木瓜蛋白酶提取實驗方案(完整版)
【正文】 液內。③收集10ml乳汁加入190ml蒸餾水水，勻速輕柔攪拌1h，得漿液。 。考馬斯亮藍G250染液（%）：，溶于50mL 95%乙醇中（95%）再加入86% 磷酸100mL，倒入1000mL容量瓶加蒸餾水定容至1000mL。酪蛋白經蛋白酶作用后，降解成相對分子質量較小的肽和氨基酸，在反應混合物中加入三氯乙酸溶液，相對分子質量較大的蛋白質和肽就沉淀下來，相對分子質量較小的肽和氨基酸仍留在溶液中，溶解于三氯乙酸溶液中的肽的數量正比于酶的數量和反應時間。硫酸銨分級沉淀法：硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質?，F已知經木瓜乳汁干燥而得的木瓜蛋白酶至少含有四種主要酶類：木瓜蛋白酶（papain）、木瓜凝乳蛋白酶（chymopapain）、木瓜蛋白酶Ω（papaya proteinaseΩ）、木瓜凝乳蛋白酶M（chymopapain M），其中木瓜凝乳蛋白酶的含量最多，占可溶性蛋白的45%。木瓜蛋白酶易溶于水和甘油，水溶液為無色或淡黃色，有時呈乳白色；幾乎不溶于有機溶劑。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。在280nm波長下測定溶液吸光度的增加，就可計算酶的活力。靜置1h后，取棕色試劑瓶用乙醇清洗干凈用濾紙過濾溶液后封存。加蒸餾水稀釋到100mL。④漿液用8層紗布進行過濾,將所得液分裝到離心管中，用離心機在3500r/min的條件下，離心15min。從此時起取用透析袋是必須戴手套，在透析袋內裝滿水然后排出，將之清洗干凈。 ?酪氨酸標準液：另取酪氨酸對照溶液，以蒸餾水為空白，在275nm的波長處測定吸光度An。：取8支15 mL試管，按下表加入試劑管號12345678蛋白質標準溶液（ml）0蒸餾水（ml）0考馬斯亮藍
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