【正文】 Ultravioletvisible Spectrometry (紫外 可見吸收光譜分析 ) Waters HPLC (W2695 pump, W2996DAD detector, automatic injector, Empower station) Column: Symmetry C18 (3. 9mm 150mm, 5μm)。 Mobile phase: methanol 1% acetic solution。 Temperature: 25℃ 。 Simultaneous detection of Ferulic acid and Gastrodin by HPLC RPHPLC 270 nm 標準品 323 nm 標準品 270 nm 樣品 323 nm 樣品 Melamine Mobile phase: hepane sulfonic sodium water solution: acetonitrile Phenomenex. Luna C8 ( . 250mm, 5μm) 。 流速 mL/min。 進樣量 : 20?L。 柱溫 : 30℃ 。 檢測波長 : 240nm Ionpair HPLC 1. Introduction to UVVis spectroscopy 2. Measurement of UVVis spectroscopy LambertBeer Law 3. Instrumentation of UVVis spectroscopy 4. Application of UVVis spectroscopy ? UVVis is molecular absorption spectroscopy P326 What are the nature of these absorptions? as UV or visible light irradiate molecules, electrons in the lowest molecular orbital may be excited and transferred to an orbital of higher energy. ?? h*MhM t0 II ? ??? ??+167。 1. Principles of UV Ee energies for electronic transition of atoms in the molecule Ev energies for vibration between two atoms Er energies for molecular rotation rve ΔΕΔΕΔΕΔΕ ++?討論： （ 1） rotational energy ΔΕr： ～ wavelength:25025?m farinfrared light Farinfrared Spectroscopy （ 2） vibrational energy ΔEv : 1 eV wavelength: 25 ?m infrared light IR （ 3） electronic energy ΔEe : 120 eV wavelength: ?m UVvis The shape of UV adsorption curve? Excitation from the ground electronic state can occur to more than one vibrational level and rotatioal sublevels. The adsorption bands are broad because each electronic energy level has multiple vibrational and rotaional energy levels associated with it. Electronic transitions P319 p, s, and n (nonbonding) electrons 167。 2. Basic knowledge of UV Sigma and Pi orbitals ?E s p n p* s* s→s* n→ s* p→ p* n→ p* 電子躍遷能級示意圖 10 100 200 300 400 500 600 700 800 波長 /nm lg? n→p* 6 5 4 3 2 1 p→ p* n→s* s→ s* n→p* 遠 UV區(qū) 近 UV區(qū) Vis區(qū) 電子躍遷所處的波長范圍及強度 (1) ss* – UV photon required, high energy ? Methane at 125 nm ? Ethane at 135 nm (2) n s* (a) The atoms with unshared electron pairs should be contained. (b) O, S, N, halogens (c) 150250 nm, not intense (3) pp* ? higher ? (1000 to 10000) unsaturated group（ —C＝ C—， —C＝ O） λ ? 200nm (4) np* lower ? (10 to 100) 含雜原子不飽和基團 （ C≡N， C＝ O) λ 200400nm（近紫外 ) (烯 ) （ 炔） （羰基） some basic glossary常用術語 (1) Chromophore 發(fā)色團 π→π＊ 和 n→π＊ doublebond or triple bond: P324 vinyl C=C carbonyl C=O nitroso azo group — N＝ N— ethynyl C≡C nitrile group — C ≡ N 如果兩個生色團相鄰、發(fā)生共軛作用，則原來 的各自的吸收帶將消失，并在較長的波長處產生強 度比原來吸收帶強的新吸收帶。 生色團 溶劑 ? /nm ?m ax 躍遷類型 烯 正庚烷 177 13000 p ? p * 炔 正庚烷 178 10000 p ? p * 羧基 乙醇 204 41 n ? p * 酰胺基 水 214 60 n ? p * 羰基 正己烷 186 1000 n ? p * ， n ? s * 偶氮基 乙醇 339 ， 665 150000 n ? p * ， 硝基 異辛酯 280 22 n ? p * 亞硝基 乙醚 300 ， 665 100 n ? p * 硝酸酯 二氧雜環(huán)己烷 270 12 n ? p * The mon chromophores: （ 2） auxochromes 助色團 The p—π conjugation makes the adsorption peak of chromophore move to the long wavelength and increase the strength. Such atoms or groups are called as auxochormes. 特點： 助色團一般是帶有 p電子的基團 . eg.： SR XNR 2ORNH 2OH 、 、 、 、 、 等C CC lHH H （ 3） red shift and blue shift If the adsorption peak moves to the longer wavelength by the introduce of lonepair electrons, it is called as red shift （ 長移或紅移 ), otherwise, blue shift（ 短移或藍移 )。 If the adsorption strength is increased, it is called as hyperchromic effect (濃色效應或增色效應 ), otherwise, hypochromic effect (淡色效應 ) P345 吸收帶是指吸收峰在紫外光譜中的譜帶位置，可分為四種類型 : 吸收帶類型 躍遷類型 ?max ?max 吸收峰特征 典型實例 R 吸收帶 n→ p* 100 270 弱