木瓜蛋白酶提取實驗方案-免費閱讀
【正文】 用分光光度計比色測定吸光值A(chǔ)595nm。酶活力單位定義為在測定條件下,每1 min生成1μg/mL酪氨酸所需的酶量。④系好透析袋的一端，從另一端注入酶液5，將透析袋放入蒸餾水中，在搖床上震蕩，時時換蒸餾水。⑤收集上清液至一潔凈的試管中，既得木瓜蛋白酶原液，20℃存取10ml酶原液（編號為酶液1）。用前配置。標準蛋白質(zhì)溶液（）:。酶活力單位定義：在規(guī)定條件下，1min內(nèi)酶水解酪蛋白釋放出相當于1ug/ml酪氨酸在275nm波長處的吸收度為1個活力單位。各種蛋白質(zhì)的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉淀不同的蛋白質(zhì)。（一般3～），在中性或偏酸性時亦有作用；最適溫度為55～60℃（一般10～85℃皆可），耐熱性強，在90℃時也不會完全失活；受氧化劑抑制，還原性物質(zhì)激活。工業(yè)用的木瓜蛋白酶一般都是未經(jīng)純化的多酶體系。高濃度有機溶劑易引起蛋白質(zhì)變性失活，操作必須在低溫下進行，并在加入有機溶劑時注意攪拌均勻以避免局部濃度過大。本實驗選用酪蛋白為底物，測定微生物蛋白酶水解肽鍵的活力。三、技術(shù)路線四、實驗步驟：所需試劑的配制以及考馬斯亮藍G250法測蛋白含量的預實驗，確保試驗方法的可行性。酪蛋白溶液：（），置沸水浴中煮30min，時時攪拌，冷卻至室溫。②將木瓜放于一個大燒杯中，使木瓜乳汁流入大燒杯中。放在 1mmol/L EDTA(pH )中將之煮沸10分鐘。操作 ?待測液：，分別置于2支10mL帶塞試管中，于50度水浴預熱5分鐘，準確加入50度預熱的酪蛋白溶液5mL，立即振搖，置50度水浴中，精確反應10min后，振搖，于50度水浴中放置40min，用干燥濾紙過濾，濾液在2h內(nèi)采用分光光度法以水為空白，在275nm的波長處測定吸光度A。1000—毫克與克的轉(zhuǎn)換倍數(shù)。 用倍比稀釋的方法找出酶液測吸光度的最適倍數(shù)，使再重新取樣測量，取1ml酶液于試管中，再加4ml考馬斯亮藍溶液，
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