【正文】 3日細胞生物學實驗指導目錄實驗一 細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察及大小測定…………………………………1實驗二 微分干涉差顯微鏡的使用…………………………………………2實驗三 口腔上皮細胞的熒光觀察…………………………………………4實驗四 葉綠體的提取………………………………………………………5實驗五 植物材料中DNA的提取……………………………………………6實驗六 細胞膜的滲透性……………………………………………………8實驗七 光鏡下植物細胞骨架的制片技術(shù)及觀察…………………………10實驗八 線粒體和液泡系的超活染色與觀察 …………………………… 11實驗九 DNA的細胞化學反應——Feulgen反應………………………… 13實驗十 RNA的細胞化學反應——Unna 反應 ……………………………15實驗十一 小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動的觀察……………………………17實驗十二 聯(lián)會復合體的染色與觀察…………………………………………18實驗十三 去壁低滲法制備植物染色體標本…………………………………19實驗十四 細胞凋亡……………………………………………………………22實驗十五 透射及掃描電鏡演示實驗…………………………………………23實驗一 細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察及大小測定一、實驗目的：觀察幾種細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)掌屋用測微尺測定細胞大小的原理和方法二、實驗原理：測微尺分物鏡測微尺（簡稱物微尺或臺微尺）和目鏡測微尺（簡稱目微尺），兩者配合使用，可以測量細胞大小。前 言本實驗指導是在龔寧所編《細胞生物學實驗指導》（2003年2月）的基礎上修訂而成，此次修訂是根據(jù)實驗內(nèi)容的變化進行的，刪除了已經(jīng)納入《生物技術(shù)大實驗》的內(nèi)容，增設了微分干涉差顯微鏡的使用、電子顯微鏡演示、細胞凋亡等內(nèi)容。目微尺是一個可以放在目鏡內(nèi)的特制玻璃園片，園片中央刻有一條直線，此線分為若干格。將物微尺放在顯微鏡的載物臺上，小心轉(zhuǎn)動目鏡測微尺，移動物微尺使兩尺平行，起點線重合，然后找出另一處兩尺刻度重合處，記錄起點線到重合線之間的各尺的刻度數(shù)（格數(shù)），按下式計算，在該放大系統(tǒng)下目微尺每格所代表的實際長度： 物微尺格數(shù)目微尺每格所代表的實際長度= ╳ 10μm 目微尺格數(shù) 例如：目微尺是100格，其對應的物微尺是80格，則目微尺每格所代表的實際長度為80/100╳10=8μm。2）、用消毒牙簽的一端，在漱凈的口腔側(cè)壁上輕輕地刮幾下。取洋蔥內(nèi)表皮，同上法制作臨時裝片（將生理鹽水換成蒸餾水），用顯微鏡觀察，可見長條狀的洋蔥內(nèi)表皮細胞取葫蘆蘚葉片，制作臨時裝片（制作方法同洋蔥內(nèi)表皮），用顯微鏡觀察，可見內(nèi)含許多葉綠體的葉細胞，細胞呈什么形狀？制作雞血涂片，用顯微鏡觀察紅細胞取甜椒一片，用刀片刮去果肉，將表皮制成臨時裝片，用顯微鏡觀察表皮細胞，能看見胞間連絲嗎？（二）、細胞大小的測定：將目微尺放于目鏡內(nèi)將物微尺放在顯微鏡的載物臺上小心轉(zhuǎn)動目鏡測微尺，移動物微尺使兩尺平行，起點線重合，然后找出另一處兩尺刻度重合處記錄起點線到重合線之間的各尺的刻度數(shù)（格數(shù)），按下式計算，在該放大系統(tǒng)下目微尺每格所代表的實際長度： 物微尺格數(shù)目微尺每格所代表的實際長度= ╳ 10μm 目微尺格數(shù) 將制作的各種細胞臨時裝片置于載物臺上，測定細胞的大?。òㄩL徑和短徑）。實驗二 微分干涉差顯微鏡的使用——用微分干涉差顯微鏡觀察口腔上皮細胞一、實驗目的：二、實驗原理：微分干涉差顯微鏡是根據(jù)通過物體內(nèi)只分開1um或者更短距離的2束相干的光之間的相位差設計的，使標本內(nèi)鄰近2點的光程差被顯微鏡中特殊的光學系統(tǒng)轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹ü鈴姸龋┑淖兓?。在起偏鏡和聚光鏡之間放置第一塊渥氏棱鏡，在物鏡和檢偏鏡之間放置第二塊渥氏棱鏡，這就是微分干涉差顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)。三、實驗用品：微分干涉差顯微鏡 載玻片 蓋玻片 鑷子 消毒牙簽 燒杯 吸管 %生理鹽水 吸水紙。，將它的一邊先接觸載玻片上的生理鹽水滴，然后，輕輕地蓋在水滴上。調(diào)焦距和起偏鏡使其與檢偏鏡正交，產(chǎn)生最好的圖像，并觀察細胞結(jié)構(gòu)。初步掌握熒光顯微鏡的基本調(diào)節(jié)步驟。它的激發(fā)光波長約350nm，發(fā)射光波長約461nm。而羅丹明123具有正電荷，由于電性相吸，特異地標記上線粒體。4)；含10ug/ml 羅丹明 123的PBS(pH7 熒光觀察細胞核：先關(guān)閉激發(fā)光，將滴加Ho33342染液的裝片至于透射光下，找到樣品焦面，再關(guān)閉透射光，置于激發(fā)光為紫外光（UV）、發(fā)射蘭色熒光的濾片組合塊下觀察細胞核。六、注意事項：，否則背景太深，影響觀察，包括制片、熒光觀察和探針保存，操作時防止污染皮膚和環(huán)境七、作業(yè)：根據(jù)觀察實驗結(jié)果，填表細胞核線粒體熒光探針激發(fā)光發(fā)射光形態(tài)（畫出）實驗四、葉綠體的提取一、實驗目的：通過本實驗掌握分離葉綠體的技術(shù)，并了解制備細胞器的一般程序。六、注意事項：離心前要先平衡研磨時可先加部分介質(zhì)，待研磨成勻漿后再加入剩余介質(zhì)，介質(zhì)過多不便研磨六、作業(yè):繪制所觀察到的葉綠體實驗五、植物材料中DNA的提取一、實驗目的: 通過本實驗了解用氯仿異戊醇提取DNA的方法及原理二、實驗原理：細胞經(jīng)過破碎后，加入適當介質(zhì)配合離心以脫除各種雜質(zhì)，再用乙醇沉淀，DNA便以纖維狀沉淀析出。 將核酸沉淀物在燒杯壁上輕輕擠壓以除去乙醇，然后溶解在適量的01加入RNA酶溶液使其最后作用的濃度為5075ug/ml，并在37℃保溫30分鐘，以除去RNA。六、注意事項： 水浴保溫時，三角瓶不要加蓋，否則加熱過程中可能將瓶蓋沖出用玻棒攪動時宜慢不宜快，否則DNA會斷裂七、作業(yè)：實驗中加入氯仿異戊醇起什么作用？實驗中加入高氯酸鈉溶液又起什么作用？實驗六、細胞膜的滲透性 一、 實驗目的：了解細胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進入細胞的速度。17mol/L氯化鈉 012mol/L草酸銨 032mol/L乙醇 080g，檸檬酸0 紅細胞的滲透性（1）取試管一支，加入017mol/L硝酸鈉 032mol/L甘油 0（列表，按溶血快慢排列）編號溶液種類是否溶血溶血所需時間結(jié)果分析12345678910實驗七、光鏡下植物細胞骨架 的制片技術(shù)及觀察一、實驗目的：初步掌握在光鏡下植物細胞骨架標本的制作方法。5mM氯化鎂，1mM EGTA[乙二醇雙（a氨基乙苯）醚四乙酸]，05%三氯醋酸定溶，裝入滴瓶備用。5的磷酸緩沖液中。用6mM，PH6材料染色后用蒸餾水沖洗。 學習一些細胞器的超活染色技術(shù)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子的，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。三、 實驗用品： 器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、10ml量筒、吸管、牙簽、吸水紙（或衛(wèi)生紙）等。25g氯化鈣 03） 1%、1/5000詹納斯綠B溶液（裝入棕色滴瓶） 稱取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加熱（3040℃），使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)），呈藍綠色；而線粒體周圍的細胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基（即無色狀態(tài)）?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|(zhì)中，分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。仔細觀察細胞質(zhì)中線粒體的形態(tài)與分布。3） 吸去染液，滴一滴Ringer液，蓋上蓋玻片，并用鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察。洋蔥表皮細胞液泡系的活體染色與觀察：1） 撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2） 置于加有一滴1/3000的中性紅染液的載玻片中，染色5—10分鐘3） 用吸水紙吸去染液，換上Ringer液，蓋上蓋玻片4） 顯微鏡下觀察，可見被染成磚紅色的中央大液泡 六、注意事項： 在對口腔上皮細胞進行染色時不可使染液干燥，可適當補加染液。在脫氧核糖的一端形成游離的醛基，醛基與Schiff試劑（脫色堿性品紅）結(jié)合，形成紫紅色化合物。5ml，加蒸餾水至1000ml即成），繼續(xù)冷卻至25℃時加入1g偏亞硫酸鉀（KHSO3）或偏亞硫酸鈉（NaHSO3），將瓶塞蓋嚴，置于暗處24小時，溶液應為無色，可保持在14℃冰箱中備用。此液要現(xiàn)配現(xiàn)用。51cm的根尖，在carnoy固定液中固定224小時。水解：用1N的冷HCl過洗材料一次，然后放入溫度穩(wěn)定在60℃的1N HCl中，水解1014分鐘，取出材料后再用1N冷HCl過一次。鏡檢。 材料固定后用5%三氯醋酸于90℃處理15min，用蒸餾水沖洗，以后步驟同實驗組。未經(jīng)水解的對照切片在schiff試劑中最多不要超過1 h ( h即可)，時間過長，試劑本身的酸性也會使DNA水解，從而出現(xiàn)假的正反應。此外，Schiff試劑的配制方法也可影響DNA的染色反