20xx核酸檢測(cè)基本知識(shí)-閱讀頁(yè)
2024-10-17 10:47本頁(yè)面
【正文】 高、有效解決了PCR污染問題等特點(diǎn)。bDNA是指人工合成的帶有側(cè)鏈的DNA片段,在其每個(gè)側(cè)鏈上都可以標(biāo)記被激發(fā)的標(biāo)記物。捕獲探針2與病毒RNA的另一部分特異結(jié)合,又與預(yù)放大探針結(jié)合。兩套靶探針分別與病毒RNA的pol基因的不同區(qū)域特異結(jié)合。再加入1種化學(xué)發(fā)光底物孵育后可放大化學(xué)發(fā)光信號(hào)。bDNA不存在擴(kuò)增物的交叉污染,這較PCR是一大進(jìn)步。檢測(cè)步驟HIV核酸定性檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)過程分為核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、PCR擴(kuò)增反應(yīng)、擴(kuò)增產(chǎn)物定性分和結(jié)果判定和完成報(bào)告單。提取RNA時(shí)應(yīng)注意防止RNA降解。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。建議使用商品化RTPCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。（使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法）PCR反應(yīng)需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性內(nèi)切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。（1）實(shí)驗(yàn)成立的條件：每一次檢測(cè)需同時(shí)做兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照、兩個(gè)陰性對(duì)照，只有陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增出預(yù)期的片段、陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增出任何片段、雙份平行樣品結(jié)果一致的情況下實(shí)驗(yàn)才成立，可以作出核酸陽(yáng)性或陰性反應(yīng)結(jié)果的判定。（3）HIV核酸檢測(cè)陰性：只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性。
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