酶分子修飾壓縮ppt課件(已修改)
2025-01-20 05:48 本頁面
【正文】 酶分子修飾具抗原性不穩(wěn)定、活性不夠高、條件溫和高效性、專一性、反應酶??????什么是酶分子修飾？ ? 通過各種方法使酶分子的結構發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術過程稱為 酶分子修飾 。 酶分子修飾的意義 ? 穩(wěn)定酶的天然構象 ? 保護活性部位 ? 維持酶功能結構的完整性 ? 降低酶的抗原性 ? 改變酶學性質 回本章目錄 第一節(jié) 酶的化學修飾 ?化學修飾 ：在體外將酶分子通過人工的方法與一些化學基團（物質），進行共價連接，從而改變酶的結構和性質 。 ?即 利用修飾劑所具有的各種化學基團特性，直接或經(jīng)過一定的活化過程，與酶分子上某氨基酸殘基（一般盡量選酶活性非必需基團）產(chǎn)生化學反應，對酶分子結構進行改造 。 一、化學 修飾分類 ? （一）酶分子主鏈修飾 ? （二）酶分子側鏈基團修飾 ? （三）大分子結合修飾 ? （四）氨基酸置換修飾 ? （五）金屬離子置換修飾 ? （六）親和修飾 （一） 酶分子主鏈修飾 ?利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子的化學結構及其空間結構發(fā)生某些改變，從而改變酶的特性和功能的方法。 ?主鏈切斷修飾 ?主鏈連接修飾 主鏈切斷修飾 主鏈切斷的三種情況： ?活性中心破壞 —— 失活 ?活性中心完整 —— 保持活性，改變抗原性 ?有利于活性中心的形成 —— 顯示活性或活力提高 胃蛋白酶原的激活 H C l胃 蛋 白 酶 原p H 1 . 5 ～ 2（ 從 N 端 失 去 4 4 個 氨 基 酸 殘 基 ）自 身 激 活胃 蛋 白 酶胰蛋白酶原的激活 胰凝乳蛋白酶原的激活 主鏈連接修飾 ?將兩種或兩種以上的酶通過主鏈連接在一起，形成一個酶分子具有兩種或多種催化活性。 （二）酶分子側鏈基團修飾 ?酶蛋白的側鏈基團：指組成蛋白質的氨基酸殘基上的功能團。 ?包括：氨基（ NH2）、羧基（ COOH）、咪唑基、吲哚基、酚羥基、羥基、胍基、甲硫基等。 氨基修飾 ?使酶分子側鏈上的氨基發(fā)生改變的化合物，稱為氨基修飾劑 ?修飾劑 :乙酸酐、二硝基氟苯、碘代乙酸等。 ?含有氨基的氨基酸：賴氨酸等 羧基修飾劑 ?可與酶蛋白側鏈上的羧基發(fā)生反應的小分子化合物稱為羧基修飾劑。 ?修飾劑 :碳化二亞胺、甲醇 HCL、乙醇 HCL ?含有羧基的氨基酸：天門冬氨酸、谷氨酸等 巰基修飾劑 ?兩個巰基可以形成二硫鍵穩(wěn)定蛋白質結構，由于巰基具有很強的親核性，巰基一般是蛋白質分子中最容易反應的側鏈基團。 ?修飾劑：二硫蘇糖醇、巰基乙醇、硫代硫酸鹽等 胍基修飾劑 ?精氨酸殘基含有一個強堿性的胍基，很難被修飾，而一些二羰基化合物能夠在中性或弱堿性條件下與精氨酸反應，目前關于精氨酸的修飾的研究主要集中在二羰基化合物上。 酚基修飾劑 ?蛋白質的酪氨酸殘基上含有酚基。 ?修飾方法：碘化法、硝化法等 ?修飾劑： N乙酰咪唑、碘、四硝基甲烷等。 咪唑基修飾 ?組氨酸含有咪唑基，咪唑基多為酶活性中心的必須基團 ?修飾劑： 碘乙酸、焦炭酸二乙酯 吲哚基 色氨酸含有吲哚基，色氨酸殘基疏水性強，通常位于分子內(nèi)部，難于修飾 修飾劑： N－溴代琥珀酰亞胺 2－羥基－ 5－硝基芐溴 4－硝基苯硫氯 分子內(nèi)交聯(lián)修飾 ?含有 雙功能基團 的化合物（雙功能試劑）如戊二醛、己二胺 、葡聚糖、二乙醛等，可以在酶蛋白分子中相距較近的兩個基團之間形成共價交聯(lián)，從而提高酶的穩(wěn)定性的修飾方法 （三） 酶的大分子修飾 ?采用水溶性大分子與酶蛋白的側鏈基團 (共價 )結合使酶分子的空間構象發(fā)生改變，從而改變酶的特性與功能的方法 非共價修飾 使用一些能與酶非共價地相互作用而又能有效地保護酶的一些添加物，它們既能通過 氫鍵 固定在酶分子表面，也能通過 氫鍵 有效地與外部水相連，從而保護酶的活力。 ? 如 多元醇、多糖、多聚氨基酸、 蛋白質 。 ? 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通過 共價鍵 連接于酶分子的表面，形成一層覆蓋層。 共價修飾 大分子修飾 (
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