【正文】 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫管理 文件編號(hào)： CDEYLABXKGL27 版本 /修訂號(hào) ： A/0 主題內(nèi)容 輸血實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和管理制度 生效日期： 20210808 第 1 頁 共 2 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 2 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 3 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ABO 血型鑒定（鹽水法） 1 原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無 A抗原或 /和 B抗原，將血型分為 A型、 B型、 AB型和 O型 4種。可利用紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定 ABO 血型。所謂正定型，是用已知抗 A和抗 B 分型血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的 A抗原或 /和 B抗原；所謂反定型，是用已知 A細(xì)胞和 B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗 A或 /和抗 B。 2 標(biāo)本采集： 標(biāo)本種類：采集靜脈血 34ml 待凝固后分離血清，將紅細(xì)胞用 %生理鹽水配成 5%紅細(xì)胞懸液。 ：抗凝要求 EDTAK2抗凝管或干燥管均可。 標(biāo)本應(yīng)無溶血，標(biāo)簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。 3 標(biāo)本儲(chǔ)存 ：操作完標(biāo)本 4℃冰箱保存 7天。 4 標(biāo)本運(yùn)輸 ：室溫運(yùn)輸。 5 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) ：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本標(biāo)簽填寫內(nèi)容不齊全或有涂改、標(biāo)本量太少不能作檢測(cè)。 6 試劑 Ⅰ名稱： ABO血型定型試劑（人血清） Ⅰ生產(chǎn)廠家：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所、四川協(xié)和生物技術(shù)有限責(zé)任公司 Ⅰ組成 試劑 A血清，效價(jià) 256， 28℃避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用。 試劑 B血清，效價(jià) 128， 28℃避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用 . Ⅱ名稱：人 ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑 Ⅱ生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司 Ⅱ組成： A B及 O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。 7 儀器 ： 802上海手術(shù)器械廠 ：上海醫(yī)療器械廠 ： OLYMPUS(日本 ) 8 操作步驟及結(jié)果判斷： 取潔凈小試管（內(nèi)徑 10mm*60mm） 3支，分別標(biāo)明抗 A、抗 B和抗 A+B，用滴管分別成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 4 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 加抗 A、抗 B和抗 A+B。分型血清各 1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5%紅細(xì)胞鹽水懸液 1滴， 混合。 （內(nèi)徑 10mm*60mm） 3支，分別標(biāo)明 A、 B和 O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 2滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、 B和 O型 5%試劑紅細(xì)胞懸液 1滴，混合。 1000r/min離心 1min。 ，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。 如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 ，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 A、 B亞型、類 B或 cisAB的發(fā)現(xiàn)。 4 + = 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3 + = 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 2 + = 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。 1 + = 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。 +/ = 鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。 MF = 混合凝集外觀（ mixed field）是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍成分散分布。 — 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。 161報(bào)告受檢者紅細(xì)胞 ABO血型 取清潔玻片 1張（或白瓷板 1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗 A、抗 B 和抗 A+B，分別用滴管滴加抗 A、抗 B和抗 A+B分型血清 2滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2%紅細(xì)胞懸液 1滴，混合。 （或白瓷板 1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明 A細(xì)胞、 B細(xì)胞和 O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 2滴，再分別用滴管滴加 A、 B和 O型試劑紅細(xì)胞懸液 1滴。 ，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15min，以肉眼觀察有無凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片作試驗(yàn)時(shí)，也可用 低倍鏡觀察結(jié)果。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 5 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 表 161 ABO血型正反定型結(jié)果 分型血清 +受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清 +試劑紅細(xì)胞 抗 A 抗 B 抗 A+B A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 + – + A – + – – + + B + – – – – – O + + – + + + AB – – – 注： + = 凝集； — = 不凝集 9 操作性能 ：快速簡便，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。 10超出范圍結(jié)果處理 ： 細(xì)胞自凝：在冬天 氣溫較低時(shí)，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致假陽性；若有此懷疑，建議在最后滴入懸浮液時(shí)將試管立即置入 37℃水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混勻，并在 30秒內(nèi)觀察結(jié)果。 5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。 ，常見者有以下幾種：分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗 A血清效價(jià)不高，可將 A亞型誤定為 O型， AB型誤定為 B型。 ，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血病或惡性腫瘤）以及類 B或 cisAB等。 （高球蛋白血癥），或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。 A及 /或抗 B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 6 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 ，如自身抗 I，常引起干擾。 。 如發(fā)現(xiàn) ABO正反定型結(jié)果不一致，首先要重復(fù)試驗(yàn) 1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題必須進(jìn)一步研究。初步的檢查步驟包括： 1份新鮮血液標(biāo)本，這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。 將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成 5%鹽 水細(xì)胞懸液，用抗 A、抗 B、抗 A1，抗 A+B 及抗 H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。 ，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。 用 A A B、 O紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑時(shí)抗 I，用 O型（或ABO相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。 ，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和 4oC放置 30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。 A抗原或 B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗 A或抗 B血清作吸收及放射試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A、 B、 H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì) 80%HAB分泌型的人有用。 ，加等滲鹽水 1滴，混合，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 1滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。 A型血而疑為有類 B抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別： （ 1） 觀察細(xì)胞與抗 A及抗 B的凝集強(qiáng)度，與抗 A的反應(yīng)要比與抗 B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。 （ 2） 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗 B不凝集自身紅細(xì)胞上的類 B抗原。 （ 3） 檢查唾液中是否有 A、 B物質(zhì)， 如果時(shí)分泌型，可檢出 A物質(zhì)而無 B物質(zhì)。 （ 4） 核對(duì)患者的診斷，類 B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。 ，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的 Cad抗原活性；被細(xì)菌酶激活的 T或 TK受體；或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的 Tn受體所引起。多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)： ⑴能被人和許多家兔的血清凝集。 ⑵能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。 ⑶不被臍帶血清凝集。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ01 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 ABO 血型鑒定（鹽水法） 生效日期： 20210211 第 7 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital ⑷通常不與自身的血清凝集。 ⑸ 如有條件可用外源凝集素加以鑒別。 11注意事項(xiàng) ，用畢后應(yīng)放置冰箱保存， 以免細(xì)菌污染。 、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 試劑紅細(xì)胞以 3 個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。 IgM抗 A 和抗 B 與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4oC 為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍再室溫（ 20~24oC）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)， 37oC可使反應(yīng)減弱。 ，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 、記錄，避免筆誤。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學(xué)出版社， 1997， P89 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ02 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 Rh（ D）血型鑒定 （鹽 水法） 生效日期： 20210211 第 8 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital Rh（ D）血型鑒定（鹽水法） 1 原理： 一般臨床上根據(jù)紅細(xì)胞表面 D抗原的有無，將 Rh血型分為 RH陰性和陽性。如果紅細(xì)胞表面有 D抗原，與細(xì)胞株 BS226細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集，為 RH陽性，如不發(fā)生凝集，表明紅細(xì)胞表明沒有 D抗原，為 RH陰 性。 2 標(biāo)本采集： 標(biāo)本種類：采集靜脈血 34ml 待凝固后分離血清，將紅細(xì)胞用 %生理鹽水配成 5%紅細(xì)胞懸液。 ：抗凝要求 EDTAK2抗凝管或干燥管均可。標(biāo)本應(yīng)無溶血，標(biāo)簽填寫內(nèi)容齊全，無涂改。 3 標(biāo)本儲(chǔ)存 ：操作完標(biāo)本 4℃冰箱保存 7天。 4 標(biāo)本運(yùn)輸 ：室溫運(yùn)輸。 5 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) ：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本標(biāo)簽填寫內(nèi)容不齊全或有涂改、標(biāo)本量太少不能作檢測(cè)。 6 試劑 ： RhD(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體） ：德國 。28℃避光保存，有效期為 1年，在效期內(nèi)用。 7 儀器 ： 802上海手術(shù)器械廠 ：上海醫(yī)療器械廠 ： OLYMPUS(日本 ) 8 操作步驟及結(jié)果判斷 1滴抗 D試劑。 2滴 2%5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于抗 D混合試劑中。 D試劑。 。 4 + = 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ02 版本 /修訂