基喹啉，溶解后加入100ml重蒸酚，再加入100ml氯仿：異戊醇（24：1），加入20克Tris Base， h左右至停止攪拌后很快分層，然后裝入棕色瓶中，4℃冰箱中儲存?zhèn)溆?。在裝有葉片的離心管中加入石英砂少許（），用尖頭玻棒將材料研細后加入600 ul CTAB提取液，再繼續(xù)研磨一會兒使其懸浮均勻，然后在65℃水浴鍋中溫浴60分鐘，隔15分鐘取出上下輕輕顛倒幾次，水浴之后，加入500 ul苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），上下晃動10分鐘以上，其間置于37℃水浴鍋中溫浴一會（冬季），使之充分混勻，然后1000012000 rpm離心510分鐘，吸取上清液轉(zhuǎn)至另一離心管中，加入60 ul 5M NaCl，再加入20℃冰凍無水乙醇1 ml，輕輕顛倒數(shù)次，混合均勻后冰凍30分鐘沉淀DNA，然后800010000 rpm離心5分鐘，棄上清液，加入1 ml 70%酒精浸泡2小時或過夜，8000 rpm離心5分鐘,棄酒精之后在工作臺上風干DNA