總膽汁酸檢測(cè)ppt課件(已修改)
2025-05-11 02:27 本頁(yè)面
【正文】 血清總膽汁酸的檢測(cè) 酶比色法測(cè)定總膽汁酸 循環(huán)法測(cè)定膽汁酸 酶比色法測(cè)定總膽汁酸 【 原理 】 在 3α 羥類(lèi)固醇脫氫酶 (3α HSD)作用下，各種膽汁酸 C3上 α 位的烴基 (3α OH)脫氫形成碳基 (3α=O) 。同時(shí) NAD還原成 NADH。隨后， NADH上的氫由黃遞酶催化轉(zhuǎn)移給碘化硝基四氮唑(INT)，產(chǎn)生紅色的甲臢。甲臢的產(chǎn)量與總膽汁酸 (TBA)成正比，在 500nm波長(zhǎng)比色。反應(yīng)式如下： 3α 羥基膽酸 + NAD+ 3氧代膽酸 + NADH + H+ NADH + H+ + INT NAD+ + 甲臢 (紅色 ) 酶比色法測(cè)定總膽汁酸 【 試劑 】 1．試劑 Ⅰ 黃遞酶 1 000U， NAD+ 1 mmol，碘化硝基四氮唑 (INT) mmol, 丙酮酸 50 mmol溶于 pH 的磷酸緩沖液 1 L中，加表面活性劑適量。 2．試劑 Ⅱ 3α 羥類(lèi)固醇脫氫酶 (3α HSD) 2 000U溶于 pH 沖液中 1 L中。 3．終止液 1 mol/L HCl。 4．標(biāo)準(zhǔn)液 (50μmol/L) mg 甘氨膽酸溶于 1 L經(jīng)透析的混合血清中。 酶比色法測(cè)定總膽汁酸 【 操作步驟 】 1．手工法按表 加入物 (ml) 測(cè)定 測(cè)定對(duì)照 標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照 血清 a 標(biāo)準(zhǔn)液 b 試劑 Ⅰ c 試劑 Ⅱ d 去離子水 e 混勻， 37℃ 水浴 10min，加終止液 ，搖勻，500nm波長(zhǎng)，以水校零，讀取各管 A值。 2．自動(dòng)分析法 一般無(wú)法做對(duì)照管，而是設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法，讀取前后兩個(gè)吸光度 A1和 A2。具體按說(shuō)明書(shū)要求。 酶比色法測(cè)定總膽汁酸 【 計(jì)算 】 手工法： TBA(μmol/L) =A 測(cè)定 A測(cè)定
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