【正文】 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 冰凍血漿解融操作規(guī)程 1 目的 融化新鮮冰凍血漿，使冰凍血漿從固態(tài)裝化解為液態(tài)狀，利于臨床輸注。循環(huán)的水流既能加快冰凍血漿與水的熱交換，又能使冰凍血漿快速安全的溶解至適合人體輸入的溫度。 5 操作 ：按《 KHR1型冰凍血漿融化箱》使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行安裝 ，連接進(jìn)水管、排水管 若顯示屏顯示“缺水”時(shí)，請(qǐng)采用人工加水，當(dāng)水位達(dá)到時(shí)，儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)入預(yù)溫狀態(tài)。 ：將冰凍血漿裝入袋內(nèi)，再掛在解凍架上放妥當(dāng)，并用架上壓桿壓住，按確定。具體方法：在圖 2狀態(tài)下，按動(dòng)“左右”鍵使“清洗”反顯，再按“確定”，及其進(jìn)入清洗狀態(tài)。使用蒸餾水的用戶也必須每周清洗換水。具體方法如下：在關(guān)機(jī)狀態(tài)下，按住面板上的“上下”檔開(kāi)機(jī)，循環(huán)泵隨即打開(kāi)，加熱箱內(nèi)的水上升至解凍槽內(nèi)，溫度窗口顯示即時(shí)水溫。最后按一次“確定”鍵確認(rèn)即完成效正。 ，沒(méi)半年對(duì)水溫測(cè)試是否與版面溫度顯示相同。 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學(xué)出版社， 1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 13 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 交叉配血（凝聚胺法） ： 在臨床用血前將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。 申請(qǐng)輸用手工血小板的 標(biāo)本。 原理 凝聚胺是帶有高價(jià)陽(yáng)離子的多聚季銨鹽 ,溶解后能產(chǎn)生大量正電荷，可以大量中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞之間的排斥力，使紅細(xì)胞彼此之間的距離縮小，出現(xiàn)正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集：低離子強(qiáng)度溶液降低了紅細(xì)胞的 Zeta 電位，進(jìn)一步增強(qiáng)抗原抗體間的引力，增強(qiáng)了血型抗體凝集紅細(xì)胞的能力。 . 標(biāo)本采集 標(biāo)本種類(lèi)：新抽取的抗凝血 標(biāo)本要求： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 2ml 的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 標(biāo)本采集要求 采血時(shí)，一定要認(rèn)真核對(duì)病室、床號(hào)和病人姓名，無(wú)誤后再抽血。 血標(biāo)本標(biāo)簽填寫(xiě)必須與申請(qǐng)單上的病人姓名、科別、床號(hào)、編號(hào)完全一致。 采血時(shí)要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強(qiáng)抽血時(shí)）在病人輸液時(shí)采集標(biāo)本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。急診搶救輸血，未能事先采 血檢測(cè)血型，則要求注明急診字樣由專(zhuān)人核對(duì)、貼標(biāo)簽、采取血標(biāo)本送檢。 . 標(biāo)本運(yùn)輸 室溫 運(yùn)輸 . 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 . 試劑 試劑名稱(chēng)： 凝聚胺介質(zhì)試劑 試劑生產(chǎn)廠家： 珠海貝索生物技術(shù)有限公司 試劑 組成 ： 低離子溶液，凝聚胺溶液，懸浮液 器 ： 802上海手術(shù)器械廠 ，以 3000r/min離心 3分鐘，分離上層受、供著血清或血漿，并在壓積紅細(xì)胞制成 5%受、供著紅細(xì)胞生理鹽水懸液。 LISS液 ，再加凝聚胺液 2滴，混合均勻。 ，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，必須重做 。 2滴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如果凝集不散開(kāi)，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。 如果主側(cè)管和次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集散開(kāi)，則為凝集胺引起的非特異性，表示配血結(jié)果相合，可以輸用。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ04 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （凝聚胺法） 生效日期： 20210211 第 15 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 7 注意事項(xiàng) 若受血者用血量大，需要 10個(gè)以上獻(xiàn)血員時(shí)，獻(xiàn)血員間也要進(jìn)行交叉配血。 ，可影響配血結(jié)果的判斷。 ，應(yīng)盡快觀察結(jié)果，以免反應(yīng)減弱或消失。 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司編，全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版） .南京：東南大學(xué)出版社， 1997， 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 16 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 交叉配血（微柱凝膠法） ： 在臨床用血前將患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。 申請(qǐng)輸用手工血小板的標(biāo)本。 交叉配血就是將 患者血清和血細(xì)胞分別與獻(xiàn)血員血細(xì)胞和血清進(jìn)行主次測(cè)交叉配 試驗(yàn)，以排除各種因素引起的輸血反應(yīng)（如凝集或溶血），保證用血安全。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。 血標(biāo)本容器要清潔干燥并事先貼好標(biāo)簽，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對(duì)、無(wú)誤后再將血液注入。 采血者要在申請(qǐng)單和 標(biāo)本標(biāo)簽上簽名，寫(xiě)清采血時(shí)間，及時(shí)送檢。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 17 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 非急診病人輸血前，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫(xiě)在輸血申請(qǐng)單上，以便核對(duì)。 標(biāo)本儲(chǔ)存 待測(cè)標(biāo)本在 28℃ 下的保存時(shí)間為 72小時(shí) ，已檢測(cè)標(biāo)本 28℃ 冰箱保存 7天。 。（約定：第 1管為主側(cè)，第 2管為次側(cè)，以此類(lèi)推） ： 受血者紅細(xì)胞：用 40uL加樣槍取 40uL 受血者積壓紅細(xì)胞（ RBC）加入備好 1mL生理鹽水的試管中，混勻；制成 4%的紅細(xì)胞懸液；取下吸頭，換上 10uL 加樣槍?zhuān)?10uL 此4%的紅細(xì)胞懸液加入次側(cè)管中。 ： 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 18 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 40uL加樣槍取 40uL受血者血清加入主側(cè)管； 40uL加樣槍取 40uL獻(xiàn)血員血清加入次側(cè)管 10分鐘； 5分鐘 ，記錄。 10. 操作性能 凝膠微柱法 為國(guó)際安全輸血檢查的推薦方法； 測(cè)試結(jié)果安全可靠：對(duì)不完全抗體不會(huì)漏檢，在交叉配血過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可預(yù)防因 IgG類(lèi)抗體引起的輸血反應(yīng)。大多數(shù)傳統(tǒng)測(cè)試法仍然依賴(lài)于對(duì)液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋?zhuān)捎谌狈陀^性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。 靈敏度 高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測(cè)結(jié)果可較長(zhǎng)時(shí)間保存 加樣時(shí)先加紅細(xì)胞后加血清。 11 注意事項(xiàng) 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會(huì)帶來(lái)錯(cuò)誤的陰或陽(yáng)性結(jié)果； 因?yàn)閮?chǔ)運(yùn)不當(dāng)?shù)脑颍袝r(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類(lèi)似的凝膠卡前先離心，消除這類(lèi)問(wèn)題，如果無(wú)法消除，請(qǐng)棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內(nèi)膠量不足或干裂 ，請(qǐng)不要 使用 ； 用 非達(dá)亞美 2號(hào) 稀釋液來(lái)配制紅血球懸液可能會(huì)導(dǎo)致不良結(jié)果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應(yīng)相 符 。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。 不完全抗體即 ABO 系統(tǒng)以外其它系統(tǒng)的抗體 ,也稱(chēng)為免疫抗體 .多為 IgG,單倍體抗體，長(zhǎng)度約 24nm ，多經(jīng)妊娠或輸血后免疫產(chǎn)生。 抗體篩查就是利用 3瓶抗體篩選細(xì)胞與待檢（患者）血清反應(yīng)，如果待檢（患者）血清中存在抗體，則應(yīng)該可以和這 3瓶抗體篩選細(xì)胞中至少 1瓶顯示反應(yīng)。如果紅細(xì)胞沉積在凝膠管底部，表明紅細(xì)胞未發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陰性；如果紅細(xì)胞聚集在凝膠上 部或中部，表明紅細(xì)胞發(fā)生凝集，即凝集實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。 ，加血標(biāo)本前要認(rèn)真核對(duì)、無(wú)誤后再將血液注入 。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗(yàn) （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 21 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital ，寫(xiě)清采血時(shí)間，及時(shí)送檢。 ，應(yīng)事先采取血標(biāo)本作血型鑒定，填寫(xiě)在輸血申請(qǐng)單上，以便核對(duì)。 待 測(cè)標(biāo)本在 28℃ 下的保存時(shí)間為 48小時(shí) 室溫保存 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 6. 試劑 試劑名稱(chēng)： DiaMed凝膠卡、 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（ %） 、達(dá)亞美 2號(hào)稀釋液（ Dil2） 試劑生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 試劑說(shuō)明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個(gè)微孔管 (兩人份 )組成 DiaMedID Micro Typing System 離心機(jī)： IDCentrifuge 12 SⅡ 孵育器： IDIncubator 37 SⅠ 生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達(dá)亞美 ） 8. 操作步驟 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)抗體篩查細(xì)胞（ %） ， 2 號(hào)稀釋液室溫平衡。 三管中分別加入抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細(xì)胞 50ul 三管中均加入 25ul待檢樣本血漿或血清 37℃孵育 15分鐘 離心 10分鐘，判斷結(jié)果，記錄。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 血庫(kù) SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗(yàn) （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 22 頁(yè) 共 48 頁(yè) Laboratory of Chengdu People’s Hospital 10. 臨床意義 ： 在交叉配血試驗(yàn)前或輸血前，提前進(jìn)行抗體篩選和鑒定檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，提醒臨床醫(yī)生需提前備血，以防緊急用血時(shí)找不到相容的獻(xiàn)血員； 抗篩可以縮短交叉配血時(shí)間，快速獲得相容的供血 通過(guò)抗體篩選 /鑒定試驗(yàn)，可以提高不相容性檢出率（ %）。而如果常規(guī)作抗體篩選 /鑒定和交叉配血，則可避免漏檢，達(dá)到 100%的準(zhǔn)確性。大多數(shù)傳統(tǒng)測(cè)試法仍然依賴(lài)于對(duì)液體環(huán)境下凝集反應(yīng)的解釋?zhuān)捎谌狈陀^性的反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)果的判讀準(zhǔn)確性因人而易。 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好，避免主觀判讀結(jié)果的影響； 檢測(cè)結(jié)果可較長(zhǎng)時(shí)間保存 加樣時(shí)先加紅細(xì)胞后加血清。 12. 注意事項(xiàng) 變質(zhì)的或受到細(xì)菌等物污染的樣品，試劑可能會(huì)帶來(lái)錯(cuò)誤的陰或陽(yáng)性結(jié)果； 因?yàn)閮?chǔ)運(yùn)不當(dāng)?shù)脑?，有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)微管的頂部存 在 小水珠或 氣 泡，在使用類(lèi)似的凝膠卡前先離心，消除這類(lèi)問(wèn)題，如果無(wú)法消除，請(qǐng)棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn) DiaMed卡封口損壞，或者 管內(nèi)膠量不足或干裂，請(qǐng)不要 使用 ； 使用 非達(dá)亞美 2 號(hào) 稀釋液來(lái)配制紅血球懸液可能會(huì)導(dǎo)致不良結(jié)果 ， 所用的紅血球的懸液濃度 與 建議使用的濃度 應(yīng)相 符 。 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序可以檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集 。目的在于避免血清里的抗體提前被抗人球試劑中和，從而造成假陰性結(jié)果。把效價(jià)視為抗體的含量，在臨床輸血檢驗(yàn)中用于鑒定標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)的測(cè)定，以檢測(cè)抗血清試劑的質(zhì)量。 試劑 B血清，效價(jià) 128， 28℃避光保存，有效期為一年，在效期內(nèi)使用 . Ⅱ Ⅱ名稱(chēng)：人 ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑 Ⅱ生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司 Ⅱ組成： A B及 O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。以抗體稀釋后仍能與抗原紅細(xì)胞出現(xiàn)肉眼明顯可見(jiàn)凝聚的最高血清稀釋倍數(shù)來(lái)表示抗體的效價(jià)。110管的稀釋度分別為 1： 1， 1： 2， 1： 4， 1： 8， 1： 16， 1： 32， 1： 64， 1： 128， 1： 256，1： 512。 A或 B及 O細(xì)胞用生理鹽水稀釋為 2%濃度。 ：于另外 10支試管中每管加入 2%O紅細(xì)胞懸液 。 以 3000r/min 離心 1 分鐘，以出現(xiàn)（ +）凝集