【正文】 微生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 2009．7一、《微生物學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?．通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證理論知識(shí)，并掌握比較全面的微生物學(xué)基本操作技術(shù)。2．在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中建立無(wú)菌觀念，掌握無(wú)菌操作技術(shù)。3．通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握臨床常見(jiàn)病原微生物的生物學(xué)性狀、分離培養(yǎng)和鑒定的方法、各種臨床標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法。4．在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中逐漸培養(yǎng)獨(dú)立思考問(wèn)題、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。二、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則及實(shí)驗(yàn)室意外處理方法1．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則由于微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是以病原微生物為研究對(duì)象，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中任何疏忽大意都有可能引起實(shí)驗(yàn)人員的自身感染或?qū)嶒?yàn)室和周圍環(huán)境的污染。因此，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)規(guī)則，建立無(wú)菌觀念，嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)意外情況，并確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。（1）試驗(yàn)前須預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方法和注意事?xiàng)，做到心中有數(shù)，避免發(fā)生錯(cuò)誤，提高實(shí)驗(yàn)效率。（2）進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服，必要時(shí)還須戴口罩、帽子和手套，并做好實(shí)驗(yàn)前的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作。（3）非必需物品禁止帶入實(shí)驗(yàn)室，帶入實(shí)驗(yàn)室的物品應(yīng)遠(yuǎn)離操作區(qū)，放在指定的區(qū)域。（4）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不準(zhǔn)大聲喧嘩、嬉戲，應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室的安靜、整潔和有序。不準(zhǔn)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吸煙、飲水和進(jìn)食，盡量避免用手觸摸頭、面部，防止感染，盡量減少室內(nèi)活動(dòng)，以免引起風(fēng)動(dòng)。（5）實(shí)驗(yàn)中注意節(jié)約試劑，愛(ài)護(hù)儀器，避免有菌材料的污染，如有傳染性材料污染桌面、地面、手、衣服或發(fā)生其他意外情況，應(yīng)立即報(bào)告老師及時(shí)作適當(dāng)處理。（6）用過(guò)的污染物品應(yīng)放到指定的地點(diǎn)，經(jīng)專人消毒滅菌之后再進(jìn)行清洗，切勿亂丟或沖入水池中。禁止將本實(shí)驗(yàn)室的物品帶出實(shí)驗(yàn)室外。需送溫箱培養(yǎng)的物品，應(yīng)標(biāo)記清楚后送到指定地點(diǎn)。（7）實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)將桌面整理清潔，試劑、儀器放回原處，并用浸有消毒液的抹布將操作臺(tái)擦拭干凈，打掃衛(wèi)生，關(guān)好水、電、門(mén)窗。（8）離室前脫下工作服，反折放在指定的地方；雙手在2％來(lái)蘇液中浸泡5min左右，再用肥皂、清水洗凈，方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。2．實(shí)驗(yàn)室意外的緊急處理方法（1）發(fā)生皮膚破損或刺傷：首先用肥皂和水沖洗傷口，盡量擠出損傷處的血液，并用70%乙醇或其他皮膚消毒劑進(jìn)行消毒，立即進(jìn)行醫(yī)療處理。（2）化學(xué)藥品腐蝕傷：若為強(qiáng)酸，用大量清水沖洗后再以5%碳酸氫鈉溶液中和；若為強(qiáng)堿，用大量清水沖洗后再以5%醋酸或5%硼酸溶液中和；若受傷處是眼部，經(jīng)上述方法處理后，再滴入橄欖油或液體石蠟1~2滴。（3）燒傷：局部涂凡士林、5%鞣酸或2%苦味酸。（4）菌液誤入口中：立即將菌液吐入消毒容器中，再用1∶1000高錳酸鉀或3%過(guò)氧化氫漱口，根據(jù)菌種服用適當(dāng)抗生素預(yù)防感染。（5）菌液污染環(huán)境：將適量2~3%%新潔爾滅浸泡污染面半小時(shí)后除去，如手上有菌污染，也可浸泡于上述消毒液中3~5min，之后用肥皂和清水洗凈。三、生物安全防護(hù)知識(shí)簡(jiǎn)介醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作人員長(zhǎng)期接觸有潛在傳染性的血液、糞便、體液等標(biāo)本，這些標(biāo)本往往是各種細(xì)菌、病毒等病原微生物的傳播載體，無(wú)論是實(shí)驗(yàn)人員感染，還是造成實(shí)驗(yàn)室和周圍環(huán)境的污染，都將導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。因此實(shí)驗(yàn)室工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須高度重視實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)，強(qiáng)化生物安全意識(shí)，熟悉生物安全防護(hù)有關(guān)知識(shí)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。1．微生物的分類等級(jí)根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）出版的《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》，將微生物分為四個(gè)不同危險(xiǎn)度等級(jí)：危險(xiǎn)度1級(jí)是指不能引起人或動(dòng)物致病的微生物，此類微生物無(wú)或僅具有極低的個(gè)體和群體危險(xiǎn)；危險(xiǎn)度2級(jí)的病原體具有中度個(gè)體危險(xiǎn)，低度群體危險(xiǎn)，能引起人或動(dòng)物致病，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社區(qū)、家畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害，所引起的感染具有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險(xiǎn)有限；危險(xiǎn)度3級(jí)的病原體具有高度個(gè)體危險(xiǎn)，低度群體危險(xiǎn)，通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，但一般不會(huì)發(fā)生感染的播散，并且對(duì)感染具有有效的預(yù)防和治療措施；危險(xiǎn)度4級(jí)的病原體具有高度的個(gè)體危險(xiǎn)和群體危險(xiǎn)，通常能引起人或生物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對(duì)感染一般沒(méi)有有效的預(yù)防和治療措施?；谝陨蟿澐謽?biāo)準(zhǔn)，結(jié)合微生物的致病性、傳播方式、目前所具有的預(yù)防和治療措施等因素，我國(guó)衛(wèi)生部于2006年制定了《人間傳染的病原微生物名錄》，對(duì)各種病原微生物的危害程度及其相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)需要達(dá)到的生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別做了詳細(xì)分類，各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行有關(guān)實(shí)驗(yàn)均需參照此標(biāo)準(zhǔn)。2．生物安全實(shí)驗(yàn)室分級(jí)與要求由于各種病原微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)不同，因此實(shí)驗(yàn)室必須達(dá)到相應(yīng)的生物防護(hù)等級(jí)才能開(kāi)展有關(guān)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》和我國(guó)衛(wèi)生部2002年頒布的《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》，實(shí)驗(yàn)室從生物安全防護(hù)的角度共分為四級(jí)：一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL1）為實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于危險(xiǎn)度1級(jí)的微生物，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序可進(jìn)行開(kāi)放性操作，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室即屬此類。二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL2）適用于對(duì)人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物，即危險(xiǎn)度2級(jí)的病原體，該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備生物安全柜和密封的離心管，以免發(fā)生泄漏和產(chǎn)生氣溶膠。三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL3）適用于有明顯危害、可以通過(guò)空氣傳播的病原微生物（如結(jié)核桿菌、伯氏立克次體等），通常已有預(yù)防傳染的疫苗，該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室除了有嚴(yán)格的一級(jí)和二級(jí)安全設(shè)施要求外，還需具備合適的空氣凈化系統(tǒng)。四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL4）適用于對(duì)人體具有高度的危險(xiǎn)性，通過(guò)氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無(wú)有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。BSL4實(shí)驗(yàn)室必須與其他實(shí)驗(yàn)室隔離，并具備特殊的空氣和廢物處理系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)操作須在Ⅲ級(jí)生物安全柜內(nèi)或全身穿戴特制的正壓防護(hù)服。根據(jù)以上定義，醫(yī)院內(nèi)的臨床實(shí)驗(yàn)室因接觸可能含有致病微生物的標(biāo)本，通常應(yīng)達(dá)到二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室要求。根據(jù)《實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則》，二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)設(shè)施需符合以下幾點(diǎn)：（1）實(shí)驗(yàn)室需具有防止節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物進(jìn)入的設(shè)計(jì)，有可開(kāi)啟的窗戶，有紗窗，實(shí)驗(yàn)室門(mén)有可視窗帶鎖并能自動(dòng)關(guān)閉。（2）每個(gè)實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)設(shè)置洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處。（3）實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域外有足夠的存儲(chǔ)空間及擺放個(gè)人衣物的設(shè)施。（4）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)墻壁、地面應(yīng)平整、防滑、易于清潔，不適宜用地毯。（5）實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)能防水、耐腐蝕、耐熱。（6）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保證工作照明，避免反光和強(qiáng)光。（7）在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)穿戴隔離衣、帽、手套，必要時(shí)戴防護(hù)眼鏡。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有生物安全柜。（8）有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)施，如高壓蒸汽滅菌器，并設(shè)置洗眼裝置、應(yīng)急噴淋裝置、急救藥箱、滅火器等。（9）有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。（10）在實(shí)驗(yàn)室出口處設(shè)有在黑暗中可明確辨認(rèn)方向、通道的標(biāo)識(shí)。（11）在實(shí)驗(yàn)室入口處和裝有傳染性物質(zhì)的設(shè)備表面貼有生物危險(xiǎn)標(biāo)志。3．實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度實(shí)驗(yàn)室生物安全制度建設(shè)對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室而言是生物安全防護(hù)的核心，實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度、生物安全培訓(xùn)制度、生物安全責(zé)任制和責(zé)任追究制度、生物防護(hù)與安全制度、安全檢查制度、個(gè)人防護(hù)制度、實(shí)驗(yàn)室管理制度、清潔消毒制度、安全計(jì)劃審核制度、廢棄物處理制度、事故報(bào)告制度、生物安全防護(hù)應(yīng)急預(yù)案、標(biāo)準(zhǔn)操作程序等。建立健全了各項(xiàng)生物安全制度，還應(yīng)成立生物安全管理領(lǐng)導(dǎo)小組，加強(qiáng)生物安全制度實(shí)施情況的監(jiān)督管理，實(shí)驗(yàn)室入口處須粘貼生物安全標(biāo)志，注明危險(xiǎn)因素，生物安全級(jí)別，負(fù)責(zé)人姓名和電話，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求及離開(kāi)程序，禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，如需參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊行為需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。4．實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)生物危險(xiǎn)實(shí)驗(yàn)室生物污染的途徑包括：空氣傳播（臨床標(biāo)本中的污染源在空氣中傳播、微生物氣溶膠的吸入）、直接傳播（工作中偶然刺傷、割傷，碎玻璃劃傷直接感染）、皮膚粘膜接觸（臨床標(biāo)本中的傳染源通過(guò)破損皮膚粘膜接觸造成的感染）、其他不明原因的實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染。實(shí)驗(yàn)室傷害以及與工作有關(guān)的感染主要是由于人為失誤﹑不良實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及儀器使用不當(dāng)造成的。因此，實(shí)驗(yàn)室人員必須提高生物安全意識(shí)，認(rèn)真學(xué)習(xí)生物安全相關(guān)的各種法規(guī)和文件，定期進(jìn)行生物安全防護(hù)知識(shí)培訓(xùn)，熟悉生物防護(hù)有關(guān)知識(shí)，加強(qiáng)基本技能的培養(yǎng)，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程。實(shí)驗(yàn)室管理者應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別進(jìn)行分析，尤其對(duì)風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別較高的、接觸高危標(biāo)本幾率較大的區(qū)域如微生物和分子生物學(xué)室予以高度重視，保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境的安全。5．生物廢棄材料的管理實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有用過(guò)的樣本、培養(yǎng)物及其他生物性材料等廢棄物，嚴(yán)禁未經(jīng)處理就隨意丟棄，應(yīng)置于貼有生物危害標(biāo)志的專用廢棄物處理容器內(nèi)，注意容器的充滿量不能超過(guò)其設(shè)計(jì)容量，利器（如針頭、小刀、玻璃等）應(yīng)置于耐扎銳器盒內(nèi)，在去污染或最終處置前應(yīng)存放在指定的安全地方，經(jīng)過(guò)高壓滅菌或其他無(wú)害化處理后再安全運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室；有害氣體、氣溶膠、污水、廢液等均需經(jīng)無(wú)害化處理后排放；動(dòng)物尸體、組織的處置和焚化應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)要求。處理危險(xiǎn)廢棄物的人員需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，并使用適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)設(shè)備。第一章 微生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)實(shí)驗(yàn)一 細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及顯微鏡油鏡的使用【目的和要求】1．熟悉微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)則并自覺(jué)遵守。2．掌握細(xì)菌基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)的觀察方法。3．掌握光學(xué)顯微鏡油鏡的使用和維護(hù)方法，了解熒光顯微鏡和暗視野顯微鏡的構(gòu)造和使用方法?！驹噭┡c器材】1．示教片：各種球菌、桿菌、弧菌、莢膜、鞭毛、芽胞的示教片。2．器材及其他：光學(xué)顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、香柏油、脫油劑等?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】一、細(xì)菌基本形態(tài)和特殊構(gòu)造的觀察1．細(xì)菌的基本形態(tài)（各種球菌、桿菌、弧菌等）觀察要點(diǎn)：注意細(xì)菌的染色性、相對(duì)大小、形狀及排列方式。2．特殊結(jié)構(gòu)的觀察（莢膜、芽胞、鞭毛）觀察要點(diǎn)：注意這些特殊結(jié)構(gòu)的大小、形狀及其在菌體中的位置，均有助于細(xì)菌的鑒定。二、光學(xué)顯微鏡油鏡的使用1．光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造光學(xué)顯微鏡是觀察細(xì)菌形態(tài)最常用的一種儀器，其構(gòu)造分為機(jī)械部分和光學(xué)部分，機(jī)械部分包括：鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、鏡頭轉(zhuǎn)換器、調(diào)焦裝置等；光學(xué)部分包括：接物鏡、接目鏡、反光鏡、聚光器、光圈等（見(jiàn)圖11）。圖11 光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的接物鏡有低倍鏡、高倍鏡、油鏡三種，放大倍數(shù)依次增高，其識(shí)別方法為：（1）低倍鏡：鏡頭標(biāo)志為10或10/，鏡頭最短，其上?？逃悬S色環(huán)圈。（2）高倍鏡：鏡頭標(biāo)志為40或40/，鏡頭較長(zhǎng)，其上常刻有藍(lán)色環(huán)圈。（3）油鏡：鏡頭標(biāo)志為100或 100/，鏡頭最長(zhǎng)，其上常刻有白色環(huán)圈，或“oil”字樣。 2．油鏡的使用原理圖12 顯微鏡油鏡的使用原理油鏡的放大倍數(shù)高而透鏡很小，自標(biāo)本片透過(guò)的光線，因玻片和空氣的折光率不同（玻璃n=，空氣n=），部分光線經(jīng)載玻片進(jìn)入空氣后發(fā)生折射，不能進(jìn)入接物鏡，致使射入光線較少，物象不清晰。在油鏡和載玻片之間滴加和玻璃折光率相近的香柏油（n=），則使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光亮度增強(qiáng)，物象清晰（見(jiàn)圖12）。 3．使用方法（1）采光：使用顯微鏡時(shí)必須端坐，將顯微鏡放在胸前適當(dāng)位置。將低倍鏡轉(zhuǎn)到中央并對(duì)準(zhǔn)下面的聚光器，打開(kāi)光圈，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線集中于聚光器（以燈光為光源時(shí)，使用凹面反光鏡，以自然光為光源時(shí)用平面反光鏡）。根據(jù)所觀察的標(biāo)本，通過(guò)升降聚光器和縮放光圈以獲得最佳光度。當(dāng)用低倍鏡或高倍鏡觀察時(shí)，應(yīng)適當(dāng)縮小光圈，下降聚光器；當(dāng)用油鏡觀察時(shí)，光線宜強(qiáng)，應(yīng)把光圈完全打開(kāi)，并將聚光器上升到最高位置。（2）低倍鏡調(diào)焦：將欲觀察的標(biāo)本置載物臺(tái)上，用彈簧夾和推進(jìn)器固定，將待檢部位移至視野正中央，上升載物臺(tái)至不能升高為止。用左眼觀察接目鏡，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器，使載物臺(tái)下降，待看到模糊的圖像時(shí)，再調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器，直至看到清晰的圖像為止。（3）油鏡的使用：低倍鏡找到物象并調(diào)至清晰之后，轉(zhuǎn)開(kāi)物鏡頭，在玻片的標(biāo)本上滴加1滴香柏油，將油鏡頭轉(zhuǎn)換至中央，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器，使鏡頭浸入油中，當(dāng)油鏡頭幾乎接觸玻片時(shí)停止轉(zhuǎn)動(dòng)（從側(cè)面觀察），邊觀察接目鏡邊輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器（此時(shí)只能上升鏡頭，不能下降，防止壓壞玻片及損壞物鏡），待看到模糊物象時(shí)改調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器，直至找到清晰物象。鏡檢時(shí)應(yīng)將標(biāo)本按一定方向呈“弓”形移動(dòng)，直至整個(gè)標(biāo)本觀察完畢，以防漏檢。觀察時(shí)應(yīng)將兩只眼睛同時(shí)睜開(kāi)，左眼觀察，右眼用于繪圖或記錄。標(biāo)本觀察完畢后，先將物鏡頭移開(kāi)，再轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使載物臺(tái)下降，取下載玻片，立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。4．注意事項(xiàng)（1）顯微鏡是精密光學(xué)儀器，在搬放時(shí)應(yīng)右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，平端在胸前，輕拿輕放。（2）顯微鏡放到實(shí)驗(yàn)臺(tái)上時(shí)，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時(shí)與臺(tái)面接觸，這樣震動(dòng)過(guò)大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。（3）避免強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氯仿、乙醚、酒精等化學(xué)藥品與顯微鏡接觸，避免日光直射，顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。（4）接目鏡和接物鏡不要隨便卸下，必須抽取接目鏡時(shí)，須將鏡筒上口用布遮蓋，避免灰塵落入鏡筒內(nèi)。更換接物鏡時(shí)，卸下后應(yīng)倒置在清潔的臺(tái)面上，并隨即裝入木箱的置放接物鏡的管內(nèi)。（5）細(xì)調(diào)節(jié)器是顯微鏡最精細(xì)而脆弱的部分，不要向一個(gè)方向連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)周，應(yīng)輕微地來(lái)回旋轉(zhuǎn)。（6）鏡頭必須保持清潔，油鏡使用完后應(yīng)立即用擦鏡紙拭去香柏油。若油鏡鏡頭上的油跡未擦干凈，應(yīng)先將1:1醇醚混合液或二甲苯滴在擦鏡紙上擦拭鏡頭，再用干凈擦鏡紙將鏡頭上殘留的醇醚混合液或二甲苯擦凈。（7）顯微鏡擦凈后，取下標(biāo)本片，下降聚光器，再將物鏡轉(zhuǎn)成“品”字形，送至顯微鏡室放入鏡箱內(nèi)。三、暗視野顯微鏡1．構(gòu)造與原理：在顯微鏡上安裝一個(gè)特制的聚光器一暗視野聚光器。此聚光器中央為一黑板所遮，光線不能直接通向鏡筒，使視野背景黑暗。這樣，從聚光器周邊斜射到載玻片上細(xì)菌等微粒上的光線，就因散射作用而發(fā)出亮光，反射到鏡簡(jiǎn)內(nèi)。故在強(qiáng)光照射下，可在黑色的背景中看到發(fā)亮的菌體。正如我們?cè)诎凳覂?nèi)，能看到從隙縫漏入的陽(yáng)光內(nèi)，有無(wú)數(shù)顆塵埃微粒跳躍飛舞一樣。2．使用方法：（1）將顯微鏡聚光器御下，裝上暗視野聚光器，置暗室，使用人工光源。（2）先用低倍物鏡觀察，調(diào)節(jié)光環(huán)置中央后，在暗視野聚光器表面滴