土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù)maomao-wenkub
2022-12-23 08:28:35 本頁面
【正文】 要在酒精燈火焰周圍等等。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。 問題討論 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 微生物的恒溫培養(yǎng) 菌種的保存 ： 接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于 4℃ 冰箱保存。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。 水生耐熱細(xì)菌 Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高溫的 Taq DNA聚合酶 美國微生物學(xué)科布魯克（ ) 1966年發(fā)現(xiàn)耐熱細(xì)菌 研究思路 （一）篩選菌株 要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)， 包括營養(yǎng)、生理、生長條件等； 方法： ⑴抑制大多數(shù)微生物的生長 ⑵促進(jìn) 目的菌株 的 生長 結(jié)果： 培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板稀釋等方法對它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離。只有產(chǎn)生脲酶的 細(xì)菌能利用尿素作為氮源而生存。 ㈡ .統(tǒng)計菌落數(shù)目： 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對運(yùn)動細(xì)菌的計數(shù)； 需要相對高的細(xì)菌濃度； 個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察； 缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)： 設(shè)備簡單、能觀察微生物的形態(tài)特征。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在 30～ 300的平板進(jìn)行計數(shù)。因此結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。 平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為 2 212和256，該同學(xué)以這三個平板菌落數(shù)的平均值 163作為統(tǒng)計結(jié)果。 在分析實驗結(jié)果時 ， 一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致 ， 結(jié)果不一致 ， 意味著操作有誤 ， 需要重新實驗 。 ③ 統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。他們分析可能是 A同學(xué)的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或者培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基上生長。 你能通過設(shè)置對照，幫助 A同學(xué)排除上述兩個可能影響實驗結(jié)果的因素嗎？ 一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。 一種方案： 可以由其他同學(xué)用與 A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實驗 , 如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明 A無誤 。 （三）設(shè)置對照 設(shè)置對照的目的： 排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。 判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用： 完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng) 觀察菌落數(shù)目。 實驗步驟 1．土壤取樣 從肥沃 、 酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣 。 實驗步驟 怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？ 以尿素為 唯一氮源 的培養(yǎng)基 牛肉膏 蛋白胨 培養(yǎng)基 是 分離 尿素 細(xì)菌 判斷該 培養(yǎng)基 有無選 擇性 實驗組 對照組 培養(yǎng)基類型 是否 接種 目的 結(jié)果 只生長尿素細(xì)菌 生長多種微生物 是 制備 5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和15個選擇培養(yǎng)基。 因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離， 同時還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。 實驗步驟
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