【正文】 生物制品生產(chǎn)和檢定用 動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程 本規(guī)程適用于人用生物制品生產(chǎn) /檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)，包括具有細(xì)胞庫體系的細(xì)胞及原代細(xì)胞。細(xì)胞基質(zhì)系指可用于生物制品生產(chǎn) /檢定的所有動(dòng)物或人源的連續(xù)傳代細(xì)胞系、二倍體細(xì)胞株及原代細(xì)胞。 生產(chǎn)非重組制品所用的細(xì)胞基質(zhì)，系指來源于未經(jīng)修飾的用于制備其主細(xì)胞庫的細(xì)胞系 /株和原代細(xì)胞。生產(chǎn)重組制品的細(xì)胞基質(zhì)，系指含所需序列的、從單個(gè)前體細(xì)胞克隆的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)，系指通過親本骨髓瘤細(xì)胞系與另一親本細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞系。 一、對生產(chǎn)用細(xì)胞庫細(xì)胞基 質(zhì)總的要求 用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞系 /株均須通過全面檢定，須具有如下相應(yīng)資料，并經(jīng)國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。 （一）細(xì)胞系 /株歷史資料的要求 1. 細(xì)胞系 /株來源資料 應(yīng)具有細(xì)胞系 /株來源的相關(guān)資料，如細(xì)胞系 /株制備機(jī)構(gòu)的名稱，細(xì)胞系 /株來源的種屬、年齡、性別和健康狀況的資料。這些資料最好從細(xì)胞來源實(shí)驗(yàn)室獲得，也可引用正式發(fā)表文獻(xiàn)。 人源細(xì)胞系 /株須具有細(xì)胞系 /株的組織或器官來源、種族及地域來源、年齡、性別及生理狀況的相關(guān)資料。 動(dòng)物來源的細(xì)胞系 /株須具有動(dòng)物種屬、種系、飼養(yǎng)條件、組織或器官來源、地域來源、 年齡、性別、病原體檢測結(jié)果及供體的一般生理狀況的相關(guān)資料。 如采用已建株的細(xì)胞系 /株，應(yīng)從具有一定資質(zhì)的細(xì)胞保藏中心獲取細(xì)胞，且應(yīng)提供該細(xì)胞在保藏中心的詳細(xì)傳代過程，包括培養(yǎng)過程中所使用的原材料的相關(guān)信息，具有細(xì)胞來源的證明資料 。 2．細(xì)胞系 /株培養(yǎng)歷史的資料 應(yīng)具有細(xì)胞分離方法、細(xì)胞體外培養(yǎng)過程及建立細(xì)胞系 /株過程的相關(guān)資料，包括所使用的物理、化學(xué)或生物學(xué)手段，是否有外源添加序列，以及細(xì)胞生長特征、生長液成分、選擇細(xì)胞所進(jìn)行的任何遺傳操作或選擇方法等。同時(shí)還應(yīng)具有細(xì)胞鑒別、檢定、內(nèi)源及外源因子檢查 結(jié)果的相關(guān)資料。 應(yīng)提供細(xì)胞培養(yǎng)液的詳細(xì)成分，如使用人或動(dòng)物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物學(xué)活性的物質(zhì)，應(yīng)具有這些成分的來源、制備方法及質(zhì)量控制、檢測結(jié)果和質(zhì)量保證的相關(guān)資料。 （二）細(xì)胞庫的建立 細(xì)胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供已標(biāo)定好的、細(xì)胞質(zhì)量相同的、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞種子。 1．原材料的選擇 建立細(xì)胞庫的各種類型細(xì)胞的供體均應(yīng)符合 本規(guī)程‘ 細(xì)胞的檢定’中相關(guān)規(guī)定。神經(jīng)系統(tǒng)來源的細(xì)胞不得用于生物制品生產(chǎn)。 細(xì)胞培養(yǎng)液中不得使用人血清，如需使用人血白蛋白，則須使用有批準(zhǔn)文號的合格制品 。 消化細(xì)胞用胰蛋白酶應(yīng)進(jìn)行檢測，證明其無細(xì)菌、真菌、支原體或病毒污染。特別應(yīng)檢測胰蛋白酶來源的動(dòng)物可能攜帶的病毒，如細(xì)小病毒等。 用于生物制品生產(chǎn)的培養(yǎng)物中不得使用青霉素或β 內(nèi)酰胺 (β Lactam)類抗生素。配制各種溶液的化學(xué)藥品應(yīng)符合《中國藥典》（二部）或其他相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)的要求。 2．細(xì)胞操作的環(huán)境要求 細(xì)胞培養(yǎng)的操作應(yīng)符合中國《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。生產(chǎn)人員應(yīng)定期檢查身體。在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)不得進(jìn)行非生產(chǎn)制品用細(xì)胞或微生物的操作；在同一工作日進(jìn)行細(xì)胞操作前，不得操作或接觸有感染性的微生物或動(dòng)物。 3．建立細(xì)胞庫 細(xì)胞庫為三級管理，即原始細(xì)胞庫、主細(xì)胞庫及工作細(xì)胞庫。如為引進(jìn)的細(xì)胞，可采用 主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫組成的二級細(xì)胞庫管理。在某些特殊情況下，也可使用 MCB 一級庫，但須得到國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門的批準(zhǔn)。 （ 1）原始細(xì)胞庫 (PCB) 由一個(gè)原始細(xì)胞群體發(fā)展成傳代穩(wěn)定的細(xì)胞群體，或經(jīng)過克隆培養(yǎng)而形成的均一細(xì)胞群體，通過檢定證明適用于生物制品生產(chǎn)或檢定。在特定條件下，將一定數(shù)量、成分均一的細(xì)胞懸液，定量均勻分裝于安瓿，于液氮或 130℃以下凍存，即為原始細(xì)胞庫，供建立主細(xì)胞庫用。 （ 2）主細(xì)胞庫 (MCB) 取原始細(xì)胞庫細(xì)胞，通過一定方式進(jìn)行傳代、增殖后均勻混合成一批，定量分裝，保存于液氮或 130℃以下。這些細(xì)胞必須按其特定的質(zhì)控要求進(jìn)行全面檢定，應(yīng)合格。主細(xì)胞庫用于工作細(xì)胞的制備，每個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的主細(xì)胞庫最多不得超過兩個(gè)細(xì)胞代次。 （ 3）工作細(xì)胞庫 (WCB) 工作細(xì)胞庫的細(xì)胞由 MCB 細(xì)胞傳代擴(kuò)增制成。由 MCB 的細(xì)胞經(jīng)傳代增殖， 達(dá)到一定代次水平的細(xì)胞，合并后制成一批均質(zhì)細(xì)胞懸液，定量分裝于安瓿或適宜的細(xì)胞凍存管，保存于液氮或 130℃以下備用，即為工作細(xì)胞庫。每個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的工作細(xì)胞庫必須限定為一個(gè)細(xì)胞 代次。凍存時(shí)細(xì)胞的傳代水平須確保細(xì)胞復(fù)蘇后傳代增殖的細(xì)胞數(shù)量能滿足生產(chǎn)一批或一個(gè)亞批制品。 復(fù)蘇后細(xì)胞的傳代的水平應(yīng)不超過批準(zhǔn)的該細(xì)胞用于生產(chǎn)限制最高限定代次。所制備的 WCB 必須經(jīng)檢定合格（見 本規(guī)程‘ 細(xì)胞檢定’中有關(guān)規(guī)定）后，方可用于生產(chǎn)。 4．細(xì)胞庫的管理 每種細(xì)胞庫均應(yīng)分別建立臺帳，記錄放置位置、容器編號、分裝及凍存數(shù)量，取用記錄等。細(xì)胞庫中的每支細(xì)胞安瓿或細(xì)胞凍存管均應(yīng)注明細(xì)胞系 /株名、代次、批號、編號、凍存日期，儲存容器的編號等。 凍存前細(xì)胞活力應(yīng)在 90%以上，復(fù)蘇后細(xì)胞存活率應(yīng)不低于 85%。凍存 后的細(xì)胞，應(yīng)至少作一次復(fù)蘇培養(yǎng)并連續(xù)傳代至衰老期，檢查不同傳代水平的細(xì)胞生長情況。 主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫分別存放。非生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)與生產(chǎn)用細(xì)胞嚴(yán)格分開存放。 （三）細(xì)胞檢定 細(xì)胞檢定主要包括以下幾個(gè)方面：細(xì)胞鑒別、外源因子和內(nèi)源因子的檢查、致瘤性檢查等。必要時(shí)還須進(jìn)行細(xì)胞染色體核型檢查。這些檢測內(nèi)容對于 MCB細(xì)胞和 WCB 細(xì)胞及生產(chǎn)限定代次細(xì)胞均適用。 細(xì)胞檢定的基本要求見下表 1。細(xì)胞庫建立后應(yīng)至少對 MCB 細(xì)胞及生產(chǎn)終末細(xì)胞進(jìn)行一次全面檢定。每次從 MCB 建立一個(gè)新的 WCB，均應(yīng)按規(guī)定項(xiàng)目進(jìn)行檢定。 表 細(xì)胞檢定項(xiàng)目要求 *生產(chǎn)終末細(xì)胞 :是指按生產(chǎn)規(guī)模制備的終末代次細(xì)胞。 1．細(xì)胞鑒別試驗(yàn) 新建細(xì)胞系 /株、細(xì)胞庫 (MCB 和 WCB)和生產(chǎn)終末細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，以確認(rèn)為本細(xì)胞，無其他細(xì)胞的交叉污染。細(xì)胞鑒別試 驗(yàn)方法有多種，包括細(xì)胞形態(tài)、生物化學(xué)法 (如同工酶試驗(yàn) )、免疫學(xué)檢測 (如 HLA、種特異性抗血清 )、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測 (如染色體核型、標(biāo)記染色體檢測 )、遺傳標(biāo)志檢測 (如 DNA 指紋圖譜、 STR圖譜、基因組二核苷重復(fù)序列 )等。 可選其中一種或幾種方