05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)-wenkub
2023-04-19 23:00:36 本頁(yè)面
【正文】 用該驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)。 1．常規(guī)法就是取1:10的供試液1ml和50~100個(gè)試驗(yàn)菌株加入到1個(gè)平皿中，立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。然后，吸出胞子懸液(用管口帶有薄的無(wú)菌棉花或紗布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管)至無(wú)菌試管內(nèi)，％無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含孢子數(shù)50～l00cfu的孢子懸液。細(xì)菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的菌株：大腸埃希菌[CMCC（B）44102]：代表革蘭陰性菌；金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]：代表革蘭陽(yáng)性球菌； 枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]：代表革蘭陽(yáng)性桿菌；霉菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的菌株：白色念珠菌[CMCC（F）98001]：代表酵母菌；黑曲霉[CMCC（F）98003：代表霉菌；由于每個(gè)菌株代表不同類(lèi)型的菌，所以只有這五個(gè)菌株的回收率均達(dá)到要求，才表明樣品中污染的各種類(lèi)型的菌都可能檢出來(lái)，否則，所得的結(jié)果是不能真實(shí)地反映樣品的污染情況的。由于以前版本的藥典沒(méi)有要求對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行必要的驗(yàn)證，所以大家都覺(jué)得不好理解、不好難操作。為了更好執(zhí)行05版藥典，現(xiàn)根據(jù)我的理解，對(duì)藥典上的各種檢驗(yàn)方法在驗(yàn)證時(shí)的操作要點(diǎn)與大家作個(gè)探討。菌液的制備：接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48小時(shí)。二、方法的驗(yàn)證所有驗(yàn)證方法的操作均應(yīng)在陽(yáng)性接種間。常規(guī)法做一個(gè)樣品的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)，需要多少個(gè)平皿呢？試驗(yàn)組：52=10個(gè)，即每個(gè)菌株做2ml共需10個(gè)；菌液組：52=10個(gè)，即每個(gè)菌株的加菌量，每株2個(gè)皿。當(dāng)白色念珠菌和黑曲霉2個(gè)菌株的回收率均達(dá)到70%以上時(shí)，霉菌計(jì)數(shù)用該驗(yàn)證的方法檢驗(yàn)。具體操作：（以1ml分至5個(gè)皿為例）就是取1:10的供試液1ml均勻分注到5個(gè)平皿中，每株試驗(yàn)菌平行制備2ml的平皿數(shù)，然后加入相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。然后用此稀釋液進(jìn)行檢驗(yàn)。每種菌株至少制備一張濾膜。菌種 對(duì)試驗(yàn)菌種的要求同細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。當(dāng)采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。結(jié)果判斷 陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌。1．平皿法常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法都是平皿法。每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。在特殊情況下，若營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)汁霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。 (1)當(dāng)僅有1個(gè)稀釋級(jí)的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。 (4)如各稀釋級(jí)的平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖
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