20xx核酸檢測(cè)基本知識(shí)-文庫(kù)吧
2024-10-17 10:47 本頁(yè)面
【正文】 可在2h內(nèi)將RNA模板擴(kuò)增約109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物進(jìn)行擴(kuò)增。整個(gè)反應(yīng)分非循環(huán)相和循環(huán)相:在非循環(huán)相中,引物I與模板RNA退火后在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA退火,在反轉(zhuǎn)錄酶作用下合成第2條DNA互補(bǔ)鏈。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經(jīng)其啟動(dòng)子序列起動(dòng)而轉(zhuǎn)錄RNA，RNA又可在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄成DNA，進(jìn)入循環(huán)相,對(duì)模板進(jìn)行大量擴(kuò)增。TMA技術(shù)原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及T7RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶既有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性又具有RNA酶H活性。℃進(jìn)行,可在1h內(nèi)將RNA模板擴(kuò)增約109倍。(LCR)LCR是基于靶分子依賴(lài)的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴(kuò)增技術(shù)，是繼PCR后新發(fā)展的一種較有前景的體外擴(kuò)增技術(shù)。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交,當(dāng)該2段DNA探針與沒(méi)有發(fā)生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒(méi)有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來(lái),連接以后的新鏈又可以作為模板,引導(dǎo)下一周期的連接產(chǎn)生新的子鏈。若連接區(qū)段發(fā)生核苷酸的堿基突變,則連接反應(yīng)不能發(fā)生,擴(kuò)增反應(yīng)終止。(PCR)PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至9
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