木瓜蛋白酶提取實(shí)驗(yàn)方案(已修改)
2025-05-07 01:43 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題目：木瓜蛋白酶的提取,純化分離及其生物學(xué)研究一、 實(shí)驗(yàn)原理：木瓜蛋白酶（papain）又稱木瓜酶，廣泛存在于番木瓜的根、莖、葉和果實(shí)，未成熟果實(shí)的乳汁中含量最豐富。是一種含疏基（SH）肽鏈的內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有較廣泛的特異性，對(duì)動(dòng)植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強(qiáng)的水解能力；同時(shí)還具有合成的功能，能把蛋白水解物合成為類蛋白質(zhì)。工業(yè)用的木瓜蛋白酶一般都是未經(jīng)純化的多酶體系?，F(xiàn)已知經(jīng)木瓜乳汁干燥而得的木瓜蛋白酶至少含有四種主要酶類：木瓜蛋白酶（papain）、木瓜凝乳蛋白酶（chymopapain）、木瓜蛋白酶Ω（papaya proteinaseΩ）、木瓜凝乳蛋白酶M（chymopapain M），其中木瓜凝乳蛋白酶的含量最多，占可溶性蛋白的45%。木瓜蛋白酶易溶于水和甘油，水溶液為無(wú)色或淡黃色，有時(shí)呈乳白色；幾乎不溶于有機(jī)溶劑。（一般3～），在中性或偏酸性時(shí)亦有作用；最適溫度為55～60℃（一般10～85℃皆可），耐熱性強(qiáng)，在90℃時(shí)也不會(huì)完全失活；受氧化劑抑制，還原性物質(zhì)激活。本實(shí)驗(yàn)主要采取有機(jī)溶劑沉淀法結(jié)合硫酸銨分級(jí)沉淀法來(lái)提取番木瓜中的木瓜蛋白酶。有機(jī)溶劑沉淀法：有機(jī)溶劑能降低溶液的電解常數(shù)，從而增加蛋白質(zhì)分子上不同電荷的引力，導(dǎo)溶解度的降低，另外，有機(jī)溶劑與水的作用，能破壞蛋白質(zhì)的水化膜，故蛋白質(zhì)在一定濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度差異而分離的方法。有機(jī)溶劑分段沉淀法它常用于蛋白質(zhì)或酶的提純。使用的有機(jī)溶劑多為乙醇和丙酮。高濃度有機(jī)溶劑易引起蛋白質(zhì)變性失活，操作必須在低溫下進(jìn)行，并在加入有機(jī)溶劑時(shí)注意攪拌均勻以避免局部濃度過(guò)大。硫酸銨分級(jí)沉淀法：硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質(zhì)。高濃度的鹽離子在蛋白質(zhì)溶液中可與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)水分子，從而破壞蛋白質(zhì)表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來(lái)。各種蛋白質(zhì)的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來(lái)沉淀不同的蛋白質(zhì)。這種方法稱之為鹽析。鹽析時(shí)溶
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1