生化分析實(shí)驗(yàn)-圓盤電泳(已修改)
2025-05-28 16:32 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)六 聚丙烯酰胺凝膠 圓盤電泳分離蛋白質(zhì) 1. 簡(jiǎn)述聚丙烯酰胺凝膠聚合的原理，如何調(diào)節(jié)凝膠的孔徑 ? 2. 為什么樣品會(huì)在濃縮膠中被壓縮成層？ 3. 為什么在樣品中加含有少許溴酚藍(lán)的 40％蔗糖溶液？蔗糖及溴酚藍(lán)各有何用途？ 4. 上下兩槽電泳緩沖液電泳后，能否混合存放？為什么？ 5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的體會(huì)，總結(jié)如何做好聚丙烯酰胺垂直板電泳？哪些是關(guān)鍵步驟？ 6. 如何除去凝膠中過(guò)量的 AP？未反應(yīng)的單體如何除去？ 一、目的要求 聚丙烯酰胺凝膠 圓盤電泳原理和技術(shù) 圓盤電泳分離蛋白質(zhì)技術(shù) 二 、 原理 聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳和垂直平板電泳具有相同的原理 。 不連續(xù)： 凝膠孔徑不連續(xù)性；緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性；電位梯度的不連續(xù)性： 三種效應(yīng)： 樣品濃縮效應(yīng)；分子篩效應(yīng)；電荷效應(yīng) 聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳（左）和圓盤電泳（右）示意圖 它們各有什么不同，各自的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ 垂直平板： 多個(gè)樣品在同一塊凝膠上，電泳條件一致－－便于利用各種鑒定 方法，直接比較各種樣品區(qū)帶，保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠 可以進(jìn)行雙向電泳 電泳時(shí)熱量容易消散，凝膠結(jié)果便于照相和易于制成干膠 圓盤電泳： 缺點(diǎn)是由于聚合效應(yīng)，凝膠的長(zhǎng)度和直徑有細(xì)微差別，即使同一 樣品在兩個(gè)凝膠柱上以同樣的條件電泳，其結(jié)果也會(huì)不同 但是研究工作中還會(huì)用到圓盤電泳，例如 測(cè)定放射性標(biāo)記的樣品 測(cè)定蛋白質(zhì)的生物活性；測(cè)定蛋白質(zhì)分離的最適 pH，凝膠濃度； 雙向電泳中第一
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