廣大土壤中分離芽胞桿菌副本(文件)
【正文】 并進(jìn)一步稀釋至10ˉ3 g/ml、10ˉ4 g/ml , 共三個(gè)濃度梯度。（一個(gè)平板一個(gè)細(xì)菌，并且分好區(qū)），挑取一個(gè)菌株，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線34條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約60176。染色步驟涂片、干燥、固定；染色：在涂有菌種的載玻片上滴加草酸銨結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅蓋住有菌的部分，染色，12min，傾去染液，用水沖洗直至無染色液為止。染色步驟涂布、干燥及固定；初染：于涂片上加入23滴5%孔雀綠水溶液，加熱，用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，邊加熱邊滴加染色液，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)，開始計(jì)時(shí)，約4min；脫色：傾去染液，待玻片冷卻后，水洗至孔雀綠不再褪色為止；復(fù)染：滴加沙黃染色液，染23min，水洗；鏡檢：用油鏡觀察染色結(jié)果。將有透明圈的菌株做好標(biāo)記。然后進(jìn)行一系列的鏡檢——革蘭氏染色、芽孢染色（具體步驟同上）觀察是否符合芽孢桿菌的指標(biāo)。C、25176。C、45176。C、65176。VP試驗(yàn)取葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基，接種37176。C培養(yǎng)兩天；取出以上試管，每管分別加入甲基紅2滴（向另一半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入甲基紅2d)，震蕩，若培養(yǎng)液呈紅色，記為陽性（+）反應(yīng)，若不呈紅色，記為陰性（）。C恒溫箱中培養(yǎng)24h。硝酸鹽還原試驗(yàn)被檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，置于35176。運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)使用半固體營養(yǎng)瓊脂試管，沿原穿刺線拔出接種針。37176。淀粉水解實(shí)驗(yàn)用1824h的純培養(yǎng)物，涂布接種與淀粉瓊脂平板（一個(gè)平板可分區(qū)劃“+”字接種），于37℃培養(yǎng)2448h。%溶菌酶實(shí)驗(yàn)將菌種接種于液體培養(yǎng)基（含杜氏小管）中，37℃培養(yǎng)24h；加入適量H2O2，震蕩，觀察杜氏小管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，若有則表明菌體產(chǎn)生了H2O2酶。 根據(jù)從伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)芽孢桿菌屬中檢索到的芽孢桿菌的生理生化特點(diǎn)，選擇能從土壤中分離到的芽孢桿菌種為標(biāo)準(zhǔn)菌種，其生理生化指標(biāo)如下表：通過對(duì)目的軍中國進(jìn)行多項(xiàng)生理生化實(shí)驗(yàn)，對(duì)比伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從而鑒定出目的菌的種別； 結(jié)果與分析六、討論七、參考文獻(xiàn)。觀察如菌落四周和下面有不透明區(qū)域出現(xiàn)，則表示卵磷脂分解生成脂肪，說明有卵磷脂酶。立即檢視結(jié)果，陽性（淀粉被分解）為瓊脂培養(yǎng)基呈藍(lán)色、菌落或菌苔周圍出現(xiàn)無色透明環(huán)。酪氨酸水解試驗(yàn)將營養(yǎng)瓊脂融化，冷卻至溫?zé)?，與L酪酸銨混勻，分別將菌種點(diǎn)接在平板上，37176。C溫箱中培養(yǎng)24h；觀察是否產(chǎn)生樹根狀生長，若有，則菌株有鞭毛，若直立生長，則菌株無鞭毛。明膠液化試驗(yàn)穿刺接種，深度至明膠層2/3處，于37176。耐鹽性試驗(yàn)將分離獲得的細(xì)菌分別接種在NaCl濃度為2%，5%，7%，10%，的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，置于37176。C培養(yǎng)兩天；取出試管，在培養(yǎng)基中加入乙醚12ml，經(jīng)充分震蕩使吲哚萃取至乙醚中，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液上面，此時(shí)沿管壁緩慢加入510滴吲哚試劑，如有吲哚存在，乙醚層呈現(xiàn)玫瑰紅色，為吲哚試驗(yàn)陽性（+），否則為陰性（）。C恒溫箱中保溫1530min后，若培養(yǎng)液呈現(xiàn)紅色，記為陽性（+）反應(yīng)，
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