20xx核酸檢測基本知識(文件)
【正文】 組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點。DNA應(yīng)置于20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應(yīng)置于80℃保存。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴增。自動化核酸擴增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測定。（4）應(yīng)在完成檢測后5個工作日內(nèi)發(fā)出檢測報告。（2）HIV核酸檢測陽性：發(fā)現(xiàn)核酸陽性反應(yīng)，應(yīng)該重復(fù)采集樣品進(jìn)行復(fù)測，復(fù)測結(jié)果呈核酸陽性反應(yīng)則判定為核酸陽性，復(fù)測結(jié)果為核酸陰性反應(yīng)則判為不確定結(jié)果，需進(jìn)一步隨訪檢測。擴增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較，判斷擴增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。使用商品化RTPCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴增反應(yīng)。在擴增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。：使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說明書操作。通過發(fā)光強度來定量,因為發(fā)光強度與樣品中HIVRNA含量成比例。后者再與放大探針即bDNA探針雜交?！猙DNAbDNA是定量檢測血漿中的HIV1型RNA的一種方法。本技術(shù)的原理是使用熒光基團(tuán)標(biāo)記探針,5′端標(biāo)記熒光基團(tuán)R,3′端標(biāo)記淬滅基團(tuán)Q,在沒有PCR擴增時,由于熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)空間距離很近,使熒光基團(tuán)被淬滅,不發(fā)熒光。③引物的延伸：DNA模板—引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNT
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