從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實(shí)驗(yàn)方案說明-文庫吧
2025-04-07 22:41 本頁面
【正文】 狀態(tài)可耐低溫60℃、耐高溫+280℃，耐強(qiáng)酸、耐強(qiáng)堿、抗菌消毒、耐高氧(嗜氧繁殖)、耐低氧(厭氧繁殖)。:體積比一般病源菌分子大四倍數(shù)，占據(jù)空間優(yōu)勢(shì)，抑制有害菌的生長(zhǎng)繁殖。四、實(shí)驗(yàn)材料和用具 土樣采集：采集廣大植物園內(nèi)的有機(jī)土壤，和生化樓下花壇的有機(jī)土壤 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(%)：蛋白胨1 ～ 蒸餾水 將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，～。加入瓊脂,加熱煮沸，使瓊脂溶化。 淀粉牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(%)： ～ ～ 發(fā)酵培養(yǎng)基(%)：玉米粉 2 黃豆餅粉 CaCl MgSO4 NaCl K2HPO4 檸檬酸鈉 (溶解后加) 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（）（%）： K2HPO4 校正pH ～ 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗(yàn)用）（%）：蛋白胨1% % 校正pH ～ 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（%）： 硫酸鎂(MgSO47H2O) 瓊脂2 溴麝香草酚藍(lán)溶液4 酚紅試劑 先將鹽類溶解于水中，校正pH，再加入瓊脂，加熱融化，然后加入指示劑，混勻后分裝試管，121℃高溫滅菌15min。 配制營(yíng)養(yǎng)明膠培養(yǎng)基（%）：蛋白胨 、調(diào)pH ~（%）：①蛋白胨1 氯化鈉2 ～ 蒸餾水 ②蛋白胨1 氯化鈉10 ～ 蒸餾水 ③蛋白胨1 氯化鈉20 ～ 蒸餾水 ④蛋白胨1 氯化鈉25 ～ 蒸餾水 加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，～。加入瓊脂,加熱煮沸，使瓊脂溶化。 溶液或試劑染料革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇。芽孢染色：5%孔雀綠溶液, 石炭酸復(fù)紅液。 香柏油、二甲苯吲哚試驗(yàn)：乙醚、吲哚試劑：40％NaOH溶液、α奈酚，淀粉酶活力測(cè)定：1%3, 5 二硝基水楊酸試劑 儀器或其它用具無菌玻璃涂棒 無菌吸管 接種環(huán) 無菌培養(yǎng)皿 土樣 三角瓶 燒杯 洗瓶 玻棒 試管 酒精燈 擦鏡紙 接種環(huán) 酒精燈 載玻片 吸水紙等。恒溫?fù)u床 恒溫培養(yǎng)箱 高壓蒸汽滅菌箱 超凈工作臺(tái) 水浴箱 紫外燈照射箱 磁力攪拌器 玻璃珠 移液管 涂布器 顯微鏡五、實(shí)驗(yàn)方法及步驟初篩方法①制菌懸液：兩個(gè)土樣分別取5g，放入各自裝有45mL無菌水的三角瓶，振蕩10min,即為稀釋101的土壤懸浮液。每個(gè)環(huán)境的土樣裝1個(gè)錐形瓶，共2個(gè)，同時(shí)將其分為4組，編號(hào)AB。②加熱篩選有芽孢的菌：將2個(gè)錐形瓶加塞、包扎、搖勻（無菌室里），利用恒溫水浴裝置100℃左右水浴，水浴鍋溫度恒定后維持15min（制懸液時(shí)就應(yīng)先開始加熱），制成101 g/ml的土壤懸液③梯度稀釋菌懸液：再分別另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號(hào)筆編上101010105。取已稀釋成101土壤液，用無菌的移液器吸取1mL土壤懸液加入102的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成102土壤稀釋液。同法從102的試管中吸取1mL稀釋液加入編號(hào)為1
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