實驗四pcr及電泳技術(shù)(已修改)
2025-05-24 23:45 本頁面
【正文】 實驗 4 PCR及 電泳技術(shù) 1. PCR的基本原理 ? PCR基本原理 類似于 DNA的體內(nèi)復(fù)制。 在模板 DNA、引物和 4種脫氧核苷酸存在條件下依賴于 DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。 ? PCR的基本步聚 變性 (Denaturation) ：通過加熱使 DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈解離形成單鏈 DNA 。 退火 (Annealing) ：當溫度突然降低時，反應(yīng)體系中引物和其互補的 DNA模板在局部形成雜交鏈。 延伸 (Extension )：在 DNA聚合酶和 4種脫氧核苷酸 (dATP、 dCTP、 dGTP、dTTP)及 Mg2+存在條件下， 5’→3’ 的聚合酶催化以引物為起始點的 DNA鏈延伸反應(yīng)。 這種 熱變性 復(fù)性 延伸 的過程就是一個 PCR循環(huán)， PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。 PCR Cycle Step 1 Denaturation Template DNA by Heat (95℃ ) Target Sequence Target Sequence PCR原理示意圖 ① 模板 DNA的變性：模板 DNA經(jīng)加熱至 93℃ 左右一定時間后，使模板 DNA雙鏈或經(jīng) PCR擴增形成的雙鏈 DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準備； 5’ 3’ 3’ 5’ ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 加熱 94℃ 引物酶 ② 模板 DNA與引物的退火 (復(fù)性 )：模板 DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃ 左右，引物與模板 DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合； PCR Cycle Step 2 –Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequences 引物酶 3’ 5’ 3’ 5’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 引物 ATCG
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1