木瓜蛋白酶提取實驗方案-文庫吧
2025-04-10 01:43 本頁面
【正文】 液PH在木瓜蛋白酶等電點時（PI=）則效果最好，鹽濃度通常用飽和度來表示。硫酸銨因其溶解度大，溫度系數(shù)小和不易使蛋白質變性而應用最廣。木瓜蛋白酶活力測定：蛋白酶在一定條件下不僅能夠水解蛋白質中的肽鍵，也能夠水解酰胺鍵和酯鍵，因此可用蛋白質或人工合成的酰胺及酯類化合物作為底物來測定蛋白酶的活力。本實驗選用酪蛋白為底物，測定微生物蛋白酶水解肽鍵的活力。酪蛋白經(jīng)蛋白酶作用后，降解成相對分子質量較小的肽和氨基酸，在反應混合物中加入三氯乙酸溶液，相對分子質量較大的蛋白質和肽就沉淀下來，相對分子質量較小的肽和氨基酸仍留在溶液中，溶解于三氯乙酸溶液中的肽的數(shù)量正比于酶的數(shù)量和反應時間。在280nm波長下測定溶液吸光度的增加，就可計算酶的活力。酶活力單位定義：在規(guī)定條件下，1min內(nèi)酶水解酪蛋白釋放出相當于1ug/ml酪氨酸在275nm波長處的吸收度為1個活力單位。，在275nm波長處測定空白溶液，待測定液，對照品溶液的吸光度。飽和硫酸銨溶解曲線：二、實驗材料與儀器：材料：未成熟的番木瓜，無水乙醇。 ，乙二胺四乙酸二鈉固體；氫氧化鈉固體，酪蛋白固體，半胱氨酸固體，氯化鈉固體，三氯乙酸固體，硫酸銨粉末，乙酸鈉固體，和冰乙酸溶液，EDTA。儀器：高速組織搗碎機，水浴箱，精確pH計，紫外分光光度計，高速冷凍離心機，精密電子天平，低溫冰箱。三、技術路線四、實驗步驟：所需試劑的配制以及考馬斯亮藍G250法測蛋白含量的預實驗，確保試驗方法的可行性?？捡R斯亮藍G250染液（%）：，溶于50mL 95%乙醇中（95%）再加入86% 磷酸100mL，倒入1000mL容量瓶加蒸餾水定容至1000mL。靜置1h后，取棕色試劑瓶用乙醇清洗干凈用濾紙過濾溶液后封存。標準蛋白質溶液（）:。現(xiàn)配現(xiàn)用。酶保護劑：，溶解半胱氨酸，定容至250ml，轉入棕色瓶中。500ml的2%(m/v)碳酸氫鈉和 1mmol/L
公司管理相關推薦
鄂ICP備17016276號-1