從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明-wenkub
2023-05-07 22:41:08 本頁面
【正文】 物不易生存，離地表10 cm～30 cm的土層中菌數(shù)最多，隨土層加深，菌的數(shù)量減少【5】。二、實驗?zāi)康囊?．了解生物分離提純的原理和方法技術(shù)2．掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理和方法、綜合分析問題解決問題和判斷實驗結(jié)果的能力。常見產(chǎn)淀粉酶的主要為芽孢桿菌屬。淀粉酶廣泛存在于動植物和微生物中,是最早用于工業(yè)生產(chǎn)并且迄今仍是用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑產(chǎn)品之一。 專業(yè)資料分享 土壤中產(chǎn)淀粉酶芽胞桿菌的篩選及其淀粉酶活力的測定設(shè)計性實驗方案一、綜述： 淀粉酶是淀粉降解酶。淀粉酶種類繁多,特點各異,可應(yīng)用于造紙、印染、釀造、果汁和食品加工、醫(yī)藥、洗滌劑、工業(yè)副產(chǎn)品及廢料的處理、青貯飼料及微生態(tài)制劑]等多種領(lǐng)域。其中的常見產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌菌種有：地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌【2】、凝結(jié)芽孢【3】。三、實驗原理自然界中，土壤是微生物生活最適宜的環(huán)境。從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列分離與純化過程和多種特征鑒定才能得到。2. 生命力強:無濕狀態(tài)可耐低溫60℃、耐高溫+280℃，耐強酸、耐強堿、抗菌消毒、耐高氧(嗜氧繁殖)、耐低氧(厭氧繁殖)。 淀粉牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(%)： ～ ～ 發(fā)酵培養(yǎng)基(%)：玉米粉 2 黃豆餅粉 CaCl MgSO4 NaCl K2HPO4 檸檬酸鈉 (溶解后加) 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（）（%）： K2HPO4 校正pH ～ 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗用）（%）：蛋白胨1% % 校正pH ～ 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（%）： 硫酸鎂(MgSO4 溶液或試劑染料革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇。每個環(huán)境的土樣裝1個錐形瓶，共2個，同時將其分為4組，編號AB。在土壤稀釋過程中，用相同的移液槍頭由濃到稀來稀釋。復(fù)篩方法【1】劃線接種（分區(qū)劃線法）：在上述不同稀釋度培養(yǎng)基中挑取不同形態(tài)的單菌落進行分區(qū)劃線，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第1次平行劃線3~4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約60176。再繼續(xù)分區(qū)劃線23次，以獲得較純的菌種。實驗室里，四個平板均加入碘液，立即觀察記錄陽性和陰性菌落所在位置，并可同時記錄透明圈的大小。革蘭氏染色步驟：涂片、干燥及固定初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。 鏡檢：油鏡觀察染色結(jié)果。于涂片上滴人3～5滴5%孔雀綠水溶液。貼標(biāo)簽 取各種無菌斜面試管數(shù)支，將注有菌株名稱和接種日期的標(biāo)簽貼上，貼在試管斜面的正上方，距試管口2～3cm處。然后進行一系列的鏡檢——革蘭氏染色、芽孢染色（具體步驟同上）觀察是否符合附表中芽孢桿菌的指標(biāo)溫度對菌種培養(yǎng)的影響；淀粉水解試驗；溫度對菌種的影響；明膠液化
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