05版藥典微生物限度檢查法操作要點-wenkub
2023-04-19 23:00:36 本頁面
【正文】 用該驗證的方法檢驗。 1．常規(guī)法就是取1:10的供試液1ml和50~100個試驗菌株加入到1個平皿中，立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，培養(yǎng)，計算各菌株的回收率。然后，吸出胞子懸液(用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管)至無菌試管內(nèi)，％無菌氯化鈉溶液制成每lml含孢子數(shù)50～l00cfu的孢子懸液。細(xì)菌計數(shù)驗證所用的菌株：大腸埃希菌[CMCC（B）44102]：代表革蘭陰性菌；金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]：代表革蘭陽性球菌； 枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]：代表革蘭陽性桿菌；霉菌計數(shù)驗證所用的菌株：白色念珠菌[CMCC（F）98001]：代表酵母菌；黑曲霉[CMCC（F）98003：代表霉菌；由于每個菌株代表不同類型的菌，所以只有這五個菌株的回收率均達(dá)到要求，才表明樣品中污染的各種類型的菌都可能檢出來，否則，所得的結(jié)果是不能真實地反映樣品的污染情況的。由于以前版本的藥典沒有要求對檢驗方法進(jìn)行必要的驗證，所以大家都覺得不好理解、不好難操作。為了更好執(zhí)行05版藥典，現(xiàn)根據(jù)我的理解，對藥典上的各種檢驗方法在驗證時的操作要點與大家作個探討。菌液的制備：接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48小時。二、方法的驗證所有驗證方法的操作均應(yīng)在陽性接種間。常規(guī)法做一個樣品的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)驗證試驗，需要多少個平皿呢？試驗組：52=10個，即每個菌株做2ml共需10個；菌液組：52=10個，即每個菌株的加菌量，每株2個皿。當(dāng)白色念珠菌和黑曲霉2個菌株的回收率均達(dá)到70%以上時，霉菌計數(shù)用該驗證的方法檢驗。具體操作：（以1ml分至5個皿為例）就是取1:10的供試液1ml均勻分注到5個平皿中，每株試驗菌平行制備2ml的平皿數(shù)，然后加入相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)，計算各菌株的回收率。然后用此稀釋液進(jìn)行檢驗。每種菌株至少制備一張濾膜。菌種 對試驗菌種的要求同細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證。當(dāng)采用薄膜過濾法時，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。結(jié)果判斷 陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。1．平皿法常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法都是平皿法。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細(xì)菌，則應(yīng)分別點汁霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。 (1)當(dāng)僅有1個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。 (4)如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時，以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。使用時，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖
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