廣大土壤中分離芽胞桿菌副本-wenkub
2023-07-11 20:59:21 本頁(yè)面
【正文】 術(shù)完成。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。 實(shí)驗(yàn)中通過(guò)80℃水浴20min預(yù)處理，殺死無(wú)芽孢菌體，篩選出芽孢桿菌；再用稀釋涂布平板法對(duì)芽孢桿菌進(jìn)行初步篩選；又通過(guò)分區(qū)劃線對(duì)初篩選菌株進(jìn)一步分離純化；然后再用選擇性淀粉培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，得到純培養(yǎng)的產(chǎn)淀粉酶，以及產(chǎn)芽孢的桿菌，最后通過(guò)對(duì)產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌做相關(guān)的生理生化實(shí)驗(yàn)，將篩選出來(lái)的菌株進(jìn)行鑒別，鑒別到了地衣芽孢桿菌和環(huán)狀芽孢桿菌。 關(guān)鍵詞：芽孢桿菌 淀粉酶 酶活測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?了解微生物分離純化的原理及微生物分離純化常用的方法和技術(shù)； 掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理及方法； 掌握微生物的搖瓶培養(yǎng)方法及淀粉酶活力測(cè)定的原理及方法； 培養(yǎng)學(xué)生自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案流程、綜合分析解決問(wèn)題及判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力； 對(duì)所學(xué)習(xí)過(guò)的微生物實(shí)驗(yàn)方法井陘綜合技能訓(xùn)練； 從不同環(huán)境土壤樣品中篩選出能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，并分析比較各種淀粉酶菌株的產(chǎn)淀粉酶活力及總結(jié)各芽孢桿菌在土壤中的分布情況；三、實(shí)驗(yàn)原理 土壤是微生物生活的大本營(yíng)，它所含微生物無(wú)論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。其基本原理是選擇適合與待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。值得指出的是，從微生物群體中經(jīng)分離生長(zhǎng)在平板上的單的菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。多數(shù)為腐生菌，主要分布于土壤、動(dòng)植物體表及水體中。將土樣放入無(wú)菌的紙袋中，并記錄采集的時(shí)間、地點(diǎn)、植被類型，4淀粉篩選培養(yǎng)基淀粉20 g，蛋白胨10 g，NaCl g，瓊脂10 g，自來(lái)水1000 ml，pH自然。糖發(fā)酵培養(yǎng)基（做糖酵解試驗(yàn)用：葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇）蛋白胨2 g，NaCl 5g，K2HPO4 ，1%溴麝香草酚藍(lán)水溶液3ml，待試糖10g（一般糖或醇按1%量加入，而乳糖，%的量加入），自來(lái)水1000 ml，pH ~，121℃滅菌20 min。將平板倒置過(guò)夜，使表面水分干燥；硝酸鹽培養(yǎng)基硝酸鉀 、蛋白 5g、蒸餾水 1000mL、硝酸鹽還原試劑甲液：，乙酸溶液100mL中。淀粉牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基可溶性淀粉2g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂15~20g，蒸餾水1000 ml，pH ~。革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇，%沙黃染色液；芽孢染色：5%孔雀綠染色液，%石碳酸復(fù)紅。酪素水解：脫脂奶粉（牛奶）；酪氨酸水解：L—酪氨酸 溶菌酶抗性實(shí)驗(yàn)：溶菌酶卵黃反應(yīng)：新鮮雞蛋硝酸鹽試驗(yàn)：硝酸鹽明膠液化試驗(yàn)：明膠檸檬酸鹽利用試驗(yàn)：西蒙斯氏檸檬酸鹽淀粉酶活力測(cè)定：1% 3,5二硝基水楊酸試劑 儀器； 無(wú)菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，土樣，三角瓶，燒杯，試管，酒精燈，無(wú)菌吸管，載玻片，吸水紙，涂布器，顯微鏡，移液管，移液槍等。靜置5min. 土壤懸液稀釋吸取上清液1 ml 加到含有9 ml 無(wú)菌水的試管中，配成10ˉ2 g/ml 的土壤懸液，
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