木瓜蛋白酶提取實驗方案(存儲版)
【正文】 混勻，靜置5min后在A595下測吸光度，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算酶含量。11—測定總體積。60%乙醇透析膜處理40%硫酸銨45%飽和硫酸銨60%乙醇酶液1酶液3酶液4酶液2酶液5酶液6酶液7番木瓜透析膜處理：酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液和酶液處理酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液的制備：。 放入大體積的2%(m/v)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH )中將透析袋煮沸10分鐘。三氯乙酸溶液：，加水溶解并稀釋至50mL。500ml的2%(m/v)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH )溶液：。 ，乙二胺四乙酸二鈉固體；氫氧化鈉固體，酪蛋白固體，半胱氨酸固體，氯化鈉固體，三氯乙酸固體，硫酸銨粉末，乙酸鈉固體，和冰乙酸溶液，EDTA。硫酸銨因其溶解度大，溫度系數(shù)小和不易使蛋白質(zhì)變性而應(yīng)用最廣。有機溶劑分段沉淀法它常用于蛋白質(zhì)或酶的提純。實驗設(shè)計題目：木瓜蛋白酶的提取,純化分離及其生物學(xué)研究一、 實驗原理：木瓜蛋白酶（papain）又稱木瓜酶，廣泛存在于番木瓜的根、莖、葉和果實，未成熟果實的乳汁中含量最豐富。有機溶劑沉淀法：有機溶劑能降低溶液的電解常數(shù)，從而增加蛋白質(zhì)分子上不同電荷的引力，導(dǎo)溶解度的降低，另外，有機溶劑與水的作用，能破壞蛋白質(zhì)的水化膜，故蛋白質(zhì)在一定濃度的有機溶劑中的溶解度差異而分離的方法。鹽析時溶液PH在木瓜蛋白酶等電點時（PI=）則效果最好，鹽濃度通常用飽和度來表示。飽和硫酸銨溶解曲線：二、實驗材料與儀器：材料：未成熟的番木瓜，無水乙醇。酶保護(hù)劑：，溶解半胱氨酸，定容至250ml，轉(zhuǎn)入棕色瓶中。用前配置。酶液+保護(hù)劑（ml）硫酸銨粉末（至終濃度20%）（g）硫酸銨粉末（至終濃度的40%）（g）酶液+保護(hù)劑（ml）冷無水乙醇（65%）（ml）酶原液370+10
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