【正文】 項(xiàng)目名稱： 針刺對(duì)功能性腸病的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)及其機(jī)制 首席科學(xué)家： 朱兵 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所 起止年限： 至 依托部門： 國(guó)家中醫(yī)藥管理局 二、預(yù)期目標(biāo) 系統(tǒng)闡明穴位雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的臨床療效及其相關(guān)的生物學(xué)原理，為現(xiàn)代針灸學(xué)基礎(chǔ)理論的建立奠定科學(xué)基礎(chǔ)。 以針灸臨床理、法、術(shù)、效規(guī)律為主線，系統(tǒng)闡明機(jī)體狀態(tài)、穴位固有特性以及不同針刺方法在決定針刺雙向 調(diào)節(jié) 效應(yīng)中的作用規(guī)律及其機(jī)制。 調(diào)虛實(shí)、平陰陽(yáng)是針灸臨床治療的重要理論，反映的是針灸具有恢復(fù)機(jī)體穩(wěn)態(tài)的“雙向調(diào)節(jié)效應(yīng) ”，該效應(yīng)是在經(jīng)絡(luò)腧穴理論指導(dǎo)下，根據(jù)單穴及配穴的功能特性，通過(guò)穴位組合及刺激方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。機(jī)體和靶器官狀態(tài)是選穴的重要依據(jù)，穴位的組合和刺激方法是決定療效的關(guān)鍵因素。 其意義在于 揭示 穴位功能和機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的相關(guān)規(guī)律， 為解決穴位的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)奠定科學(xué)基礎(chǔ) ， 明確穴位 配伍 的協(xié)同 、 拮抗 關(guān)系和雙向調(diào)節(jié)規(guī)律， 形成建立在 科學(xué) 基礎(chǔ)上的穴位組方原則， 以 指導(dǎo)臨床和提高臨床療效 。 圍繞上述的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題， 選擇 功能性腸病 為切入點(diǎn)， 以 針灸傳統(tǒng)理論、針灸臨床實(shí)踐以及現(xiàn)代研究證據(jù)為指導(dǎo)，采用系統(tǒng) 生物學(xué) 、 腦 科學(xué)、基因敲除技術(shù)等多學(xué)科結(jié)合的 方法手段 ，系統(tǒng) 研究 針灸雙向調(diào)節(jié)效應(yīng) 的科學(xué) 機(jī)制 。闡明穴位功能和機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的相關(guān)性的規(guī)律 ， 揭示 針灸 雙向調(diào)節(jié)的規(guī)律和機(jī)制， 探討穴位配伍的機(jī)制 及 其生物學(xué) 基礎(chǔ) ， 闡述 對(duì)針灸學(xué)科發(fā)展具有 普適性規(guī)律的雙向調(diào)節(jié)理論， 指導(dǎo)臨床和進(jìn)一步 提高療效 。 三、研究方案 本項(xiàng)目選擇針灸臨床療效確切、診斷和評(píng)價(jià)指標(biāo)明確的臨床常見(jiàn)病 ―功能性腸病 （功能性腹瀉、功能性便秘） ‖作為研究的切入點(diǎn)，圍繞 ―針灸具有“調(diào)和陰陽(yáng)”的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng) ‖的假說(shuō)，系統(tǒng)研究針灸的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的理、法、術(shù)、效的規(guī)律和相 關(guān)的生物學(xué)基礎(chǔ)。闡述 ―針灸調(diào)整和維持機(jī)體 ―穩(wěn)態(tài) 系統(tǒng) ‖的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的臨床規(guī)律及相關(guān)的生物學(xué)基礎(chǔ) ‖這一針灸學(xué)的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題。 本項(xiàng)目建立針刺雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)數(shù)據(jù)采集與分析系統(tǒng) , 具備遠(yuǎn)程協(xié)同工作功能。實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)定性、定量分析功能；綜合查詢與分析報(bào)表緊密結(jié)合、流程化數(shù)據(jù)提取和形象化表達(dá)等。將采取健康人體、病人以及動(dòng)物多層次、多穴位、多指標(biāo)、系統(tǒng)研究的方法，觀察針刺治療功能性腹瀉和功能性便秘的雙向調(diào)節(jié) 的 治療效應(yīng)， 采用神經(jīng)科學(xué)、分子生物學(xué)、基因技術(shù)、生物信息學(xué)等科學(xué)理念和方法， 揭示這種效應(yīng)的生物學(xué)基礎(chǔ) ，歸納提升針灸學(xué)現(xiàn)代理論 。 針灸對(duì)臟腑病變具有恢復(fù)穩(wěn)態(tài)平衡的雙向調(diào) 節(jié)效應(yīng)，腧穴與相同節(jié)段神經(jīng)支配的內(nèi)臟器官在交感神經(jīng)控制下組成一個(gè)相對(duì)緊密聯(lián)系的結(jié)構(gòu)－功能性單元；圍繞這種結(jié)構(gòu)－功能性單元的異節(jié)段神經(jīng)支配區(qū)域經(jīng)穴形成一個(gè)可能通過(guò) 副交感神經(jīng) 通路發(fā)揮相悖效應(yīng)的功能性集元。單元經(jīng)穴和集元經(jīng)穴共同構(gòu)建軀體傳入信息調(diào)整和平衡內(nèi)臟功能的穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)。 副交感神經(jīng) 活動(dòng)偏亢的病癥主要取單元穴位，交感神經(jīng)活動(dòng)偏亢的病癥主要取集元穴位。功能性便秘和功能性腹瀉是腸道傳輸功能低下和亢進(jìn)所出現(xiàn)的兩種病變過(guò)程；前者是由于交感神經(jīng)緊張、 副交感神經(jīng) 興奮狀態(tài)降低，導(dǎo)致腸道傳輸功能低下引起；后者是由于 副交感神經(jīng) 興奮 亢進(jìn)，導(dǎo)致腸道傳輸功能過(guò)強(qiáng)引起。相應(yīng)的功能性集元穴位（我們選擇： 曲池 、上巨虛）可加強(qiáng) 副交感神經(jīng) 興奮，具有促進(jìn)腸傳輸?shù)墓δ?，達(dá)到治療功能性便秘的目的；功能性單元穴位（我們選擇天樞、大腸俞）可興奮 節(jié)段性 交感神經(jīng)，抑制副交感神經(jīng) ，具有降低腸傳輸?shù)墓δ?，達(dá)到治療功能性腹瀉的作用。單元穴位或集元穴位間的組合存在協(xié)同效應(yīng)；單元與集元穴位組合卻 可能 出現(xiàn)拮抗作用。這是針灸雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)發(fā)揮的生物學(xué)基礎(chǔ)。這一基礎(chǔ)得以明確，則可以為針灸臨床療效的提高、針灸臨床規(guī)律的掌握提供指導(dǎo)原則和科學(xué)基礎(chǔ) 。 具體研究方案見(jiàn)各課題任務(wù)書(shū)。 前二 年：建立動(dòng)態(tài)、多指標(biāo)穴位內(nèi)臟效應(yīng)數(shù)據(jù)采集與分析平臺(tái)和臨床及科研基地。并在此基礎(chǔ)上， 揭示穴位功能和機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的關(guān)系的規(guī)律性 ，開(kāi)展針刺不同組合穴位組方對(duì)功能性腹瀉和功能性便秘的臨床觀察研究。完成針刺不同穴位對(duì)腸運(yùn)動(dòng)的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)研究。 擬 發(fā)表 3040 篇學(xué)術(shù)論文，其中爭(zhēng)取在 SCI 源刊上發(fā)表論文 8 篇 左右 。 后三年： 主要完成針刺不同組合穴位組方對(duì)功能性腹瀉和功能性便秘的臨床觀察研究。完成針刺不同穴位對(duì)腸道功能性紊亂變化的雙向調(diào)節(jié)作用與自主神經(jīng)功能的關(guān)系和穴位對(duì)腸道功能性病治療作用與藥物劑量強(qiáng)度關(guān)系的量化研究 此 部分工作將發(fā)表論文 3545 篇 ，其中爭(zhēng)取在 SCI 源刊發(fā)表論 文 10 篇 左 右 ，并編撰研究專著 1 部 。 四、年度計(jì)劃 第一年 研究?jī)?nèi)容： 1． 開(kāi)展項(xiàng)目啟動(dòng)的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作、項(xiàng)目研究數(shù)據(jù)平臺(tái)的構(gòu)建。 2． 完成各臨床研究中心倫理委員會(huì)審批手續(xù)；完成臨床試驗(yàn)注冊(cè)；完成臨床試驗(yàn)研究者工作手冊(cè)、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（ SOP）、 CRF 表的制定；完成臨床研究人員培訓(xùn)、考試；啟動(dòng)臨床研究；成立臨床研究質(zhì)量控制小組；制定臨床研究統(tǒng)計(jì)計(jì)劃書(shū)。 3． 進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究準(zhǔn)備工作，包括采購(gòu)相關(guān)實(shí)驗(yàn)器材、動(dòng)物引種及繁殖、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境的完善、電針預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)研究人 員的培訓(xùn)等。必要時(shí)與國(guó)外相關(guān)機(jī)構(gòu)開(kāi)展合作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)條件完善及人員培訓(xùn)。 4． 研究健康志愿者和功能性腸病患者穴位敏感度的變化，采用 Electronic Von frey 檢查穴區(qū)的觸覺(jué)敏感度，溫度測(cè)定儀測(cè)定穴區(qū)的溫度敏感度， Weber 靜態(tài)兩點(diǎn)分辨覺(jué)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)各敏化穴位和非敏化穴位兩點(diǎn)感覺(jué)分辨閾的變化關(guān)。 5． 建立動(dòng)態(tài)、多指標(biāo)穴位內(nèi)臟效應(yīng)數(shù)據(jù)采集與分析平臺(tái)。并在此基礎(chǔ)上，研究穴位功能和機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的關(guān)系的規(guī)律性，開(kāi)展針刺不同穴位對(duì)腸運(yùn)動(dòng)的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)研究、針刺不同組合穴位組方對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的協(xié)同作用和拮抗作用研究、β 2 受體基因敲除對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)功能影響的研究工作。 預(yù)期目標(biāo) 1． 完成項(xiàng)目啟動(dòng)的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作，召開(kāi)項(xiàng)目啟動(dòng)會(huì)議。初步 建立動(dòng)態(tài)、多指標(biāo)穴位內(nèi)臟效應(yīng)數(shù)據(jù)采集與分析平臺(tái)。 2． 獲得各臨床研究中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)文件；取得臨床試驗(yàn)國(guó)際統(tǒng)一注冊(cè)號(hào)；制作成冊(cè)研究者工作手冊(cè)、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（ SOP）、 CRF 表；召開(kāi)臨床研究人員培訓(xùn)會(huì)，組織培訓(xùn)、考試；發(fā)放考核合格者結(jié)業(yè)證書(shū)；召開(kāi)臨床研究啟動(dòng)會(huì)；提交臨床研究質(zhì)量控制小組名單；提交臨床研究統(tǒng)計(jì)計(jì)劃書(shū)。 3． 完成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究準(zhǔn)備工作，使實(shí)驗(yàn)條件符合研究需要，研究人員掌握相關(guān)的技術(shù)。確定實(shí)驗(yàn)相關(guān) 參數(shù)，成功獲得相關(guān)模型動(dòng)物， 4． 確定針刺不同穴位對(duì)腸功能調(diào)節(jié)效應(yīng)的基本特征（調(diào)節(jié)趨向、調(diào)節(jié)量）。 5． 確定健康志愿者和功能性腸病患者穴位敏化現(xiàn)象。 6． 完成β 2 受體基因敲除對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)功能影響的部分研究工作。 7． 發(fā)表研究論文 6 篇， SCI 論文 1 篇。 第二年 研究?jī)?nèi)容： 1． 完成針刺對(duì)功能性便秘、腹瀉雙向調(diào)節(jié)作用各 40%的臨床病例收集；完成量 效關(guān)系研究 40%的臨床病例收集。 2． 觀察測(cè)定敏化穴區(qū)致痛物質(zhì)的分布和含量，探討致敏穴位組織是否存在致敏生物活性物質(zhì)的改變。 3． 在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別研究針刺功能性單元穴位（天樞、大腸俞）對(duì)腸 道運(yùn)動(dòng)的抑制作用，與不同劑量的阿托品抑制腸道運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)作比較，量化針刺強(qiáng)度等同于多大的藥物劑量。 4． 觀察樣本 100 例，系統(tǒng)研究針刺不同穴位對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的影響。觀察不同取穴對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的調(diào)制強(qiáng)度與規(guī)律，探討不同穴位的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的規(guī)律。建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的造模，觀察病理模型的針刺雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)。 5． 進(jìn)一步研究穴位功能和機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的關(guān)系的規(guī)律性，開(kāi)展針刺不同組合穴位組方對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的協(xié)同作用和拮抗作用。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用球囊和埋藏電極法記錄腸內(nèi)壓力和腸電的改變，同時(shí)記錄內(nèi)臟大神經(jīng)和迷走神經(jīng)活動(dòng)，觀察不同穴位刺激在調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng) 的同時(shí)對(duì)自主神經(jīng)系統(tǒng)的效應(yīng)。 6． 開(kāi)展β 2 受體激動(dòng)劑和拮抗劑對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)作用影響的研究工作，同時(shí)察脊髓側(cè)角的誘發(fā)電位及相關(guān)信號(hào)物質(zhì)的變化。 7． 準(zhǔn)備中期檢查 預(yù)期目標(biāo) 1． 提供與年度計(jì)劃任務(wù)相應(yīng)數(shù)量的 CRF 表資料。 2． 明確針刺穴位有雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)。在不同的生理病理情況下，針刺引起的效應(yīng)是不同的，但這種效應(yīng)都是糾正機(jī)體機(jī)能活動(dòng)向正常平衡與穩(wěn)態(tài)狀態(tài)方向的良性調(diào)節(jié)。 3． 揭示功能性腸病患者穴位敏化穴位的 局部組織細(xì)胞化學(xué)特征 4． 明確針刺穴位可能有協(xié)同和拮抗作用的雙向效應(yīng)。探討這種協(xié)同作用和拮抗作用的穴位組合云和的生物學(xué)原理，為臨床穴 位組學(xué)奠定科學(xué)基礎(chǔ)。 5． 完成針刺雙向調(diào)節(jié)與交感神經(jīng)功能關(guān)系的研究任務(wù)。完成脊髓側(cè)角（交感初級(jí)中樞）介導(dǎo)電針雙向調(diào)節(jié)作用的研究。 6． 完成研究論文 1418 篇。 SCI 論文 1 篇 7． 匯總相關(guān)數(shù)據(jù)，進(jìn)行項(xiàng)目研究總體分析，完成中期總結(jié)和評(píng)估。 第三年 研究?jī)?nèi)容： 1． 完成針刺對(duì)功能性便秘、腹瀉雙向調(diào)節(jié)作用各 40%的臨床病例收集；完成量 效關(guān)系研究 40%的臨床病例收集。 2． 研究?jī)?nèi)臟病理情況下“穴位”感覺(jué)敏化度的變化及相應(yīng)組織深部微理化環(huán)境的變化，特別是與感受器敏化相關(guān)的物質(zhì)變化，闡明其在穴位從沉寂到敏化過(guò)程中的作用。研究導(dǎo)致穴位敏 化的受體機(jī)制。 3． 研究針刺功能性集元穴位（曲池、上巨虛）對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用，與不同劑量的乙酰膽堿促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)作比較，量化針刺強(qiáng)度等同于多大的藥物劑量。 4． 觀察樣本 100 例，研究針刺不同強(qiáng)度電針對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的影響和對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的調(diào)制機(jī)制與規(guī)律，探討植物神經(jīng)系統(tǒng)在針刺的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的作用。同時(shí)研究孤束核增強(qiáng)和抑制神經(jīng)元與胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)與遲緩的關(guān)系。 5． 研究穴位配伍協(xié)同和拮抗效應(yīng)與內(nèi)臟大神經(jīng)和迷走神經(jīng)活動(dòng)的關(guān)系，觀察不同穴位刺激在調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng)的同時(shí)對(duì)自主神經(jīng)系統(tǒng)的效應(yīng)。 6． 采用激活不同組織感受器或傳入神經(jīng)纖維的電針?lè)?法刺激穴位，觀察對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)的影響，明確針刺效應(yīng)與穴位不同組織感受器之間的關(guān)系。 7． 開(kāi)展 M M3 受體基因敲除對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)功能影響、 M 受體激動(dòng)劑和拮抗劑對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)作用影響的研究工作，同時(shí)觀察脊髓側(cè)角的誘發(fā)電位及相關(guān)信號(hào)物質(zhì)的變化。 預(yù)期目標(biāo)： 1． 提供與年度計(jì)劃任務(wù)相應(yīng)數(shù)量的 CRF 表資料 2． 揭示功能性腸病疾病動(dòng)物模型穴位敏化的定位、組織細(xì)胞化學(xué)特征；揭示穴位敏化的受體機(jī)制。 3． 明確植物神經(jīng)系統(tǒng)在針刺的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)的作用。闡述孤束核神經(jīng)元活動(dòng)與胃腸運(yùn)動(dòng)變化之間的關(guān)系 4． 明確針刺穴位可能有協(xié)同和拮抗作用所涉及與植物神 經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系；以及這種協(xié)同和拮抗作用與經(jīng)絡(luò)或神經(jīng)節(jié)段之間的關(guān)系，為臨床穴位組學(xué)提供科學(xué)數(shù)據(jù) 5． 完成針刺雙向調(diào)節(jié)與副交感神經(jīng)功能關(guān)系的研究及脊髓側(cè)角（副交感初級(jí)中樞）介導(dǎo)電針雙向調(diào)節(jié)作用的研究。 6． 匯總相關(guān)數(shù)據(jù)，進(jìn)行項(xiàng)目總體進(jìn)程分析。 7． 完成研究論文 1618 篇。 SCI 論文 34 篇。 第四年 研究?jī)?nèi)容： 1. 完成針刺對(duì)功能性便秘、腹瀉雙向調(diào)節(jié)作用各 20%的臨床病例收集；完成量 效關(guān)系研究 20%的臨床病例收集。 2. 研究穴位敏化反應(yīng)與纖維直徑的關(guān)系，推論穴位激活相關(guān)的神經(jīng)類型。 3. 應(yīng)用腺苷受體或膠質(zhì)細(xì)胞特異性縫隙連接蛋白（ Cx43）基因敲除動(dòng)物建立功能性便秘和腹瀉模型，采用不同刺激強(qiáng)度電針（腹瀉：天樞、大腸俞；便秘：曲池、上巨虛），應(yīng)用 MRI 觀察針刺強(qiáng)度、治療效應(yīng)與大腦皮層之間的內(nèi)在聯(lián)系。 4. 研究調(diào)節(jié)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)特異性的物質(zhì)（ CRF)在功能性腸病的變化、蛋白的表達(dá)以及針刺不同穴位對(duì)其影響，分析針刺調(diào)節(jié)結(jié)腸活動(dòng)的分子生物學(xué)機(jī)制。 5. 采用胃黏膜應(yīng)變片電極記錄腸道活動(dòng)，分析與腸消化、運(yùn)動(dòng)相關(guān)的生物活性物質(zhì)（如胃動(dòng)素、胃泌素等）的變化，觀察不同穴位刺激對(duì)腸道消化、運(yùn)動(dòng)的影響和對(duì)排便功能的作用。 6. 開(kāi)展 Trpv1 受體基因敲除對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)功 能影響、 Trpv1 受體激動(dòng)劑和拮抗劑對(duì)針刺雙向調(diào)節(jié)作用影響的研究工作。 預(yù)期目標(biāo)： 1. 提供與年度計(jì)劃任務(wù)相應(yīng)數(shù)量的 CRF 表資料 2. 揭示功能性腸病疾病動(dòng)物模型穴位敏化的外周敏化機(jī)制 3. 明確在針刺的雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)中的相關(guān)生物活性物質(zhì)的變化和相關(guān)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。闡述這些物質(zhì)變化與胃腸運(yùn)動(dòng)之間的關(guān)系。 4. 進(jìn)一步明確針刺穴位可能有的協(xié)同和拮抗作用與穴位不同組織感受器之間的關(guān)系；以及這種協(xié)同和拮抗作用與經(jīng)絡(luò)或神經(jīng)節(jié)段之間的關(guān)系。為穴位組學(xué)的建立提供科學(xué)數(shù)據(jù)。 5. 完成傷害性感受器與針刺雙向調(diào)節(jié)作用的關(guān)系研究、電針雙向調(diào)節(jié)中傷害性感 受器功能狀態(tài)與初級(jí)中樞關(guān)系的研究。 6. 發(fā)表研究論文 1820 篇， SCI 論文 3 篇。 7. 匯總相關(guān)數(shù)據(jù)，完善研究平臺(tái)。 第五年 研究?jī)?nèi)容： 1． 臨床研究資料數(shù)據(jù)管理（匯總、錄入、審查等）以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。 2． 開(kāi)展內(nèi)臟病變和穴位敏化相關(guān)的脊髓機(jī)制。結(jié)合以往研究探討穴位的生理和病理特性，揭示穴位反映病邪的診斷方面的特異性規(guī)律。 3． 研究不同大小動(dòng)物針刺效應(yīng)與針刺的數(shù)量之間的關(guān)系，研究單個(gè)穴位刺激對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)強(qiáng)度之間的差異，通過(guò)不同大小動(dòng)物的研究，了解選穴數(shù)量與療效之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。 4． 研究針刺協(xié)同和拮抗作用與穴位不同的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)的 相關(guān)性。 5． 補(bǔ)充整體研究計(jì)劃